使用した金ナノ粒子の効率的な放射性標識のために最適化されたプロトコル ¹²⁵ I標識アジド補綴グループ

このプロトコルの全体的な目標は、ひずみ促進銅フリークリック反応を使用して、放射性ヨウ素標識金ナノ粒子の効率的かつ迅速な合成方法を提供することです。この方法は、約3年で標識された放射性同位体の合成や、パッドまたはスペックイメージング研究のための定期的なイメージングプローブなど、放射化学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、金色の粒子で標識された1〜5個のヨウ素を、優れた放射性化学的収率と放射性化学的純度を持つアジド補欠基を使用して効率的に合成できることです。

この方法の視覚的なデモンストレーションは、無線評価のステップを学ぶのが難しいため、非常に重要です。このような手順には適切な施設が必要であり、無線ラベリングの経験を処理する必要があるためです。この研究に加えて、ラジオの学生であるHa Eun Shimが手順を実演します。

ラジオヨウ素化反応を行うには、1.5 mLチューブに前駆体溶液を添加します。室温で前駆体溶液に10マイクロリットルの酢酸を加えます。次に、50マイクロリットル中のヨウ素125の150メガベカレル、0.1モルの水酸化ナトリウムを反応混合物に加えます。

クロラミンT溶液を加え、反応混合物の入った微量遠心チューブを閉じます。反応混合物を室温で15分間インキュベートし、ラジオヨウ素化反応が完了します。次に、反応混合物にメタ重亜硫酸ナトリウム溶液を加えて、ラジオヨウ素化反応を急冷します。

0.2マイクロリットルの粗製品を引き出し、次に100マイクロリットルの50%アセトニトリルで水で希釈して、高速液体クロマトグラフィーまたはHPLC分析を行います。希釈した粗製品を逆相分析ラジオHPLCで分析します。反応混合物全体をHPLCバイアルに移します。

反応チューブを0.5mLのアセトニトリルですすぎ、すすぎを同じ注入バイアルに加えます。.採取した溶液を1mLの水で希釈します。粗製品を修復型HPLCで精製するには、粗製品を分取ラジオHPLCに注入します。

アジドと標識されたヨウ素125を表す放射性ピークをガラス試験管に集めます。メーカーのプロトコルに従って、放射能線量キャリブレーターを使用して画分の放射性化学的収率を測定します。次に、製品のラジオケミカル純度を決定するのと同じHPLC条件を使用して、精製した製品を分析ラジオHPLCに注入します。

製品の固相抽出を行うには、目的の製品を含む画分を40 mLの純水で希釈します。希釈した溶液を前処理済みのTC18カートリッジに加えます。カートリッジを追加の15 mLの水で洗います。

カートリッジに閉じ込めた製品を2 mLのアセトンとともに、鉛シールドで保護された10 mLガラスバイアルに溶出します。メーカーのプロトコルに従って、放射能線量キャリブレーターを使用して溶出製品の放射能を測定します。アセトンを蒸発させた後、次のラジオラベリングステップのために、残留物を100〜200マイクロリットルのDMSOで溶解します。

テキストプロトコルに記載されているように、DBCO基修飾金ナノ粒子の合成を行います。DBCO基修飾金ナノ粒子の濃縮溶液を遠心分離法を用いて調製します。そして、金ナノ粒子の濃度を2マイクロモルに調整します。

5マイクロリットルのDMSO中に4.1メガベカレルのヨウ素125標識アジドを5マイクロリットルのDMSOの懸濁液に50マイクロリットルの2マイクロモル金ナノ粒子を加えます。得られた反応混合物を摂氏40度で60分間インキュベートします。原油製品から0.2マイクロリットルのアロコートを取り出し、シリカコードされた薄層クロマトグラフィーまたはTLCプレートに適用します。

酢酸エチルを移動相として用いたTLCプレートを開発します。TLCプレートをラジオTLCスキャナーに置き、スキャナーを実行して、メーカーのプロトコルに従ってラジオラベリング反応を監視します。ヨウ素125標識金ナノ粒子を含む反応混合物を遠心分離により精製します。

上清をデカントし、金ナノ粒子ペレットの再懸濁のために純水を加えます。精製された製品から0.2マイクロリットルのアロコートを取り出し、シリカコーティングされたTLCプレートに塗布します。酢酸エチルを移動相として用いたTLCプレートを開発します。

TLCプレートを無線TLCスキャナーに置き、スキャナーを実行して、メーカーのプロトコルに従って、ヨウ素125標識金ナノ粒子の放射性化学的収率と放射性化学的純度を決定します。ここには、ヨウ素125標識アジド補綴群の代表的な結果が示されています。75%の放射性化学的収率は、放射能線量キャリブレーターを使用して決定されました。

分析用ラジオHPLCの結果は、製品の優れた放射化学的純度を示しています。ここには、ヨウ素125標識金ナノ粒子の代表的な結果が示されています。ラジオTLC分析は、精製された金ナノ粒子の放射性化学的収率と純度の両方が95%以上であったことを示していますこの技術を習得すると、適切に実行されれば3時間で実行できます。

この技術の意味は、本方法における標識化学が非常に効率的で容易であるため、核イメージング治療目的のための様々な分子プローブの調製にまで及びました。放射性ヨウ素の取り扱いは非常に危険である可能性があるため、この手順を実行するときは、ライターのレンガや軽い靴などの予防策を常に講じる必要があることを忘れないでください。