良性胃体および外皮上皮の生検からの患者由来胃オルガノイドの確立と特性評価
January 26th, 2024
胃患者由来オルガノイドは研究での利用が増加しているが、標準化された播種密度を持つ単一細胞消化物からヒト胃オルガノイドを生成するための正式なプロトコルが不足している。このプロトコルは、上部内視鏡検査中に得られた生検組織から胃オルガノイドを確実に作成するための詳細な方法を提示します。
私たちの研究は、胃がんの遺伝的原因に焦点を当てています。特に、CDH1遺伝子またはCTNNA1遺伝子のいずれかに疾患の原因となる多様体による遺伝性びまん性胃がんに関心があります。また、胃がんのリスクと発がんにおけるBRCA1とBRCA2の役割についても調査しています。
オルガノイドはさまざまな研究分野でますます利用されており、消化器病学も例外ではないため、これらのオルガノイド、特に患者由来の胃オルガノイドを生成するためのこれらの技術の標準化が必要になっています。私たちのプロトコルは、胃の幽門部と体部の両方の生検から患者由来の胃オルガノイドを確実に生成するための段階的な方法を提供します。特に、単一細胞消化法を利用して、細胞の標準化された播種を可能にし、異なる患者から生成されたオルガノイド間の信頼性の高い比較を行うよう努めています。
我々の知見は、胃の体部から患者由来の胃オルガノイドと比較して、幽門領域からのオルガノイドは、最初の播種後20日間で実際にはより数が多く、サイズが大きくなることを示しています。これらの発見は、胃のさまざまな領域に由来する胃オルガノイドを利用しようとしている研究者によって考慮されるべきです。
概要
この研究は、CDH1およびCTNNA1遺伝子の変異に焦点を当て、胃がんの遺伝的原因を調査します。この研究は、上部内視鏡検査中に得られた生検組織から患者由来の胃オルガノイドを生成するための信頼性の高いプロトコルを提示し、胃の胃窩部および体部から得られたオルガノイドの成長速度の違いを示しています。
主要な研究構成要素
研究分野
- 胃がんの遺伝的原因
- 胃オルガノイドの生成
- 生物学的技術の標準化
背景
- 遺伝性びまん性胃がんと遺伝的変異
- 胃腸研究におけるオルガノイドの使用
- 胃オルガノイド開発の標準化されたプロトコル
使用された方法
- 胃組織生検からの単一細胞の分離
- 生物学的モデルとしての患者由来の胃オルガノイド
- 培養における細胞消化および播種プロトコル
主な結果
- 胃窩部の生検組織からのオルガノイドは、体部の組織からのオルガノイドと比較して、より大きなサイズと成長速度を示します
- 異なる患者間でのオルガノイドの形態に大きな変異があります
- 標準化された方法により、オルガノイドの信頼性の高い成長比較が可能になります
結論
- この研究は、胃がん研究の将来に役立つ、胃オルガノイドを生成するための信頼性の高い方法を確立しました。
- 結果は、実験の再現性にとって重要な、オルガノイドの成長に対する組織の起源の重要性を強調しています。
よくある質問
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:20
Isolating Single Cells from Upper Endoscopy Biopsies Derived from Gastric Patients for Organoid Generation
3:36
Embedding Gastric Biopsy‐Derived Single Cells in a Basement Membrane Matrix Dome for Organoid Generation
5:37
Routine Passaging of Patient‐Derived Gastric Organoids Through Fragmentation
