2023年3月31日
ここでは、非侵襲的中咽頭気管内挿管 を介した 気管内リポ多糖(LPS)送達のプロトコルを提案します。この方法は、動物の外科的処置の外傷を最小限に抑え、LPSを気管、次に肺に正確に送達します。
私たちのプロトコルは、気管から肺へのLPSの新しい非侵襲的送達方法をより正確に提案します。この方法を初めて試す人は、気管の位置を見つけることに多くの努力を払う必要があります。挿管プラットフォームを準備するには、ひもを2つの穴に通し、その端をライザー上部の小さな突起に結び付けます。
次に、クリップの両端に2本の輪ゴムを取り付け、ライザーの背面にテープで留めます。最後に、ライザーをベースに90度の角度で固定します。カニューレをカニューレペンに組み立て、ペンのライトをオンにします。
次に、70%アルコールを使用して小型外科用鉗子とパスツールピペットを消毒します。試験化合物溶液を調製するには、1ミリリットルのpH 7.2 PBSに3ミリグラムのリポ多糖(LPS)を加えます。次に、10ミリグラムのペントバルビタールナトリウムを1ミリリットルの生理食塩水に溶解し、0.45マイクロメートルのシリンジフィルターを使用して溶液をろ過します。
麻酔をかけたマウスを挿管プラットフォームに置きます。次に、上部の前歯をひもで固定し、2つの前足を輪ゴムで固定します。ピンセットを使用して、舌を引き抜いて保持します。
カニューレを口に沿って下顎喉頭蓋までゆっくりと押します。カニューレペンのライトで気管の位置を確認し、ゆっくりとカニューレを挿入します。次に、挿管ペンを引き出し、カニューレを内側に残します。
パスツールピペットをカニューレジョイントに挿入し、ヘッドを押します。気管内挿管が成功した後、フラットヘッドマイクロシリンジを使用して、調製したLPS溶液をカニューレを通してキログラムあたり3ミリグラムの用量で注入します。終了したら、マイクロシリンジとカニューレを取り出します。
挿管プラットフォームからマウスを取り外し、別のケージに入れて回復します。マウスが回復して意識を取り戻すまで、マウスの呼吸状態を観察します。LPS気管点眼後12時間で、炎症性サイトカイン、TNF-α、および肺乾湿重量比の発現を評価し、他の点眼法と比較した。
非侵襲的中咽頭挿管群の血清TNF-αレベルは、ブランク対照群と比較して有意に増加した。肺乾湿重量比も増加し、外科的気管挿管群と同じレベルに達した。気管の位置を見つける過程で気管を傷つけないことが重要です。
この技術は、非侵襲的な方法で肺に到達する必要がある他の薬物を送達するためにも使用できます。
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本研究では、マウスモデルを用いて口咽頭気管挿管による非侵襲的なリポポリサッカライド(LPS)の気管内投与プロトコルを提示します。この手法は、外科的侵襲を最小限に抑えつつ、LPSを気管および肺に正確に投与することが可能であり、炎症反応の効率的な評価を実現します。
マウスへの非侵襲的な口咽頭経気管LPS注入は、処置による外傷やオフターゲット効果を最小限に抑えつつ、急性肺損傷モデルにおける精密な肺への標的化を可能にします。このアプローチは、肺炎症および薬物送達の堅牢な評価をサポートし、早期呼吸器疾患研究における予測の信頼性を向上させます。本手法の採用により、前臨床ワークフローが効率化され、生物学的ばらつきが低減されるため、ポートフォリオの優先順位付けやトランスレーショナルな整合性に直接的な影響を与えます。
この非侵襲的なLPS投与法は、呼吸器疾患の研究および薬剤開発における、初期探索から前臨床試験までの連続的なプロセスに適合します。