Name: 膵臓癌の正交性切除マウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-24T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: 学ぶマウスにおける膵臓癌の正交性切除モデル。免疫不全マウスと免疫能保有マウス双方を用いた安全で再現性のある外科的手法により、術前・術後補助療法の評価が可能です。

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著者は、アヴナー膵臓癌財団からの支援を受けています。

すべての手続きは、ニューサウスウェールズ大学動物管理倫理委員会(17/109A)によって承認されました。雌の高胸腺Balb/cヌードマウスは、体重16〜19gの8〜10週齢、このプロトコルに使用された。マウスは、マイクロアイソレーターケージに収容され、市販のペレット化食品および水 のアドリビタムを供給した。
1. 正腸膵臓癌移植
<ol><li>細胞を移植のために準備します。まず、処置に必要な細胞数を計算します(1 x 106 ルシファーサタグ付きAsPC-1細胞と1 x 106 がん関連のヒト膵星細胞[CAhPSC]は各動物に必要です)。<ol>
<li>加湿温度制御CO2 インキュベーターでこれらの細胞を維持し、定期的なマイコプラズマ試験を行います。AsPC-1およびCAhPSCに使用される培地は、RPMI 1640(300mg/L-L-グルタミン、20%v/v胎児ウシ血清、1%v/vペニシリン/ストレプトマイシン)およびIMDM(4 mM L-グルタミン、10%対/胎児ウシ血清、1%v/胎児ウシ血清、1%v/胎児胎児スイシン/ストリン/ストリン/スクレビン/ストリン)です。</li>
		<li>標準的な細胞培養技術を用い、細胞を細胞懸濁液にトリプシン化する。使用するトリプシン溶液の2倍の体積でそれぞれの完全な培養培地を使用してトリプシンを中和する。</li>
		<li>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)でこれらの細胞を2回洗浄し、50 μL細胞懸濁液中の1 x 106 AsPC-1細胞と1 x 106 CAhPSCを含む混合物に再懸濁します。</li>
		<li>使用するまで氷の上にこの懸濁液を保管してください。</li>
	</ol></li>
	<li>手順のためのクラスIIバイオセーフティキャビネットを準備します。無菌プラスチックドレープで重ねた加熱マットを使用してください。処置の間の拡大のために、2.5xから3.5倍の拡大の外科ルーペの対を使用する。</li>
	<li>直径1cmの穴をガーゼスワブに切り取って、財布ひも綿棒を準備します。この穴を財布の糸縫い糸で固定します。これのために任意の細かい編み縫合糸(例えば、5/0ポリグリコール酸縫合糸)を使用することができます。編組縫合材料は、締め付けた後に緩い結び目を所定の位置に保ち続けることを可能にするので推奨される。この例を図 1aに示します。</li>
	<li>腹腔内注射により80mg/kgのケタミンと10mg/kgのキシラジンでマウスを麻酔します。</li>
	<li>5 mg/kg エンフロフロキサシン抗生物質予防、2.5 mg/kg フルニシン鎮痛、皮下0.9%の生理食前の1 mLを投与する。</li>
	<li>麻酔をしたら、ステ無菌場にマウスを置き、ポビドンヨウ素を塗布し、続いて70%エタノールを皮膚調製に適用します。</li>
	<li>腹部の左頭蓋象限の皮膚に縦切開を行い、鉗子の間に筋肉層を切開して腹部に入る。</li>
	<li>29 G インシュリンシリンジを 50 μLの細胞懸濁液でロードし、これは1 x 106 の CAhPSC と 1 x 106 ルシメラーゼタグ付き AsPC-1 細胞を注射あたりに相当します。射出装置に取り付けます。この注入装置の設計および機能は 図1b およびその伝説で詳しく説明される。</li>
	<li>財布ひも綿棒を開口切開部の上に置き、この綿棒の開口部を通して脾臓と膵臓の尾を外装します。財布の紐を締めて膵臓の体を優しく囲み、膵臓の尾を露出して注射します。ガーゼが膵臓を周回に接触すると同時に収縮しないように十分にタイトであることが重要です。</li>
	<li>鉗子を使って、膵臓の尾を握り、横張り張りをそっと置きます。腹側腹膜表面を浅い角度で針で穿刺し、注射装置でゆっくりと制御された方法(10-15秒以上)で膵臓に細胞懸濁液を注入する。</li>
	<li>射出プロセス中は、注入部位の周り(逆流から)と膵臓の反対側(貫通貫した浸透の場合)の両方で、漏れについて注意深く観察します。目に見える漏れが発生した場合は、注射を停止し、シリンジ内の残りの注射量を確認して漏出量を確認してください。漏れが少量(<10 μL)の場合は、ガーゼで漏れを吸収し、注射を完了するために針を別の膵臓の小葉に再配置します。</li>
	<li>脾臓と膵臓を交換し、連続的な方法で5/0ポリグリコール酸縫合糸で腹壁を閉じます。クリップでスキンを閉じます。</li>
	<li>麻酔薬から回復するまで、温めたケージの中でマウスを監視します。目を覚まして警告したら、マウスをケージに戻します。</li>
</ol>2. がん切除手術:遠位膵切除術と脾臓摘出術
<ol><li>移植に関する切除のタイミングは、実験プロトコルによって異なる場合があります。一般に、腫瘍は切除前に少なくとも3週間は増殖するが、特定の移植癌細胞株に対して経験的に最適化する。</li>
	<li>切除手術の前日に、動物に生物発光イメージングを行い、局在した原発性腫瘍の存在を確認する。このイメージング研究は、明らかな膵外疾患を有するマウスを切除から除外するために使用されることに注意してください。サイズも放射フラックスも、切除の適格性を決定するための閾値として使用されるべきではありません。<ol>
<li>マウスの重量を量り、腹腔内にD-ルシフェリンを注射する(150mg/kg)。</li>
		<li>ルシフェリン運動曲線の性能により、各実験のルシフェリン注入に関するイメージングステップのタイミングを決定する。放射束が最大の90%を超える期間は、生物発光イメージングに最適な時間を表します(この実験では、18〜26分の注射後)</li>
		<li>麻酔を誘導し、イオブルラン(それぞれ酸素で4%と3%)を使用して維持し、生物発光イメージング装置(例えば、IVIS Lumina II)を用いてイメージングを行う。自動露出とビン分割の設定を使用します(ただし、これは予想される放射束に最適化することができます)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>手順のためにクラスIIバイオセーフティキャビネットを準備します。無菌プラスチックドレープで重ねた加熱マットを使用してください。解剖中の倍率については、2.5x〜3.5倍の拡大手術ルーペのペアを使用してください。</li>
	<li>腹腔内注射により80mg/kgのケタミンと10mg/kgのキシラジンでマウスを麻酔します。</li>
	<li>5 mg/kg エンフロフロキサシン抗生物質予防、2.5 mg/kg フルニシン鎮痛、皮下0.9%の生理食前の1 mLを投与する。</li>
	<li>ステ無菌場にマウスを置き、ポビドンヨウ素を塗布し、続いて70%エタノールを皮膚調製に適用します。</li>
	<li>腹部の左頭蓋象限の皮膚に縦切開を行い、好ましくは前の切開部位を通して行う。</li>
	<li>下の筋肉の腹壁から皮膚を鈍く解剖し、皮膚の傷を開いたままにするためにAlm自己保持レトラクターを置く。</li>
	<li>前の操作の縫合線の片側に鉗子間の筋肉層を切開し、切開を延長して前の縫合線全体を切除する。</li>
	<li>脾臓と遠位膵臓を外装し、目ざまにそれを引き込む。膵臓の尾大の側面では、結腸は、フィルム接着によって付着して見つかり得る。これが見つかった場合は、コロンをぶっきらぼうに解剖します。</li>
	<li>慎重に膵臓と脾臓の容器の体に足を引く鉗子のペアを渡し、このスペースを開きます。これは、後の結紮のために膵臓のセグメントを解放します。</li>
	<li>膵臓の体をチタン結紮クリップで腫瘍に近似させ、これに近い膵臓を焼灼で伝達する。膵切り株を制御する別の方法は、横断術前に5/0ポリグリコール酸縫合糸で連続性にそれを液化することです。</li>
	<li>膵臓を引き込み、脾臓の頭蓋極と胃の間の胃血管を焼灼する。</li>
	<li>標本を取り除き、血体止を確認します。</li>
	<li>5/0ポリグリコール酸縫合糸で腹壁を閉じます。クリップでスキンを閉じます。</li>
</ol>3. 術後管理
<ol><li>即時麻酔後期間(上記の両方の手順)で、麻酔薬から回復するまで温めたケージでマウスを監視します。目を覚まして警告したら、マウスをケージに戻します。術後の期間に、動物の痛みや苦痛の兆候を監視します。0.05 mg/kg ブプレノルフィンを皮下注射で投与し、動物を12時間注意深く観察する。</li>
	<li>その後、体重、食物摂取および活性について毎日マウスを監視する。腫瘍の大きさについて切開部位と触診部位を調べる。術後7日目にスキンクリップを取り外します。</li>
	<li>人道的エンドポイントに到達した場合は、マウスを安楽死させる。これらの人道的エンドポイントには、体重>20%の喪失、治療不可能な苦痛の特徴(ハンチ姿勢、動きまたはグルーミングの欠如を含む)および外部触診によって推定される1cm3 を超える腫瘍サイズが含まれる。</li>
</ol>

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</ol>

著者らは、このプロジェクトに関して開示するものは何もありません。

膵臓癌の切除整形マウスモデルは、アジュバントおよびネオアジュバント治療の検査を可能にするため重要である。これは、手術が最も効果的な治療であり続けるが、再発のリスクが高いと関連している膵臓癌において特に重要である。本論文では、切除術で治癒可能な膵臓癌を確実に産生する方法について述べ、ネオアジュバント/アジュバント療法が必要な臨床シナリオを複製する。
既存の方法に関する意義 膵臓癌におけるアジュバントおよびネオアジュバント療法の重要性にもかかわらず、文献には十分に記述された直交性直交切除マウスモデルはほとんどない。これらの記述された切除モデルは、ヒトにおける臨床状況の複製の忠実度において様々であった。これらの以前のモデルは、蛍光ガイダンスを用いて、(i)腫瘍切除のみに大きく分類することができます。(ii) 脾摘出を伴う小膵切除術;(iii) 遠位汎化切欠切/脾臓摘出術。
蛍光誘導を伴う腫瘍切除は、15、17、18、19、20、21<sup clas...

膵管腺癌(膵癌[PC])は予後不良1と関連している。外科的切除は、PCの唯一の潜在的治癒的治療であり、早期疾患を呈する患者に対して考慮されるべきである。残念なことに、R0切除術(すなわち、腫瘍のない切除マージン)を有しても、再発率(局所または未検出の転移性疾患から)は2、3である。したがって、全身アジュバント療法は、切除4を受けるほぼすべての患者に示される。さらに、ネオアジュバント療法は現在、境界分化可能な癌に対してのみ推奨されているが、その徴候は、その日常的な使用が多くの臨床研究5、6、7、8の焦点となるほど拡大している。切除を伴うPCの新しい治療アプローチを開発するためには、これらのアプローチは、臨床現場を正確に再現する前臨床モデルで最初に評価される必要があります。
PCの異所性マウスモデルは、薬物治療9、10をテストするために過去に頻繁に使用されてきた。これらの多くは、マウス膵臓に癌細胞を単独で注入することによって産生され、PCの特徴である顕著な間質を欠いた腫瘍をもたらした。さらに最近では、ヒトPCとヒト膵星細胞(PSC、PC中のコラーゲン質素の主要な生産者)の混合物を注入して最初に開発したもののような共噴射装具モデルが、11,12で定期的に使用されるようになってきた。癌と間質細胞の併用による腫瘍は、(i)PCの癌元素と特徴的な間質(デスモプラスチック)成分の両方を示し、かつ(ii)癌細胞増殖および転移を増強した。したがって、このモデルは人間のPCによく似ています。多くの整形体PCの切除モデルは13、14、15、16と記載されているが、このモデルほど正確なヒトにおける膵切除の臨床的実態を反映するものは一切ないので、アジュバントまたはネオアジュバント治療の検査に最適ではない。
提示されたマウスモデルの目的は、(i)不注意な腹膜播種を最小限に抑えながら、正腸膵臓癌を移植することに成功し、(ii)その後癌を完全に切断する方法を実証することであった。この論文は、この技術のヒントと潜在的な落とし穴を強調しています。

<table><tbody><tr><td>Animals, Materials and Equipment for Implantation Procedure</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AsPC-1ヒト膵臓がん細胞株、ルシフェラーゼタグ付き(Promega PGL3基本プラスミド由来のluc+遺伝子)</td><td>American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA</td><td></td><td>provided by Professor Takashi Murakami, Saitama Medical University, Saitama, Japan</td></tr><tr><td>オートクリップ創傷クリップ, 9 mm</td><td>Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW, Australia</td><td>500346</td><td></td></tr><tr><td>Basic Dressing Pack</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>がん関連ヒト膵臓星細胞</td><td>Pancreatic Research Group 細胞バンク</td><td></td><td>社内細胞バンク</td></tr><tr><td>極低温チューブ, 1.0 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific Australia Pty Ltd, Scoresby, VIC, Australia</td><td>366656</td><td></td></tr><tr><td>ハンドル付き使い捨てステンレス製メス刃、サイズ15</td>リビング<td>ストンインターナショナル、マスコット、ニューサウスウェールズ州、</td><td>SCP15</td><td></td></tr><tr><td>胎児ウシ血清(FBS)</td><td>ライフテクノロジーズコーポレーション、タラマリン、ビクトリア州、オーストラリア</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>ジルの細い歯の鉗子12cm</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス鋼の顕微手術器具セット</td></tr><tr><td>手術中および術後の回復中に体温を維持するための加熱マット</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ホモ接合性無脊椎ヌードマウス:株BALB/c-Fox1nu/Ausb、雌</td><td>のオーストラリアのバイオリソース、モスベール、ニューサウスウェールズ州、オーストラリア</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イスコーブの改変ダルベッコ培地(IMDM)と4mM L-グルタミンとフェノールレッドなし</td><td>ライフテクノロジーズコーポレーション、タラマリン、ビクトリア州、オーストラリア</td><td>21056023</td><td></td></tr><tr><td>宝石類の鉗子 11.5 cm</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス製顕微手術器具セット</td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー(丸ハンドル) 15 cm ストレート</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス製顕微鏡手術器具セット</td></tr><tr><td>マイクロハサミ(丸ハンドル) 15 cm ストレート</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス製顕微鏡手術器具セット</td></tr><tr><td>ペニシリン 10,000 U/mL、ストレプトマイシン 10,000 &mu;g/mL</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>ポリグリコール酸縫合糸, サイズ USP 5/0 on 13mm half-circle round-body needle</td><td>Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia</td><td>C1049407</td><td></td></tr><tr><td>ポータブル体重計</td><td>精密天秤, Bradford, MA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reflex clip appier and clip remover</td><td>World Precision Instruments, Sarasota,フロリダ州、米国</td><td>500345</td><td></td></tr><tr><td>ロズウェルパークメモリアルインスティテュート(RPMI)1640、フェノールレッド、300mg/L Lglutamine</td><td>Life Technologies Corporation、タラマリン、ビクトリア州、オーストラリア</td><td>11875085</td><td></td></tr><tr><td>丸型血管拡張器 15 cm、0.1 mmチップ</td><td></td><td></td><td>ジェネリックステンレス鋼顕微鏡器具セット</td></tr><tr><td>トリプシン 0.05%、EDTA 0.02%</td><td>ライフテクノロジーズコーポレーション、タラマリン、ビクトリア州、オーストラリア</td><td>25300054</td><td>膵臓星状細胞用</td></tr><tr><td>トリプシン 0.25%, EDTA 0.02%</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>25200056</td><td>ASPC-1 細胞用</td></tr><tr><td>U-100 インスリン注射器、0.5 mL 29 G (0.33 mm) &times; 13 mm 針</td><td>Terumo Medical Corporation, Elkton, MD, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><<tr><td>強力>切除手順用機器</強力></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アルム自己保持リトラクター</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス鋼の顕微手術器具セット</td></tr><tr><td>オートクリップ創傷クリップ 9 mm</td><td>Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW</td><td>500346</td><td></td></tr><tr><td>Basic Dressing Pack</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia</td><td>08-559NP</td><td></td></tr><tr><td>ハンドル付き使い捨てステンレス製メス刃、サイズ15</td><td>リビングストンインターナショナル、マスコット、ニューサウスウェールズ州、</td><td>SCP15</td><td></td></tr><tr><td>ジル細かい歯の鉗子12 cm</td><td></td><td></td><td>ジェネリックステンレス鋼顕微鏡器具セット</td></tr><tr><td>ハンドヘルド高温細かい先端焼灼</td><td>Bovie Medical Corporation、メルビル、ニューヨーク、米国</td><td>AA01</td><td></td></tr><tr><td>手術中および術後の回復中に体温を維持するための加熱マット</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II 生物発光イメージングデバイス</td><td>キャリパーライフサイエンス、ホプキントン、マサチューセッツ</td>州、米国 <td></td><td></td></tr><tr><td>宝石類 鉗子 11.5 cm</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス製顕微鏡手術器具セット</td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー(丸ハンドル) 15 cm ストレート</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス製顕微鏡手術器具セット</td></tr><tr><td>マイクロハサミ(丸ハンドル) 15 cm ストレート</td><td></td><td></td><td>一般的なステンレス鋼の顕微手術器械セット</td></tr><tr><td>ポリグリコール酸縫合糸、サイズUSP 5/0 13mm半円丸型針</td><td>Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia</td><td>C1049407</td><td></td></tr><tr><td>ポータブル体重計</td><td>精密天秤, Bradford, MA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>反射傷口クリップアプライヤーとクリップリムーバー</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA</td><td>500345</td><td></td></tr><tr><td>丸型血管拡張器 15 cm、0.1 mm チップ</td><td></td><td></td><td>ジェネリック ステンレス鋼 顕微鏡器具セット</td></tr><tr><td>チタン "ウェックスタイル"Ligaclip、小さい</td><td>HZMIM、杭州、</td><td></td><td></td></tr><tr><td>中国 開腹手術のためのチタニウムのLigaclipのappier、小さい</td><td>HZMIM、杭州、vapouriser</td><td></td><td></td></tr><tr><td>および誘導の部屋を含む中国の揮発麻酔器</td>、<td>ジェネリック ジェネリック</td><td></td><td>vapouriserおよび誘導chamber</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>処置のための薬剤</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% w/w エタノール溶液</td><td>Sigma-Aldrich Pty Ltd, Castle Hill, NSW, Australia</td><td></td> 外科的<td>皮膚製剤として局所的に適用</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン 0.3 mg/mL</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia</td><td></td><td>用量: 0.05 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>D-ルシフェリン(1 U / g)</td><td>PerkinElmer、Inc.、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国</td><td>122799</td><td>PBSで15 mg / mLに希釈します。.用量:150 mg / kg ip</td></tr><tr><td>エンロフロキサシン50 mg / mL</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd、グレンデニング、ニューサウスウェ</td>ールズ州、オーストラリア <td></td><td>用量:5 mg / kg s.c.</td></tr><tr><td>フルニキシン 50 mg/mL</td><td>Norbrook Laboratories Australia, Tullamarine, VIC, Australia</td><td></td><td>用量: 2.5 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Zoetis Australia Pty Ltd., Rhodes, NSW, Australia</td><td></td><td>投与量(酸素で気化):4%誘導、3%メンテナンス</td></tr><tr><td>ケタミン100 mg / mL</td><td>Maylab、Slacks Creek、QLD、オーストラリア</td><td></td><td>投与量:80 mg / kg i.p.</td></tr><tr><td>ポビドン-ヨウ素10%w / v溶液</td><td>ペリゴオーストラリア、バルカッタ、ワシントン州、オーストラリア</td><td>RIO00802F</td><td>外科的皮膚製剤として前腹部に局所的に適用されます</td></tr><tr><td>リフレッシュアイ軟膏(流動パラフィン42.5%w / w、ソフトホワイトパラフィン57.3%w / w)</td><td>アラガンオーストラリアPty Ltd、ゴードン、ニューサウスウェールズ州、オーストラリア</td><td></td>両<td>眼に適用</td></tr>塩化<tr><td>ナトリウム0.9% w / v</td><td>ブラウンオーストラリアPty Ltd、ベラビスタ、 ニューサウスウェールズ州、オーストラリア</td><td>9481P</td><td>用量: 900 &mu;L s.c.</td></tr><tr><td>注射用水 BP</td><td>ファイザーオーストラリア、シドニー、ニューサウスウェールズ州、オーストラリア</td><td></td><td>薬の希釈用</td></tr><tr><td>キシラジン20 mg / mL</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd、グレンデニング、ニューサウスウェ</td>ールズ州、オーストラリア <td></td><td>用量:10 mg / kg i.p.</td></tr></tbody></table>

膵臓癌の正交性切除マウスモデル

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

膵臓癌(PC)の手術を検討されている患者のアジュバントおよび/またはネオアジュバント療法を研究するための満足のいく動物モデルの欠如がある。この不全に対処するために、PCの異形移植を伴うマウスモデルを記述し、続いて遠位汎化切欠切および脾臓摘出術を行う。このモデルは、アジュバントおよびネオアジュバントの設定における様々な治療アプローチの研究に対して、安全かつ適切に柔軟であることが実証されています。
このモデルでは、膵臓腫瘍は、まず、ヒト膵臓癌細胞(ルシファーサタグ付きAsPC-1)とヒト癌関連膵星形細胞をBalb/cアチミックヌードマウスの遠位膵臓に移植することによって生成される。3週間後、癌は再ラパロトミー、遠位汎腎切除術および脾臓摘出術によって切除される。このモデルでは、生物発光イメージングを使用して、がんの発症の進行と切除/治療の効果に従うことができます。切除後、アジュバント療法を行うことができる。あるいは、切除前にネオアジュバント治療を施すことができる。
45匹のマウスからの代表的なデータが提示される。すべてのマウスは、止まり止めの問題のない遠位汎化切欠切術/脾臓摘出術に成功した。5mmを超える巨視近位膵臓マージンは43(96%)で達成されたマウス。膵切除の技術的成功率は100%で、早期死亡率と罹患率は0%であった。切除後の週に動物は誰も死ななかった。
要約すると、臨床シナリオを模倣したマウスにおける膵臓癌の外科的切除モデルに対する堅牢で再現可能な技術について述べた。このモデルは、アジュバントおよびネオアジュバントの両方の治療のテストに有用である可能性があります。

59匹の連続したマウスが移植手術を受けた。8件で発生した漏れ総件数(14%)マウス。注入時の漏出の程度は、プロトコルセクションで上述したように推定される。これらの移植された腫瘍が成長することを可能にする3週間後、切除前に大転移性疾患を有するマウスを除外するために前切除生物発光イメージングを行った。45人(76%)マウスは外科的切除を受けた。
全45(100%)マウスは、血栓症の問題なく遠位汎切剖/脾臓摘出術に成功した。5mmを超える巨視近位膵臓マージンは43(96%)で達成されたマウス。
切除時、9/45(20%)で局所転移が見つかった。マウス – 主に縫合線で (原発性腫瘍と不連続) 9 つのうちの 3 つは、胃の大きな曲線に追加の孤立した結節を示し、1 つは肝臓にサブカプセル状結節を示す。原発性膵腫瘍は縫合線に5個(11%)で付着したマウスと肝臓の1つに (2%)鼠。これらの付着構造は、 ブロックを切除した。
平均(SEM)手術時間(閉鎖への誘導)は...

臨床文脈では、局所性膵臓癌の患者は汎膵切除術を受け、続いてアジュバント治療を受ける。ここで報告されるこのプロトコルは、膵臓癌の正体性移植を経て、遠位汎化切欠切術および脾臓摘出術を通じて、ヌードマウスでこの臨床シナリオをモデル化する安全で効果的な方法を確立することを目的としている。

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

このプロトコルは、アジュバント療法およびネオアジュバント療法の試験に使用できるマウスの膵臓癌の堅牢で再現性のある外科的切除モデルについて説明しています。この技術は、ヒトの膵臓がんの再現に効果的な共感染同所性モデルと、安全で効果的な膵臓切除技術を組み合わせたものです。免疫不全モデルがこのプロトコルに記載されている一方で、C57黒色6匹マウスに移植されたKPC腫瘍細胞を使用して、代替の免疫適格モデルが実施されてもよい。この代替手段は、免疫療法のテストに役立ちます。まず、麻酔をかけたマウスを無菌のフィールドに仰臥位で置き、ポビドンヨードを塗布し、続いて皮膚の準備のために70%エタノールを塗布します。腹部の左頭蓋象限に縦方向の切開を行い、鉗子の間の筋肉層を切開して皮膚を解剖します。細胞懸濁液を注入装置に装着したシリンジを装着した後、開腹切開部に巾着綿棒を当て、綿棒の開口部から脾臓と膵臓尾部を外部に押し出します。財布のひもをそっと締め、注射のために膵臓の尾を露出させ、ガーゼが膵臓の周囲に接触するが、収縮しないようにします。鉗子を使用して膵臓の尾をつかみ、横方向の張力をそっと置きます。針で膵臓に穴を開け、斜角を上げて進め、針先を少し上に持ち上げて、斜角が完全に腹膜に入るまで進めます。膵臓の実質に細胞懸濁液をゆっくりと制御された方法で注入します。注射後、漏れを最小限に抑えるために、針を数秒間所定の位置に保持してから抜いてください。ポビドンヨードを浸した綿棒を使用して、部位を慎重に軽くたたき、誤って漏れた細胞懸濁液を吸収します。脾臓と膵臓を同所性の位置に戻し、5-0ポリグリコール酸縫合糸で腹壁を閉じます。クリップで肌を閉じます。腹部の左頭蓋象限の皮膚に縦方向に切開します。できれば、前の切開部位を通して。下にある筋肉質の腹壁から皮膚を鈍く解剖し、傷口を開いたままにするために全自己保持リトラクターを配置します。鉗子の間の筋肉層を、前の手術の縫合線の片側だけに切開します。次に、切開部を延長して、前の縫合線全体を切除します。脾臓と膵臓を頭蓋状に引っ込めて外側にします。この場合、腫瘍の下面に付着した癒着が見つかりました。これは焼灼によって分けられました。結腸は、フィルム状の癒着によって膵臓の尾側に付着しているのを見つけることができます。これが見つかった場合は、結腸を単刀直入に解剖します。結紮のために膵臓のセグメントを露出させます。一対の鉗子を膵臓の体の脾臓血管に背側に慎重に通過させることにより、結紮のために膵臓のセグメントを露出させます。腫瘍の近位にある膵臓をチタン製のレギュレーションクリップで結紮し、次にこれに対して遠位の膵臓を焼灼で横断します。あるいは、膵臓の断端を制御するために、切断前に5-0ポリグリコール酸縫合糸で膵臓を連続的に結紮します。膵臓を尾側に注意深く引っ込め、脾臓の頭蓋極と胃の間の胃脾血管を焼灼します。血管は小さく、剥離したり不適切に焼灼したりすると出血しやすいことを念頭に置いてください。このような血管は腹腔内に引っ込んで出血を引き起こすことがあり、これは制御が困難な場合があります。検体を取り出し、手術部位を検査して止血を確認します。5-0ポリグリコール酸縫合糸で腹壁を連続的に閉じ、クリップで皮膚を閉じます。着床手術を受けたマウス59匹のうち、8匹でグロスリークが認められました。腫瘍増殖の3週間後、切除前の生物発光イメージングにより、肉眼的転移性疾患のマウスを外科的切除から除外することができました。これにより、45匹のマウスが膵臓切除術に進みました。この手順は、マウスの100%で成功裏に実施されました。これらのマウスのうち43匹で、5ミリメートルを超える巨視的な近位膵臓縁が達成されました。切除時には、45匹中9匹に局所転移が認められた。縫合線への転移に加えて、3匹のマウスでは胃の大きなカーブ上に孤立した転移性結節が観察され、1匹のマウスでは肝臓に被膜下結節が観察されました。局所的な膵臓外浸潤は6匹のマウスで発生し、5匹のマウスでは縫合線に直接浸潤し、1匹のマウスでは肝臓に直接浸潤しました。切除後1週間で、32匹のマウスの最大放射輝度比は10未満であり、残存病変が最小限またはまったくないことが示されました。麻酔導入から閉鎖までの平均手術時間は22分でした。切除手順の重要なステップは、脾臓血管と膵臓の背側にある無血の発生面を認識することです。この平面を解剖すると、膵臓の一部が解放され、その後の結紮が可能になります。切除後、マウスは補助療法で治療されてもよい。その後、生物発光イメージングと剖検所見および動物の生存率を組み合わせて、地域の動物倫理プロトコルに応じて、疾患の進行を評価することができます。

an-orthotopic-resectional-mouse-model-of-pancreatic-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

盲腸に皮下腫瘍の一部の盲腸壁や移植に癌の細胞懸濁液の注入：2つのテクニックは、このモデルを確立するために使用することができます。このモデルでは、大腸癌の自然な進行を勉強し、大腸癌に対する新しい治療薬をテストするのに便利です。...

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このビデオは、局所的な細胞送達のためのマトリゲルと腫瘍進行の非侵襲的モニタリングのためのin...

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膵臓癌の正交性切除マウスモデル

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