Name: マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:40:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: 学ぶマウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴法。咽頭経口気管挿管を用いてLPSを正確に肺に投与し、炎症性サイトカインTNF-αの上昇や肺乾湿重量比を評価する手法です。手術的侵襲を最小限に抑えた前臨床研究に有用です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本研究は、中国国家自然科学基金会(第81903902号)、中国ポスドク科学基金会(第2019M663457号)、四川省科学技術プログラム(第2020年版)及び成都大学興林奨学生研究プレモーションプロジェクト(第QJRC2022053号)の支援を受けた。

動物実験プロトコルは、成都中医薬大学の管理委員会によってレビューおよび承認されました(記録番号2021-11)。雄のC57 / BLマウス(20〜25 g、6〜8週齢)を本研究に使用しました。マウスは動物室で飼育され、実験中は自由に飲んだり食べたりした。
1. 事前準備
<ol><li>挿管プラットフォームがベース、ライザー、ペーパークリップ、2つの輪ゴム、およびいくつかのひもで構成されていることを確認してください。ひもを取り、ライザーの上部にある2つの穴にひもを通し、ひもの両端をそれぞれライザー上部の小さな突起に結びます。 メモ: 弦と 2 つの穴の間にマウスの頭が通れる場所を空けてください。</li>
	<li>ペーパークリップの両端に 2 本の輪ゴムを結び、ライザーの背面にラバーバンドでペーパークリップをテープで固定します。最後に、ライザーをベースに90°固定します(図1)。</li>
	<li>適切なサイズと長さのカニューレを選択します。20〜30 gのマウスの場合、22 Gのカテーテル(長さ2.5〜3.8 cm)を使用できます11。カニューレをカニューレペンに組み立て、ペンのライトをオンにします(図2)。</li>
	<li>小さな外科用鉗子とパスツールピペットを70%アルコールで消毒して準備します。</li>
</ol>2.試験化合物の調製
<ol><li>3 mgのLPSを1 mLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH 7.2)に重量および溶解して、濃度3 mg/mLのLPS溶液を形成します。</li>
	<li>10 mgのペントバルビタールナトリウムを1 mLの生理食塩水に計量して溶解し、1%ペントバルビタールナトリウム溶液を形成します。.0.45 μmシリンジフィルターを使用して溶液をろ過滅菌します。</li>
</ol>3.非侵襲的中咽頭点滴
<ol><li>50 mg / kg12,13の用量で1%ペントバルビタールナトリウムの腹腔内注射でマウスに麻酔をかけます。.右反射に対する反応の欠如によって麻酔の深さを決定します。</li>
	<li>麻酔をかけたマウスを挿管プラットフォームに置きます。上部の前歯を糸で固定し、2つの前足を輪ゴムで固定します(図3)。</li>
	<li>ピンセットで舌を引き抜き、左手で持ちます。カニューレを口に沿ってゆっくりと、右手を上げて下顎喉頭蓋まで押します。カニューレペンの光を使って気管を見つけ、ゆっくりと気管に挿入します(図4)。</li>
	<li>カニューレを気管に挿入した後、挿管ペンをゆっくりと引き出し、カニューレを中に入れたままにします。パスツールピペットをカニューレジョイントに挿入し、ヘッドを押します(図5)。 注意: マウスの胸が膨らんでいる場合、挿管は成功しています(図6)。</li>
	<li>気管内挿管が成功した後、フラットヘッドマイクロシリンジ14,15を使用して、カニューレを通して3 mg / kgで3 mg / mLのLPSをマウスに注入します(図7)。</li>
	<li>完了したら、カニューレとマイクロシリンジを取り外します。マウスを足場から取り外し、別々にケージに入れて回復します。マウスが回復して意識を取り戻すまで、マウスの呼吸状態を観察します。 注:LPS気管点滴注入後12時間で、動物倫理委員会によって承認された手順に従ってマウスを安楽死させます。血清TNF−αアッセイおよび乾湿肺重量測定は、標準的な手順を用いて実施した。</li>
</ol>

<ol><li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+human+amnion+epithelial+cells+through+endotracheal+instillation+against+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Xi+Bao+Yu+Fen+Zi+Mian+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Protective effect of human amnion epithelial cells through endotracheal instillation against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice.</a> Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 33 (1), 7-11 (2017).</li>
<li>Butt, Y., Kurdowska, A., Allen, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lung+injury%3A+A+clinical+and+molecular+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+and+Lab+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute lung injury: A clinical and molecular review.</a> Archives of Pathology and Lab Medicine. 140 (4), 345-350 (2016).</li>
<li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 342 (18), 1334-1349 (2000).</li>
<li>Fan, E., Brodie, D., Slutsky, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%3A+Advances+in+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome: Advances in diagnosis and treatment.</a> JAMA. 319 (7), 698-710 (2018).</li>
<li>Meyer, N. J., Gattinoni, L., Calfee, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Acute respiratory distress syndrome.</a> Lancet. 398 (10300), 622-637 (2021).</li>
<li>An, N., Yang, T., Zhang, X. X., Xu, M. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bergamottin+alleviates+LPS-induced+acute+lung+injury+by+inducing+SIRT1+and+suppressing+NF-%CE%BAB%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Bergamottin alleviates LPS-induced acute lung injury by inducing SIRT1 and suppressing NF-κB.</a> Innate Immunity. 27 (7-8), 543-552 (2021).</li>
<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+trans-oral+and+trans-tracheal+intratracheal+instillations+in+a+murine+model+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Comparative study of trans-oral and trans-tracheal intratracheal instillations in a murine model of acute lung injury.</a> The Anatomical Record. 295 (9), 1513-1519 (2012).</li>
<li>Virag, J. A., Lust, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+artery+ligation+and+intramyocardial+injection+in+a+murine+model+of+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (52), e2581(2011).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Panaxydol+attenuates+ferroptosis+against+LPS-induced+acute+lung+injury+in+mice+by+Keap1-Nrf2%2FHO-1+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Panaxydol attenuates ferroptosis against LPS-induced acute lung injury in mice by Keap1-Nrf2/HO-1 pathway.</a> Journal of Translational Medicine. 19 (1), 96(2021).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+epoxide+hydrolase+inhibitor+attenuates+lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+and+improves+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Soluble epoxide hydrolase inhibitor attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury and improves survival in mice.</a> Shock. 47 (5), 638-645 (2017).</li>
<li>Nosaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+tube+length+of+orotracheal+intubation+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Optimal tube length of orotracheal intubation for mice.</a> Laboratory Animals. 53 (1), 79-83 (2019).</li>
<li>Cicero, L., Fazzotta, S., Palumbo, V. D., Cassata, G., Lo Monte, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthesia+protocols+in+laboratory+animals+used+for+scientific+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Bio-Medica%3A+Atenei+Parmensis%22%5BJournal%5D)">Anaesthesia protocols in laboratory animals used for scientific purposes.</a> Acta Bio-Medica: Atenei Parmensis. 89 (3), 337-342 (2018).</li>
<li>Ehrentraut, H., Weisheit, C. K., Frede, S., Hilbert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+acute+lung+injury+in+mice+by+direct+intratracheal+lipopolysaccharide+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Inducing acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation.</a> Journal of Visualized Experiments. (149), e59999(2019).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT6+inhibits+ferroptosis+and+alleviates+acute+lung+injury+by+regulating+P53%2FSLC7A11+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">STAT6 inhibits ferroptosis and alleviates acute lung injury by regulating P53/SLC7A11 pathway.</a> Cell Death & Disease. 13 (6), 530(2022).</li>
<li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+operational+tolerance+and+generation+of+regulatory+cells+after+intratracheal+delivery+of+alloantigen+combined+with+nondepleting+anti-CD4+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Induction of operational tolerance and generation of regulatory cells after intratracheal delivery of alloantigen combined with nondepleting anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 76 (9), 1305-1314 (2003).</li>
<li>Lan, W. Activation of mammalian target of rapamycin (mTOR) in a murine model of lipopolysaccharide (LPS) -induced acute lung injury (ALI). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Peking+Union+Medical+College%22">Peking Union Medical College</a>. , PhD Thesis (2010).</li>
<li>Lv, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tenuigenin+ameliorates+acute+lung+injury+by+inhibiting+NF-%CE%BAB+and+MAPK+signalling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Physiology+%26+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Tenuigenin ameliorates acute lung injury by inhibiting NF-κB and MAPK signalling pathways.</a> Respiratory Physiology & Neurobiology. 216, 43-51 (2015).</li>
<li>Yang, H., Lv, H., Li, H., Ci, X., Peng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oridonin+protects+LPS-induced+acute+lung+injury+by+modulating+Nrf2-mediated+oxidative+stress+and+Nrf2-independent+NLRP3+and+NF-%CE%BAB+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Oridonin protects LPS-induced acute lung injury by modulating Nrf2-mediated oxidative stress and Nrf2-independent NLRP3 and NF-κB pathways.</a> Cell Communication and Signaling. 17 (1), 62(2019).</li>
<li>Im, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+orthotopic+lung+cancer+mouse+model+via+thoracotomy+and+orotracheal+intubation+enabling+in+vivo+imaging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Improvement of orthotopic lung cancer mouse model via thoracotomy and orotracheal intubation enabling in vivo imaging studies.</a> Laboratory Animals. 48 (2), 124-131 (2014).</li>
<li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation%3A+description%2C+evaluation+and+comparison+with+transillumination%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Laboratory Animals. 42 (2), 222-230 (2008).</li>
<li>Nelson, A. M., Nolan, K. E., Davis, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+orotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repeated orotracheal intubation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (157), e60844(2020).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvesicles+packaging+IL-1%CE%B2+and+TNF-%CE%B1+enhance+lung+inflammatory+response+to+mechanical+ventilation+in+part+by+induction+of+cofilin+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Microvesicles packaging IL-1β and TNF-α enhance lung inflammatory response to mechanical ventilation in part by induction of cofilin signaling.</a> International Immunopharmacology. 63, 74-83 (2018).</li>
<li>Feng, Z. Comparative study of different intratracheal instillation in acute lung injury model of mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Jilin+University%22">Jilin University</a>. , Master's Thesis (2010).</li>
<li>Chen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+acute+lung+injury+mice+model+established+by+intranasal+and+intratracheal+instillation+of+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Comparison of acute lung injury mice model established by intranasal and intratracheal instillation of lipopolysaccharide.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (02), 222-227 (2022).</li>
<li>Luckow, B., Lehmann, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+bronchoalveolar+lavage+in+mice+by+orotracheal+intubation+avoiding+tracheotomy%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">A simplified method for bronchoalveolar lavage in mice by orotracheal intubation avoiding tracheotomy.</a> BioTechniques. 71 (4), 534-537 (2021).</li>
<li>Cai, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+intratracheal+intubation+to+study+the+pathology+and+physiology+of+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), e50601(2013).</li>
</ol>

著者は開示するものは何もありません。

最初に、気管19の位置を見つけるために口腔内を調べました。しかし、この過程で、C57/BLマウスの気管が狭く、内視鏡20などの機器の助けを借りずにこの方法で正しい位置を見つけることが困難であることを発見しました。さらなる調査の結果、挿管器ランプからの光が体の表面を透過し、オペレータがカニューレ21の位置を決定することを可能にすることを見出した。
チューブが気管に入ったかどうかを確認するために、最初に、氷の上に置いて冷却した小さな鏡を使用してみました。挿管後、鏡を用いてカニューレ開口部に近づいた。鏡に霧が現れた場合、挿管は成功したと見なされました。しかし、この検査方法では、カニューレが気管に入ったかどうかを正確に判断できないことがわかりました。まず、カニューレの頭部がマウスの口に近く、鏡に現れたミストが口からの呼気によるものかどうかは判断できませんでした。第二に、ミラーを冷却する必要がありました。常時使用すると、ミラーを冷却するのに必要な時間...

急性肺損傷(ALI)は一般的な臨床症候群です。さまざまな病原性因子の下で、肺上皮細胞および血管内皮細胞の生理学的障壁の破壊は、肺胞透過性の増加をもたらし、それによって肺コンプライアンスの低下、肺水腫、および重度の低酸素血症を引き起こします1。急性呼吸窮迫症候群(ARDS)は、ALIの最も重篤な形態です。制御されていない炎症と酸化ストレス損傷は、ALIとより重篤なARDSの主な原因であると考えられています2。外傷により肺胞上皮細胞が直接傷害を受けると、肺胞マクロファージの炎症反応連鎖が活性化し、肺に炎症が起こります3。世界的には、年間300万人以上の急性ARDS患者がおり、集中治療室の入院の約10%を占めています。さらに、重症例の死亡率は46%と高い4,5,6。したがって、その病因を研究するためにALIの適切な動物モデルを確立する必要がある。マウスは、その気道がALI研究のためにヒトの気道をうまくシミュレートできるため、ALIの研究で最も一般的に使用される実験動物です。さらに、ALIは、大量の炎症性細胞浸潤、肺血管透過性の増加、および肺水腫として現れます。血清中の炎症性サイトカインおよび肺乾燥湿潤重量比の変化は、ALI7の程度を反映する。
現在、マウスにおけるLPS誘発ALIをモデル化するための主な方法には、鼻腔内および外科的気管挿管が含まれます8,9。今回,非侵襲的中咽頭挿管によりLPSを気管内に送達する新しい手法を提案する.この方法は、照明付き挿管器を使用してマウスの気管を見つけ、LPSを気管と肺に送達します。この方法は、鼻腔内送達法よりも正確にLPSを肺に送達する。外科的気管挿管と比較して、この方法は手術を必要とせず、創傷を引き起こすことを回避し、マウスの痛みを軽減する10。したがって、この方法は、ALIのより説得力のあるマウスモデルを確立するために使用することができる。

<table><tbody><tr><td>リポ多糖類</td><td>MERK</td><td>L4130</td><td>LPS</td></tr><tr><td>マイクロリットルシリンジ</td><td>上海高靈工業貿易有限公司</td><td></td> 10028505008124 <td>LPS</td></tr><tr><td>マウスカニューレ</td><td>RWDライフサイエンス</td><td>803-03008-00</td><td>マウスカニューレ</td></tr><tr><td>マウス挿管キット</td><td>RWDライフサイエンス</td><td>903-03027-00</td><td>ベース、ライザー、挿管器、外科用鉗子などを含むひも</td></tr><tr><td>パスツールピペット</td><td>バイオシャープライフサイエンス</td><td>BS-XG-03</td>挿<td>管の成功を確認するために</td></tr><tr><td>ペントバルビタールナトリウム</td><td>北京化学株式会社、中国</td><td>20220918</td><td>マウスを麻酔するために</td></tr></tbody></table>

マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴

Noninvasive Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation in Mice

リポ多糖(LPS)またはエンドトキシンによって誘導される急性肺損傷(ALI)マウスモデルは、急性肺損傷または急性炎症の動物実験において依然として最も一般的に使用されているモデルの1つです。急性肺損傷マウスモデルにおいて現在最も一般的に使用されている方法は、LPSの腹腔内注射とLPSの気管注入のための気管切開である。しかし、前者の方法は肺の標的化を欠いて他の臓器に損傷を与え、後者の方法は手術外傷、感染リスク、および低い生存率を誘発します。ここでは,マウスへのLPS点滴に対する非侵襲的中咽頭気管内挿管法を推奨する.この方法では、LPSは、気管内挿管のための装置の助けを借りて肺に点滴される口腔咽頭腔を通して気管に非侵襲的に導入される。この方法は、肺の標的化を保証するだけでなく、動物の損傷や死亡のリスクを回避します。このアプローチは、急性肺障害の分野で広く使用されるようになることが期待されます。

LPS点眼後12時間における炎症性サイトカインTNF-αの発現と肺乾湿重量比を評価することにより,マウスにおけるLPS点滴の提案方法を検証した。実験には、ブランクコントロール(治療なし)、外科的挿管16、鼻腔内挿管17,18、および非侵襲的中咽頭挿管(n = 6)の4つのグループがありました。ブランク対照群と比較して、非侵襲的中咽頭挿管群における血清TNF−αレベルは有意に増加した(図8A)。肺乾湿重量比も増加し(図8B)、外科的気管挿管群と同じレベルに達した。データセットは、対応のないANOVAおよび事後多重比較Tukey Kramer検定を使用して統計的に分析されました。すべてのデータはSEM±平均値として示され、p &lt; 0.05のレベルは統計的に有意であると考え...

ここでは、非侵襲的中咽頭気管内挿管 を介した 気管内リポ多糖(LPS)送達のプロトコルを提案します。この方法は、動物の外科的処置の外傷を最小限に抑え、LPSを気管、次に肺に正確に送達します。

The acute lung injury (ALI) mouse model induced by lipopolysaccharide (LPS) or endotoxin is still among the most commonly used models in animal studies of ...

私たちのプロトコルは、気管から肺へのLPSの新しい非侵襲的送達方法をより正確に提案します。この方法を初めて試す人は、気管の位置を見つけることに多くの努力を払う必要があります。挿管プラットフォームを準備するには、ひもを2つの穴に通し、その端をライザー上部の小さな突起に結び付けます。次に、クリップの両端に2本の輪ゴムを取り付け、ライザーの背面にテープで留めます。最後に、ライザーをベースに90度の角度で固定します。カニューレをカニューレペンに組み立て、ペンのライトをオンにします。次に、70%アルコールを使用して小型外科用鉗子とパスツールピペットを消毒します。試験化合物溶液を調製するには、1ミリリットルのpH 7.2 PBSに3ミリグラムのリポ多糖(LPS)を加えます。次に、10ミリグラムのペントバルビタールナトリウムを1ミリリットルの生理食塩水に溶解し、0.45マイクロメートルのシリンジフィルターを使用して溶液をろ過します。麻酔をかけたマウスを挿管プラットフォームに置きます。次に、上部の前歯をひもで固定し、2つの前足を輪ゴムで固定します。ピンセットを使用して、舌を引き抜いて保持します。カニューレを口に沿って下顎喉頭蓋までゆっくりと押します。カニューレペンのライトで気管の位置を確認し、ゆっくりとカニューレを挿入します。次に、挿管ペンを引き出し、カニューレを内側に残します。パスツールピペットをカニューレジョイントに挿入し、ヘッドを押します。気管内挿管が成功した後、フラットヘッドマイクロシリンジを使用して、調製したLPS溶液をカニューレを通してキログラムあたり3ミリグラムの用量で注入します。終了したら、マイクロシリンジとカニューレを取り出します。挿管プラットフォームからマウスを取り外し、別のケージに入れて回復します。マウスが回復して意識を取り戻すまで、マウスの呼吸状態を観察します。LPS気管点眼後12時間で、炎症性サイトカイン、TNF-α、および肺乾湿重量比の発現を評価し、他の点眼法と比較した。非侵襲的中咽頭挿管群の血清TNF-αレベルは、ブランク対照群と比較して有意に増加した。肺乾湿重量比も増加し、外科的気管挿管群と同じレベルに達した。気管の位置を見つける過程で気管を傷つけないことが重要です。この技術は、非侵襲的な方法で肺に到達する必要がある他の薬物を送達するためにも使用できます。

noninvasive-intratracheal-lipopolysaccharide-instillation-in-mice

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

気管内点滴は直接肺に溶質を提供します。この手順では、肺の遠位領域にinstillateの配信をターゲットとし、従って多くの場合、肺胞の勉強を目的とした研究に組み込まれています。我々は、マウスで気管内点滴を行うための詳細な生存のプロトコルを提供しています。...

マウス肺への溶質の直接気管点眼

我々は気管を経由して麻酔したマウスの肺に試験物質の非外科的配信を示しています。このメソッドは、肺の細菌やウイルス性病原体への曝露、サイトカイン、抗体、ビーズ、化学物質、または染料を許可します。我々は、さらにフローサイトメトリーのために肺および肺リンパ節（LDLNs）の収穫と処理を説明します。...

フローサイトメトリーによる肺および肺リンパ節の分析とマウスの非外科的気管内注入

出典: Radulovic, K. ほか 腸のバリア突破後に微生物由来産物の進入を模倣するためにマウスにリポポリサカリドを注射すること。 J. Vis.

マウスにおける細菌性リポ多糖の腹膜内注射による全身免疫反応の研究

ヒトにおける肺疾患の状態を模倣するモデルの使用は、特定の疾患の病態および/または病因を研究するため、および治療的介入を開発するために重要である。ここで直接マウス肺への外因性材料を提供することができ、非侵襲的気管内挿管法が提示されている。...

マウス肺の病理生理学を研究するための非侵襲的気管内挿管

病原体感染に対する宿主の免疫応答が厳密に調節されたプロセスである。マウスにおけるリポ多糖肺露光モデルを利用し、それは疾患の病因に関連付けられている複雑な機構の高解像度の評価を実施することができる。...

マウスにおける宿主の免疫応答を評価する口腔咽頭気管内PAMP管理および気管支肺胞の活用

試薬の挿管媒介気管内（IMIT）点滴は、呼吸器疾患を研究するための優れた、非侵襲的な方法だけでな​​く、肺に直接治療薬を浸透させるための方法である。これは前臨床試験のために適して迅速かつ高度に再現可能な方法である。...

挿管媒介気管内（IMIT）点眼：非侵襲的、肺特異的送達システム

この記事では、挿管を経由して、マウスの気管に直接ブレオマイシンを投与するための迅速かつ簡単な方法を提示します。この方法の主な利点は、習得が容易で、それは非常に再現可能であることであり、特殊な装置または長い回復時間を必要としません。...

マウスの気管の迅速な挿管のための改善された方法

マウスの下気道へのインフルエンザ菌の気管内接種手順を実演します。これは、マウスモデルで気道の炎症を調節するシグナル伝達経路を研究するための非常に有用なツールです。...

の気管内の管理<em&gt;インフルエンザ菌</em&gt;マウスモデルにおいて気道炎症を研究します

ここでは、直接気管内リポ多糖類の含有によってマウスの急性肺損傷を誘発し、血液サンプル、気管支藻胞洗浄液、および肺組織のFACS分析を行うステップバイステップの手順です。最小限の侵襲性、簡単な処理、良好な再現性、および疾患の重症度の滴定は、このアプローチの利点です。...

直接気管内リポ多糖刺激によるマウスの急性肺損傷の誘導

吸入用の乾燥粉末製剤は、呼吸器疾患の治療に大きな可能性を秘めています。ヒト研究に入る前に、前臨床試験における乾燥粉末製剤の有効性を評価する必要がある。気管内経路を介したマウスにおける乾燥粉末の投与の簡便かつ非侵襲的な方法が提示される。...

マウスにおける乾燥粉末製剤の気管内投与

本研究では、非侵襲的な気管内挿入技術が、基本的な喉頭鏡を用いてラットでALIを発生させることが示され、肺へのLPSの正確な供給が保証されています。LPSは喉頭鏡を用いた気管内チューブ から 点滴されます。肺損傷の規模は複数の時点で評価されます。...

齧歯類の急性肺損傷を誘発するための非侵襲的気管内リポ多糖投与

学ぶマウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴法。咽頭経口気管挿管を用いてLPSを正確に肺に投与し、炎症性サイトカインTNF-αの上昇や肺乾湿重量比を評価する手法です。手術的侵襲を最小限に抑えた前臨床研究に有用です。

マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴

さらに動画を探す