膵臓癌の正交性切除マウスモデル

このプロトコルは、アジュバント療法およびネオアジュバント療法の試験に使用できるマウスの膵臓癌の堅牢で再現性のある外科的切除モデルについて説明しています。この技術は、ヒトの膵臓がんの再現に効果的な共感染同所性モデルと、安全で効果的な膵臓切除技術を組み合わせたものです。免疫不全モデルがこのプロトコルに記載されている一方で、C57黒色6匹マウスに移植されたKPC腫瘍細胞を使用して、代替の免疫適格モデルが実施されてもよい。

この代替手段は、免疫療法のテストに役立ちます。まず、麻酔をかけたマウスを無菌のフィールドに仰臥位で置き、ポビドンヨードを塗布し、続いて皮膚の準備のために70%エタノールを塗布します。腹部の左頭蓋象限に縦方向の切開を行い、鉗子の間の筋肉層を切開して皮膚を解剖します。

細胞懸濁液を注入装置に装着したシリンジを装着した後、開腹切開部に巾着綿棒を当て、綿棒の開口部から脾臓と膵臓尾部を外部に押し出します。財布のひもをそっと締め、注射のために膵臓の尾を露出させ、ガーゼが膵臓の周囲に接触するが、収縮しないようにします。鉗子を使用して膵臓の尾をつかみ、横方向の張力をそっと置きます。

針で膵臓に穴を開け、斜角を上げて進め、針先を少し上に持ち上げて、斜角が完全に腹膜に入るまで進めます。膵臓の実質に細胞懸濁液をゆっくりと制御された方法で注入します。注射後、漏れを最小限に抑えるために、針を数秒間所定の位置に保持してから抜いてください。

ポビドンヨードを浸した綿棒を使用して、部位を慎重に軽くたたき、誤って漏れた細胞懸濁液を吸収します。脾臓と膵臓を同所性の位置に戻し、5-0ポリグリコール酸縫合糸で腹壁を閉じます。クリップで肌を閉じます。

腹部の左頭蓋象限の皮膚に縦方向に切開します。できれば、前の切開部位を通して。下にある筋肉質の腹壁から皮膚を鈍く解剖し、傷口を開いたままにするために全自己保持リトラクターを配置します。

鉗子の間の筋肉層を、前の手術の縫合線の片側だけに切開します。次に、切開部を延長して、前の縫合線全体を切除します。脾臓と膵臓を頭蓋状に引っ込めて外側にします。

この場合、腫瘍の下面に付着した癒着が見つかりました。これは焼灼によって分けられました。結腸は、フィルム状の癒着によって膵臓の尾側に付着しているのを見つけることができます。

これが見つかった場合は、結腸を単刀直入に解剖します。結紮のために膵臓のセグメントを露出させます。一対の鉗子を膵臓の体の脾臓血管に背側に慎重に通過させることにより、結紮のために膵臓のセグメントを露出させます。腫瘍の近位にある膵臓をチタン製のレギュレーションクリップで結紮し、次にこれに対して遠位の膵臓を焼灼で横断します。

あるいは、膵臓の断端を制御するために、切断前に5-0ポリグリコール酸縫合糸で膵臓を連続的に結紮します。膵臓を尾側に注意深く引っ込め、脾臓の頭蓋極と胃の間の胃脾血管を焼灼します。血管は小さく、剥離したり

このような血管は腹腔内に引っ込んで出血を引き起こすことがあり、これは制御が困難な場合があります。検体を取り出し、手術部位を検査して止血を確認します。5-0ポリグリコール酸縫合糸で腹壁を連続的に閉じ、クリップで皮膚を閉じます。

着床手術を受けたマウス59匹のうち、8匹でグロスリークが認められました。腫瘍増殖の3週間後、切除前の生物発光イメージングにより、肉眼的転移性疾患のマウスを外科的切除から除外することができました。これにより、45匹のマウスが膵臓切除術に進みました。

この手順は、マウスの100%で成功裏に実施されました。これらのマウスのうち43匹で、5ミリメートルを超える巨視的な近位膵臓縁が達成されました。切除時には、45匹中9匹に局所転移が認められた。

縫合線への転移に加えて、3匹のマウスでは胃の大きなカーブ上に孤立した転移性結節が観察され、1匹のマウスでは肝臓に被膜下結節が観察されました。局所的な膵臓外浸潤は6匹のマウスで発生し、5匹のマウスでは縫合線に直接浸潤し、1匹のマウスでは肝臓に直接浸潤しました。切除後1週間で、32匹のマウスの最大放射輝度比は10未満であり、残存病変が最小限またはまったくないことが示されました。

麻酔導入から閉鎖までの平均手術時間は22分でした。切除手順の重要なステップは、脾臓血管と膵臓の背側にある無血の発生面を認識することです。この平面を解剖すると、膵臓の一部が解放され、その後の結紮が可能になります。

切除後、マウスは補助療法で治療されてもよい。その後、生物発光イメージングと剖検所見および動物の生存率を組み合わせて、地域の動物倫理プロトコルに応じて、疾患の進行を評価することができます。