Summary
Protocol
- Tagliare i pezzi di coda (3 mm) e le orecchie marchio.
- Aggiungere 720 m l STE e 30 m l proteinasi K (10 mg / ml di brodo).
- Incubare a 55 ° C sul blocco di riscaldamento e vortice ogni ora per 3 ore alla massima velocità per 10 secondi.
- Inattivare proteinasi K a 70 ° C per 5 minuti.
- Quench in ghiaccio per 5 minuti.
- Centrifuga DNA coda per 10 minuti a piena velocità.
- Decantare in nuovo tubo contenente 720 m l Isopropanolo.
- DNA precipitato, invertendo il tubo o vortex.
- Spin down del DNA per 5 minuti alla massima velocità. Rimuovere il surnatante.
- Lavare pellet con etanolo al 70%.
- Spin down DNA genomico 5 minuti a piena velocità. Rimuovere il surnatante.
- Lasciare DNA asciugare per 1-2 minuti.
- Risospendere DNA in 100-200 l m a seconda delle dimensioni del pellet.
- Tubo posto a 55 ° C per 1 ora per facilitare la dissoluzione del DNA.
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Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
STE | Buffer | 100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O | ||
TE | Buffer | 100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl |