Summary
Protocol
- Cortar pedaços da cauda (3mm) e as orelhas marca.
- Adicionar 720 m l STE e 30 m l Proteinase K (10 ações mg / ml).
- Incubar a 55 ° C em bloco de aquecimento e vortex a cada hora durante 3 horas a velocidade máxima por 10 segundos.
- Inativar proteinase K a 70 ° C por 5 minutos.
- Saciar em gelo durante 5 minutos.
- Centrífuga DNA da cauda por 10 minutos na velocidade máxima.
- Decantar em novo tubo contendo 720 m l Isopropanol.
- DNA precipitar invertendo o tubo ou vórtex.
- Spin down DNA por 5 minutos na velocidade máxima. Remover o sobrenadante.
- Lavar pellet com etanol 70%.
- Spin down DNA genômico 5 minutos à velocidade máxima. Remover o sobrenadante.
- Permitir DNA para secar por 1-2 minutos.
- Ressuspender DNA no 100-200 l m dependendo do tamanho do pellet.
- Coloque o tubo a 55 ° C por 1 hora para facilitar a dissolução do DNA.
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Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
STE | Buffer | 100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O | ||
TE | Buffer | 100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl |