Name: 非キレート化ガドリニウム（III）のためのアプタマーベースのセンサー (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: 学ぶアプタマーベースの蛍光センサーによる非キレート化ガドリニウム（III）イオンの検出法。サブミクロモル濃度の毒性イオンを高選択的に検出し、MRI造影剤の品質管理と安全性確保に貢献します。

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貴重な科学的インプットをいただいたコロンビア大学のMilan N Støjanovic博士に感謝いたします。この研究は、カリフォルニア州立大学イーストベイ校(CSUEB)とCSUEBファカルティサポートグラント-個人研究者からの資金提供によってサポートされています。O.E.、T.C.、およびALは、CSUEB学生研究センター(CSR)フェローシップの支援を受けました。

注：分子生物学グレードの水は、すべての緩衝液および溶液製剤で使用されます。すべて使い捨てチューブ（微量とPCR）およびピペットチップはDNase-とRNaseフリーです。使用前に、すべての化学物質のための材料安全データシート（MSDS）を参照してください。適切な個人保護具（PPE）の使用を強くお勧めします。 アプタマーストック溶液の調製<ol><li>商業的にポリデオキシヌクレオチドの2本鎖を購入します。高速液体クロマトグラフィー（HPLC）による精製との両方の鎖を注文します。 ストランド1（GD-アプタマー）： 5 &#39; - / 56-FAM / AGGCTCTCGGGACGACCAGTTGGTCCCGCTTTATGTGTCCCGAG-3&#39; ストランド2（QS）： 5&#39;-GTCCCGAGAGCCT / 3Dab / -3 &#39; </li><li> Gd-アプタマーとQSの100μMの個々の原液を作るために水の中に各鎖を溶かします。 </li><li> -20℃でこれらのソリューションを保管してください。ソリューションはこれまで、3年間安定です。 </li><li> freezを最小限に抑えるために、電子融解サイクル、10μLのアリコートで原液を格納します。 </li></ol> 2倍のGd-センサーソリューションの調製<ol><li>アッセイ緩衝液を調製し（20mMのHEPES、2mMのMgCl 2を、150mMのNaCl、5mMのKClを）。 NaOHおよびHClでpHに〜7.4に調整し、0.2μmのPES膜で滅菌使い捨てボトルトップフィルターでろ過します。滅菌瓶に保管してください。濾過し、（室温で）適切に保存されている場合、バッファはこれまで、2年間安定です。 </li><li> （ステップ1.2から）のGd-アプタマー原液の1μLおよびアッセイ緩​​衝液497μL（ステップ1.2から）QS原液の2μLに希釈します。ボルテックスを用いてよく混ぜます。 2XのGdセンサ液中の濃度は、それぞれ、200 nmおよび400 nMです。 注： -検量線造影剤溶液のためのGd 3+の7様々な濃度のこの工程で調製したGd 2×センサー溶液の体積は、6をテストするのに十分である500μL、あります（ステップ3）。各サンプルは、384ウェルプレートに二連のウェルを与えます。 <ol><li>テストする必要のGd 3+ソリューションの数に応じて2倍のGd-センサーソリューションの音量を調整します。 </li></ol></li><li>各チューブに50μLで、9 PCRチューブに2倍のGd-センサー・ソリューションを転送します。サーマルサイクラーにチューブを入れます。 </li><li> 95°Cまでのチューブ内の溶液を加熱するサーマルサイクラーにプログラムを設定し、5分間保持し、その後、ゆっくりの速度で（15分〜かけて25℃にソリューションを冷却〜0.05から0.1℃/秒）。加熱と冷却のサイクルは、GdのアプタマーとQS間の最適なハイブリダイゼーションを確実にすることです。不完全焼入れとセンサーの高いバックグラウンド蛍光の部分的なハイブリダイゼーションの結果。サーマルサイクラーを使用できない場合は、代わりに、湯浴を用いてこの処理を行います。 </li><li>一度25℃に冷却し、直ちに解決策を使用するか、またはこと準備ができるまで（約2時間まで）サーマルサイクラーに保ちます中古。水浴を加熱するために使用される場合、水がゆっくりと室温まで冷却するように、浴中でチューブを残します。 </li></ol> 3.蛍光検量線の構築及びGd造影剤の溶液に非キレート化のGd 3+の存在を検出します<ol><li>アッセイ緩衝液中の固体のGdCl 3（ステップ2.1と同じバッファ）を溶解します。 </li><li>連続希釈によって、検量線（2回ソリューション）の最終的な所望の濃度の二重で100μLマイクロ遠心チューブ内の6異なるのGd 3+の溶液のそれぞれを準備します。 <ol><li>たとえば、0の校正（NOのGdCl 3と緩衝液のみ）、50、100、200、400、及びGd 3+の800 nMのを構築0、100、200、400、800を含有する溶液を調製し、1,600 nmのイオンの。常にネガティブコントロールとして0 nMでのGd 3+との「空白」を必ず含めてください。 </li></ol></li><li>試験であることが造影剤を溶解アッセイ緩​​衝液中で編。連続希釈を介して造影剤溶液の2または3種の異なる濃度を準備します。 注：造影剤溶液の3種の異なる濃度のテストをお勧めします。これは、これらの濃度は線形の範囲内にあることを保証することです。試験した試料は直線関係が表示されない場合は、使用する造影剤の濃度を低下させます。 </li><li>サーマルサイクラーのうちステップ2.5から2倍のGd-センサー溶液を含むPCRチューブを取ります。 </li><li> 2倍のGd-センサー・ソリューションを含む9 PCRチューブの6にステップ3.2からそれぞれのGd 3+溶液50μLを追加します。ピペッティングにより混和します。各PCRチューブは今のGd 3+テストされる、100 nMのGdの-アプタマー、および200 nMのQSの所望の濃度が含まれています。 </li><li> 2倍のGd-センサー・ソリューションを含む残りのPCRチューブに、ステップ3.3からの造影剤溶液の50μLを追加します。ピペッティングにより、数回上下よく混ぜます。 </li><li>秒をインキュベート室温で約5分間のPCRチューブ内olutions。彼らは、最大30分間放置してもよいです。 </li><li> 384ウェルプレートに各チューブの45μLを転送します。各PCRチューブは、二連のウェルが得られます。 </li><li>プレートリーダーで各ウェルの蛍光を記録します。供給業者のウェブサイトに掲載されているとしてのGd-センサ設計で使用されるフルオロフォア（FAM）は、それぞれ495および520 nmでの励起および発光極大を有しています。プレートリーダーはmonochromator-またはフィルタベースであるかどうかに応じて、適切な励起波長および発光波長やフィルタを選択してください。 </li><li> Gd 3+の濃度に対する任意の蛍光単位（AFU）における蛍光のグラフをプロットします。 </li><li> Gd 3+の濃度に対する蛍光倍率変化としてグラフをプロットします。 （GD 3+の0 nMので）「ブランク」ソリューションのAFUにより各濃度のAFUを分割することにより、蛍光倍率変化を計算します。蛍光倍数変化は、nが可能になります結果のormalization、AFU表示いくつかの定期的な（異なる日、 等 ） が変動する必要があります。 </li><li> 0 nMでのGdCl 3（緩衝液のみ）を含む溶液で造影剤を含む溶液と、「ブランク」の蛍光発光を比較します。 注：GBCA溶液の高い蛍光は、造影剤の更なる精製を必要とすることができる非キレート化のGd 3+の存在を意味します。非キレート化のGd 3+の量は、工程3.10または3.11で作成した検量線を用いて推定することができます。 </li></ol>

<ol><li>Shen, C., New, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promising+strategies+for+Gd-based+responsive+magnetic+resonance+imaging+contrast+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Promising strategies for Gd-based responsive magnetic resonance imaging contrast agents.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 17 (2), 158-166 (2013).</li>
<li>Cheong, B. Y. C., Muthupillai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nephrogenic+systemic+fibrosis%3A+a+concise+review+for+cardiologists%5BTitle%5D)+AND+%22Tex.+Heart+Inst.+J%22%5BJournal%5D)">Nephrogenic systemic fibrosis: a concise review for cardiologists.</a> Tex. Heart Inst. J. 37 (5), 508-515 (2010).</li>
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<li>Cleveland, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatographic+methods+for+the+quantification+of+free+and+chelated+gadolinium+species+in+MRI+contrast+agent+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chromatographic methods for the quantification of free and chelated gadolinium species in MRI contrast agent formulations.</a> Anal. Bioanal. Chem. 398 (7), 2987-2995 (2010).</li>
<li>Edogun, O., Nguyen, N. H., Halim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+single-stranded+DNA-based+assay+for+detecting+unchelated+gadolinium%28III%29+ions+in+aqueous+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Fluorescent single-stranded DNA-based assay for detecting unchelated gadolinium(III) ions in aqueous solution.</a> Anal. Bioanal. Chem. 408 (15), 4121-4131 (2016).</li>
<li>Barge, A., Cravotto, G., Gianolio, E., Fedeli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+determine+free+Gd+and+free+ligand+in+solution+of+Gd+chelates.+A+technical+note%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Med.+Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">How to determine free Gd and free ligand in solution of Gd chelates. A technical note.</a> Contrast Med. Mol. Imaging. 1 (5), 184-188 (2006).</li>
<li>Johansson, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+reporter-quencher+pairs+for+efficient+quenching+through+formation+of+intramolecular+dimers%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Choosing reporter-quencher pairs for efficient quenching through formation of intramolecular dimers.</a> Methods Mol. Biol. 335, 17-29 (2006).</li>
<li>Sherry, A. D., Caravan, P., Lenkinski, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+on+gadolinium+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Magn.+Reson.+Imaging%22%5BJournal%5D)">A primer on gadolinium chemistry.</a> J. Magn. Reson. Imaging. 30 (6), 1240-1248 (2009).</li>
<li>Shakhverdov, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cross-relaxation+mechanism+of+fluorescence+quenching+in+complexes+of+lanthanide+ions+with+organic+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Spectrosc%22%5BJournal%5D)">A cross-relaxation mechanism of fluorescence quenching in complexes of lanthanide ions with organic ligands.</a> Opt. Spectrosc. 95 (4), 571-580 (2003).</li>
<li>Brittain, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submicrogram+determination+of+lanthanides+through+quenching+of+calcein+blue+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Submicrogram determination of lanthanides through quenching of calcein blue fluorescence.</a> Anal. Chem. 59 (8), 1122-1125 (1987).</li>
</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

アプタマーベースのGd-センサを用いて、非キレート化のGd 3+の濃度に比例する蛍光発光の増加が観察されます。使用されるサンプルの量を最小にするために、アッセイは、ウェル当たり45μLの全試料体積で384ウェルマイクロプレートで実行されてもよいです。この設計では、フルオレセイン（FAM）およびダブシル（DAB）の選択は、主に、試薬のコストに基づいていました。発光波長、蛍光体の異なるペアを変更すると消光剤11を使用することができます。 重要なステップの一つは、GdのアプタマーとQS間の最適なハイブリダイゼーションを達成するために、アッセイ緩​​衝液中で95℃、徐冷（ステップ2.4）に加熱され、センサーで最良の結果を得るために、それを注意することが重要ですストランド。以前のプロトコルで述べたようにサーマルサイクラーを使用できない場合は、95℃でのインキュベーションは、水浴中で行ってもよいです。制御するためのもう一つの重要なパラメータはtです彼は、緩衝液の組成物。造影剤を溶解するために、ステップ2.1に記載されているアッセイ緩​​衝液の使用が推...

技術固有の感度によって制限され、臨床診断、磁気共鳴イメージング（MRI）の重要性の高まりは、新規ガドリニウムベースの造影剤（GBCAs）1の開発の研究の急速な成長をもたらしました。 GBCAsは、画像品質を改善するために投与される分子であり、それらは、典型的には、多座配位子に配位価のガドリニウムイオン（Gdの3+）の化学構造を有します。非キレートのGd 3+は有毒であるように、この複合体形成は極めて重要です。それは、腎疾患または障害2と一部の患者における腎性全身性線維症の発症に関与しています。その結果、水性の遊離イオンを検出することがGBCAsの安全性を確保することに尽力しています。 GBCAソリューションの非キレート化のGd 3+の存在は、多くの場合、リガンドとイオン、複合体の解離、またはdisplacemen間の不完全な反応の結果であります他の生物学的金属カチオン3によってトン。 現在のGd 3+、汎用性および適用4の観点で最も高いクロマトグラフィーおよび/または分析のランクに依存するそれらの存在を決定するために使用されるいくつかの技術のうち。それらの長所の中でも、高感度および精度、（リストを、複数のGd 3+複合体の同時定量（ヒト血清5、尿及び毛髪6、廃水7、及び造影剤配合物8を含む） は 、種々のサンプルマトリックスを分析する能力であります研究の2013年前にはTelgmann ら ）4により包括的なレビューに記載されています。唯一の欠点は、これらの方法のいくつかは、いくつかの研究室がアクセス権を持っていないかもしれません（そのような誘導結合プラズマ質量分析など）計測器4を必要とすることです。研究や概念実証レベルでの新たなGBCA発見の文脈の中で、ARelativelyより、便利で迅速、かつ費用対効果の高い分光ベースの方法は、（例えば、UV-可視吸収または蛍光のような）価値のある代替物として機能することができます。心の中でこれらのアプリケーションでは、水のGd 3+のための蛍光アプタマーベースのセンサは9を開発しました。 アプタマー（GD-アプタマー）が指数関数的濃縮（SELEX）9によるリガンドの系統的進化の過程を経て単離した塩基の特定の配列を有する44塩基長の一本鎖DNA分子です。蛍光センサーにアプタマーを適応させるために、フルオロフォアは、その後13相補的塩基（ 図1）を介して急冷ストランド（QS）とハイブリダイズされた鎖の5 &#39;末端に結合しています。 QSは、3 &#39;末端ダーククエンチャー分子でタグ付けされています。 Gd 3+の非存在下では、1からなるセンサ（GD-センサー）：それぞれのGd-アプタマーとQSの2モル比は、最小の蛍光発光によるTを有していますクエンチャーへのフルオロフォアからOエネルギー移動。水性のGd 3+を添加すると、蛍光発光の増加をもたらす、のGd-アプタマーからQSを置換します。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/55216/55216fig1.jpg" /> フルオレセイン（蛍光団）とダブシルでタグ付けされた13塩基長の消光ストランド（QS）でタグ付けされた44塩基長のアプタマー（GD-アプタマー）（ダーククエンチャー）で構成され 、図1 のセンサ（GD-センサー） 。非キレート化のGd 3+の非存在下では、センサの蛍光は最小です。 Gd 3+を添加し、QSの変位が発生し、蛍光発光の増加が観察されます。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55216/55216fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> 検出のための1つの一般的に使用される分光ベースの方法は、現在ではあり水性のGd 3+をる。このアッセイは、イオン10にキレート化時に433から573 nmの最大吸収波長のシフトを起こす分子キシレノールオレンジを使用しています。これら二つの吸光度最大値の比率は、非キレート化のGd 3+の量を定量するために使用することができます。 2つの方法は、標的選択性、定量の線形範囲は、検出様式（例えば、pH及び使用する緩衝液の組成など）は、異なる反応条件を有するようにアプタマーセンサーは、キシレノールオレンジアッセイに代わるもの（これも相補的であってもよい）であります9。

<table><tbody><tr><td>Gd-アプタ</td><td>マーIDTDNA</td><td>のインプット配列と蛍光色素の修飾をオーダーフォームで</td>使用し<td>、発光波長の異なる蛍光色素を使用してもよい。アプタマーは、他の会社から注文することもできます。</td></tr><tr><td>クエンチングストランド</td><td>IDTDNA</td><td>インプットシーケンスとクエンチャー修飾</td>の順序 <td>フルオロフォアからの最適なエネルギー伝達のために、異なるクエンチャーを使用することができます。アプタマーは、他の会社から注文することもできます。</td></tr><tr><td>分子生物学グレードの水</td><td></td><td></td><td>特定の製造業者はなく、DEPC または非 DEPC 処理の両方が同等にうまく機能します</td></tr><tr><td>ガドリニウム (III) 塩化</td>物無水 <td>Strem</td><td>936416</td><td>有毒</td></tr><tr><td>な HEPES</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>塩化マグネシウム無水</td><td>MP バイオメディカル 0520984480</td><td>- 100 g</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>アクロス オーガニック</td><td></td><td></td>327300025</tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>P333-500</td><td></td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム、ペレット</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>BP359</td><td>腐食性</td></tr><tr><td>塩酸</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td>ック <td>SA49</td><td>有毒で腐食性</td></tr>の<tr><td>384ウェル 低フランジ ブラック平底ポリスチレン NBSプレート</td><td>コーニング</td><td>3575</td><td>蛍光に適したプレート読む必要があります。</td></tr><tr><td>Nalgene Rapid-Flow 滅菌ディスポーザブルボトルトップフィルター</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>5680020</td><td>ボトルトップには0.2ミクロンのPESメンブレンが取り付けられ</td></tr>ています <tr><td>使い捨て滅菌ボトル 250mL</td><td>コーニング</td><td>430281</td><td>大きめのボトルまたは小さなボトルを使用できます</td></tr><tr><td>1.5 mL 微量遠心チューブ</td><td></td><td></td><td>DNAseおよびRNAseフリー</td></tr>の<tr><td>0.2 mL PCRチューブ</td><td></td><td></td><td>である限り、特定のメーカーはありません特定のメーカーはありません、DNAseおよびRNAseフリーである限り、マイクロ</td></tr><tr><td>ピペット</td><td></td><td></td><td>特定のメーカーはありません</td></tr><tr><td>適切なサイズのピペットチップ(非フィルター) 適切なサイズの</td><td></td><td></td>ピペットチップ(非フィルター) <td>特定のメーカーはありません、DNAseおよびRNAseフリー</td></tr><tr><td>である限り<>機器</ストロング></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>プレートリーダー</td><td>Biotek Synergy H1</td><td></td><td>他のメーカーのプレートリーダーも同様に機能します</td></tr></tbody></table>

非キレート化ガドリニウム（iii）のためのアプタマーベースのセンサー

An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III)

水溶液中の非キレート化三価ガドリニウムイオン(Gd3+)の存在を決定する方法が示されています。Gd3+は、リガンドとイオンとの間の不完全な反応の結果として、または解離生成物として、ガドリニウムベースの造影剤のサンプルによく存在します。イオンは有毒であるため、その検出は非常に重要です。ここでは、Gd3+用のアプタマーベースのセンサ(Gd-sensor)の設計と使用法について説明します。このセンサーは、イオンの濃度の増加に応答して蛍光変化を生じ、ナノモル範囲(S/N比3で~100 nM)での検出限界があります。アッセイは、384ウェルマイクロプレート内の周囲pH(~7 - 7.4)の水性緩衝液で実行できます。このセンサーは、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオンなどの他の生理学的に関連する金属イオンに対して比較的反応性がありませんが、ユーロピウム(III)やテルビウム(III)などの他の三価ランタニドよりもGd3+に特異的ではありません。それにもかかわらず、ランタニドは造影剤や生物学的システムに一般的には見られないため、センサーを使用して、水性条件で非キレート化されたGd3+を選択的に測定できます。

非キレート化のGd 3+の存在下でのGdセンサ液の典型的な蛍光変化を、 図2に示されています。発光は、任意の単位（AFU）における蛍光倍数変化（ 図2A）又は読み出しの生の蛍光（ 図2B）としてプロットすることができます。両方のプロットは、1μMおよび&gt; 3μMでの信号の飽和以下のGd 3+の濃度について線形範囲で非常に類似した検量線が得られます。検出限界は、3つの信号対雑音比を有する〜100nmです。 関心のGBCAを含有する溶液において、非キレート化のGd 3+の存在は、「ブランク」溶液と比較して、センサの蛍光増加に変換されます。 Gd-DOTA複合体の2つの異なるバッチ、他よりも高い純度の1の溶液中の蛍光変化は、ショーです代表的な結果（ 図3）</strong...

ポリデオキシヌクレオチド(44-mer aptamer)分子を使用して、水溶液中の非キレート化ガドリニウム(III)イオンを検出することが説明されています。イオンの存在は、センサーの蛍光発光の増加によって検出されます。

非キレート化ガドリニウム（III）のためのアプタマーベースのセンサー

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

この蛍光ベースのアッセイの全体的な目的は、磁気共鳴画像法（MRI）造影剤を含む水溶液中において、毒性を持つ非キレート化ガドリニウムイオンの存在を検出することです。この手法は、合成された造影剤の高い純度を保証する手段を提供することで、ガドリニウムベースのMRI造影剤の開発を促進するのに役立ちます。本技術の主な利点は、他の生物学的金属カチオンに対して比較的高い選択性を持ちながら、サブマイクロモル濃度の非キレート化毒性ガドリニウムを検出できることです。この手順を開始するために、テキストプロトコルに記載されている通りにアッセイバッファーを調製します。水酸化ナトリウムと塩酸を用いて、pHを7.4に調整してください。その後、0.2 micronのPESメンブレンを備えた滅菌済み使い捨てボトルトップフィルターでバッファーをろ過します。次に、497 µLのアッセイバッファーを新しいマイクロ遠心チューブに移します。調製したガドリニウムアプタマーストック溶液を1 µL、および調製したQSストック溶液を2 µL加えます。この2Xガドリニウムセンサー溶液を50 µLずつ、9本のPCRチューブそれぞれに移します。その後、チューブをサーマルサイクラーに入れます。サーマルサイクラーを設定し、サンプルを95 °Cで5分間加熱した後、15分かけて25 °Cまでゆっくりと冷却します。ガドリニウムイオン溶液を添加する前に、2Xガドリニウムセンサー溶液を95 °Cまで加熱し、続いて室温まで徐冷させる必要があることに注意してください。まず、固体の塩化ガドリニウムをアッセイバッファーに溶解し、目的の濃度のガドリニウム(III)ストック溶液を作成します。テキストプロトコルに従い、段階希釈を用いて、100 µLのガドリニウム(III)溶液を6種類調製します。その後、テストする造影剤をアッセイバッファーに溶解します。連続希釈を用いて3つの異なる濃度を調製します。次に、2X ガドリニウムセンサー溶液が入ったPCRチューブをサーマルサイクラーから取り出します。各ガドリニウム溶液50 µLを、それぞれ別のPCRチューブに分注します。各溶液をピペッティングで数回混ぜ合わせます。次に、各コントラスト剤溶液50 microlitersを、残りのPCRチューブにそれぞれ分注します。ピペッティングで数回混ぜ合わせます。9種類すべての溶液を室温で5分間インキュベートします。その後、各溶液45 µLを384ウェルプレートにデュプリケートで分注します。次いで、テキストプロトコルに従って蛍光データを記録し、解析します。本研究では、蛍光ベースの手法を用いて、水溶液中の非キレート化3価ガドリニウムイオンを検出します。蛍光センサーは、アプタマーに蛍光色素を結合させることで作製します。次に、このセンサーを、ダーククエンチャー分子で標識した

an-aptamer-based-sensor-for-unchelated-gadolinium-iii

Research

JoVE Journal

Chemistry

化学

我々は、メタル化、精製、及びランタニド錯体の特性を示しています。ここで説明する複合体は、磁気共鳴イメージング法を用いて、これらの分子のトラッキングを有効に高分子に結合させることができる。...

磁気共鳴イメージングのための準備、精製、および造影剤として使用するための希土類錯体のキャラクタリゼーション

マウス前立腺癌モデルにおける腫瘍間質内の凝固した血漿タンパク質に特異的な小ペプチド標的化MRI造影剤を用いてMR癌の分子イメージングを実証した。...

低分子CLT1ペプチド標的造影剤を用いて前立腺がんの分子イメージングのMR

Aプロトコルは、調整可能なストリンジェンシー磁気ビーズ選択法に基づいて、低分子ターゲットの構造スイッチングアプタマーを選択するために提供されています。構造スイッチング特性で選択されたアプタマーは、前述の金ナノ粒子アッセイなど、ターゲットの存在を知らせるためにコンフォメーションの変更が必要なアッセイに有益です。...

比色金ナノ粒子アッセイに適用される構造スイッチングアプタマーを選択するための方法

このプロトコルは、生体機能化されたプルシアンブルーナノ粒子の合成と、それらをマルチモーダルな分子イメージング剤として使用することを説明しています。ナノ粒子は、ナノ粒子コア内のガドリニウムイオンまたはマンガンイオンがMRIコントラストを生成するコアシェル設計をしています。生体機能シェルには、蛍光イメージング用の蛍光色素と分子ターゲティング用のターゲティングリガンドが含まれています。...

マルチモーダル分子イメージングアプリケーションのためのBiofunctionalizedプルシアンブルーナノ粒子

インフィールドの用途のための小分子の検出のためのアプタマー - 金ナノ粒子の比色アッセイの設計および開発を検討しました。さらに、スマートデバイス測色アプリケーション（アプリ）が検証された、アッセイの長期保存は、フィールドでの使用のために設立されました。...

インフィールドアプリケーションの設計およびアプタマー金ナノ粒子基づく比色アッセイの開発

EOB-DTPAの単離およびその後の複合体形成の自然のGa（III）および68とGaが本明細書に提示されるだけでなく、標識効率上のすべての化合物との調査を徹底的に分析、in vitroでの安定性およびオクタノール /水のための手順放射性標識された複合体の分配係数。...

EOB-DTPAとそのののGa（III）錯体に関する研究<sup&gt; 68</sup&gt; Gaの放射性標識アナログ

このプロトコルは、常磁性のガドリニウムイオンを配位シクレンベースの大環状キレートを担持デンドリマー磁気共鳴イメージング（MRI）造影剤の調製および特徴付けを記載します。市販の単量体のアナログと比較した場合、in vitroでのMRI一連の実験では、このエージェントは、増幅されたMRI信号を生成しました。...

調製と<em&gt;インビトロ</em&gt;磁気共鳴イメージングのためのデンドリマーベースの造影剤のキャラクタリゼーション

生体外の選択グループ特定フタル酸エステル結合 DNA アプタマーのキャラクタリゼーションのためのプロトコルが表示されます。電気化学 aptasensor...

フタル酸エステル結合 DNA アプタマーの選択、評価、および電気化学 Aptasensor への応用

ここでは、取得するためのプロトコルを提案する68高速電子レンジ駆動合成を介してGa コアをドープした酸化鉄ナノ粒子。方法論は、ペットをレンダリングします/(T1) MRI ナノ粒子標識化し、20 分合成で 99% の放射化学的純度 90%...

二重陽電子放出断層レントゲン写真撮影のため68Ga コアをドープした酸化鉄ナノ粒子の合成/(T1) 磁気共鳴イメージング

本プロトコルは、標的を検出するための高速3段階のアプタマーベースの指数増幅アッセイの使用を実証する。サンプル調製、シグナル増幅、および発色をカバーして、カフェインよりもテオフィリンの存在を認識するこのシステムを実装します。...

3段階G四重鎖等温指数増幅反応によるアプタマーベースのターゲット検出(英語)

ここでは、新規化合物が鉄をキレート化する能力を迅速かつ安価に確認できる蛍光アッセイについて説明します。このアッセイは、化合物が弱鉄キレート蛍光プローブCalceinの鉄結合活性を凌駕する能力を測定し、キレート化が起こると蛍光が定量化可能に増加します。...

新規化合物の鉄キレート化能力を確認するための定量可能で安価な無細胞蛍光法 

学ぶアプタマーベースの蛍光センサーによる非キレート化ガドリニウム（III）イオンの検出法。サブミクロモル濃度の毒性イオンを高選択的に検出し、MRI造影剤の品質管理と安全性確保に貢献します。

非キレート化ガドリニウム（III）のためのアプタマーベースのセンサー

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