Summary
Protocol
- Knip de staart stukken (3mm) en Mark oren.
- Voeg 720 m l STE en 30 m l proteïnase K (10 mg / ml bouillon).
- Incubeer bij 55 ° C bij verhitting blok en vortex elk uur gedurende 3 uur bij topsnelheid voor 10 seconden.
- Inactiveren proteïnase K bij 70 ° C gedurende 5 minuten.
- Quench op ijs gedurende 5 minuten.
- Centrifuge tail DNA gedurende 10 minuten op volle snelheid.
- Giet in nieuwe buis die 720 m l isopropanol.
- Neerslag DNA door het omkeren van de buis of vortexen.
- Spin down DNA gedurende 5 minuten op volle snelheid. Verwijder supernatant.
- Was de pellet met 70% ethanol.
- Spin down genomisch DNA 5 minuten op volle snelheid. Verwijder supernatant.
- Laat DNA drogen 1-2 minuten.
- Resuspendeer DNA in 100-200 m l afhankelijk van de grootte van de pellet.
- Plaats buis bij 55 ° C gedurende 1 uur tot ontbinding van DNA te vergemakkelijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
STE | Buffer | 100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O | ||
TE | Buffer | 100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl |