출처: 이안 페퍼 박사와 찰스 게르바 박사의 연구소 – 애리조나 대학교 시연 저자: 브래들리 슈미츠
중합체 연쇄 반응 (PCR)은 토양, 물 및 대기 환경에 존재하는 미생물을 검출하는 데 사용되는 기술입니다. DNA의 특정 섹션을 증폭시킴으로써, PCR은 종, 균주 및 세로바/파토바 수준으로 표적 미생물의 검출 및 식별을 용이하게 할 수 있다. 이 기술은 또한 견본에 있는 미생물의 전체 지역 사회를 특성화하기 위하여 이용될 수 있습니다.
전문 성장 매체를 사용하여 실험실에서 미생물의 배양은 오랜 기술이며 환경 샘플에서 미생물의 검출을 위해 사용 되어 있습니다. 자연 환경에 있는 많은 미생물, 살아있는 동안, 신진 대사 활동의 낮은 수준을 유지 하 고/또는 두 배로 시간 따라서 실행 가능 하지만 비 culturable (VBNC) 유기체로 불립니다. 배양 기반 기술의 사용은 이러한 미생물을 감지할 수 없으므로 샘플에서 미생물 집단에 대한 철저한 평가를 제공하지 않습니다. PCR의 사용은 유전 서열의 증폭이 일반적으로 환경 견본에 존재하는 미생물의 사전 농축을 요구하지 않기 때문에, 더 이상 살아 있거나 활성화되지 않는 세균, VBNC 유기체 및 그(것)의 검출을 허용합니다. 그러나 PCR은 앞서 언급한 생존 가능성 및 활동 상태를 구분할 수 없습니다. 하나 이상의 배양 기반 기술과 결합될 때, 미생물의 특정 하위 집합의 생존가능성은 여전히 결정될 수 있다.
Principles
Procedure
1. 샘플 수집 오거 또는 삽을 사용하여 토양을 채집하여 결정된 깊이로 내려간다. 뿌리 부각 (주변 토양의 좁은 영역 및 식물 뿌리와 관련 미생물에 의해 영향을 받는 토양의 좁은 영역)에서 토양을 수집하는 경우, 단지 수집 배럴에 토양을 타격하여 식물 뿌리 주위에서 직접 수집합니다. 침지 스틱의 끝을 들고 있는 동안 멸균 플라스틱 병을 물에 담그어 물 샘플을 수집합니다. </…
Results
도 1에서,DNA 사다리(레인 1)는 PCR 제품의 대역에 대한 크기 및 대략적인 농도에 대한 기준을 제공한다. 음의 대조군(레인 2)은 어떤 유전 물질을 포함하지 않으며, 양극(차선 3)은 표적 대역의 크기와 위치를 나타내는 표적 DNA를 포함하는 것으로 알려진 템플릿으로부터 증폭된다. 샘플 4, 6, 8 및 9는 양성 대조군으로서 유사한 대역 패턴을 나타내므로 이러한 샘플이 표적 유전 물질을 함유…
Applications and Summary
PCR은 환경에서 병원균의 존재 또는 부재를 신속하게 결정하기 위해 사용될 수 있습니다. 예를 들어, 뇌를 먹는 아메바, Naegleria fowleri에 특이적인 프라이머는 DNA를 증폭시키고 유기체가 샘플에 존재하는 경우 젤에 강한 밴드를 생성합니다. 단일 유기체가 주요 관심사가 아니라 다양한 유기체로부터 독소 생산과 관련된 유전자인 경우, PCR은 이러한 특정 유전 물질의 존재 또는 부재를 결정하?…
내레이션 대본
1. 샘플 수집 오거 또는 삽을 사용하여 토양을 채집하여 결정된 깊이로 내려간다. 뿌리 부각 (주변 토양의 좁은 영역 및 식물 뿌리와 관련 미생물에 의해 영향을 받는 토양의 좁은 영역)에서 토양을 수집하는 경우, 단지 수집 배럴에 토양을 타격하여 식물 뿌리 주위에서 직접 수집합니다. 침지 스틱의 끝을 들고 있는 동안 멸균 플라스틱 병을 물에 담그어 물 샘플을 수집합니다. </…