October 11th, 2024
ここで紹介するプロトコールは、ショ糖密度勾配遠心分離により 、シロイヌナズナからトランス ラトーム、リボソームに関連するmRNAを非ポリソームおよびポリソームRNAに単離するためのポリソームプロファイリングを含みます。この方法は、熱ストレスを受けた シロイヌナズナの翻訳効率を示しています。
私たちの研究では、植物の熱ストレス時の並進制御を調査しています。非ポリソーム結合RNAとポリソーム結合RNAを解析することで、植物が翻訳制御を通じてストレス耐性をどのように制御しているかを研究することを目指しています。そこで、ここでは、熱ストレス下でのシロイヌナズナの翻訳効率を調査するためのポリソームプロファイリングとポリソームRNA単離プロトコルを提供します。
このプロトコルでは、より詳細な経原子解析に不可欠なスパイクイン正規化を使用して翻訳効率を計算するための包括的で標準化された方法を提供します。私たちのプロトコルは、少量の有機バッファーを利用しながら、より高いRNA収量を達成することにより、ポリソームRNAを単離するためのより簡単で効率的な方法を提供します。
この研究は、非ポリソーム結合およびポリソーム結合RNAの両方を分析することで、熱ストレス下でのアラビドプシスの翻訳調節を調査します。主な結果は、ストレス条件下での翻訳効率を研究するための効果的なポリソームプロファイリング法を実証しています。