Directed Evolution Method in <em>Saccharomyces cerevisiae</em>: Mutant Library Creation and Screening

Javier Vi&#241;a-Gonzalez; David Gonzalez-Perez; Miguel Alcalde

doi:10.3791/53761

指向進化方法でサッカロマイセス・セレビシエ：変異体ライブラリーの作成およびスクリーニング

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Biology

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Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

指向進化方法でサッカロマイセス・セレビシエ：変異体ライブラリーの作成およびスクリーニング

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10:50 min

April 1, 2016

DOI: 10.3791/53761-v

Javier Viña-Gonzalez¹, David Gonzalez-Perez¹, Miguel Alcalde¹

¹Department of Biocatalysis,Institute of Catalysis, CSIC

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

私たちは、Saccharomyces cerevisiaeの指向性進化キャンペーンのための突然変異体ライブラリを構築し、スクリーニングするための詳細なプロトコルを提示します。

このプロトコルの全体的な目標は、指向性進化実験のために出芽酵母の変異体ライブラリを構築およびスクリーニングする方法を示すことです。この方法は、アセンブルやクローニングにオーバーラップ領域をどのように割り当てるかなど、焦点を絞った指向性進化実験のためのラボ作成における重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、そのシンプルさと堅牢性であり、たった1つの変換ステップで高品質のレベルを割り当てることができます。

変異体ライブラリを作成およびスクリーニングするためのこのプロトコルは、真菌のアリールアルコールオキシダーゼまたはAAOについて実証されます。焦点を絞った指向性進化の領域は、まず、利用可能な酵素の結晶構造または相同性モデルに基づく計算アルゴリズムの助けを借りて選択されます。AAOの2つの領域、すなわちM1領域とM2領域がランダム変異誘発と組換えの対象となります。

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