C. 예쁜꼬마선충 생식선 압출: 빠른 해부 기술

- M9 완충액이 들어있는 튜브에서 원하는 발달 단계에서 최대 150 개의 자웅체 벌레를 수집합니다. M9 완충액으로 세척하고 샘플을 원심분리하여 벌레에서 박테리아를 제거합니다.

샘플 손실을 방지하기 위해 상등액을 제거할 때 해부 현미경으로 튜브를 봅니다. 최소한의 M9 완충액으로 지렁이를 유리 접시에 옮깁니다. 레바미솔을 첨가하여 기생충을 마취시킵니다.

기생충의 머리와 두 개의 구근 모양의 구조를 포함하는 인두 또는 앞장을 찾습니다. 두 개의 바늘을 사용하여 인두 뒤에 있는 벌레를 잘라냈습니다. 조직에 영향을 미치지 않도록 신속하게 해부를 완료하십시오.

큐티클이 파괴되면 두 개의 생식선 팔이 벌레의 내부 압력으로 인해 몸 밖으로 돌출되거나 밀려납니다.

이 예에서는 면역형광 분석을 위해 성충의 생식선을 해부합니다.

- 원하는 발달 단계에서 100-150개의 웜을 선택하고 100마이크로리터의 M9 버퍼가 들어 있는 1.5ml 마이크로 원심분리기 튜브에 수집합니다. 그런 다음 마이크로 원심분리기 튜브에 900마이크로리터의 M9 버퍼를 더 채우고 실온에서 1분 동안 1,000회 g으로 원심분리합니다.

해부 현미경으로 900마이크로리터의 M9 버퍼를 부드럽게 제거합니다. 그런 다음 세척을 두 번 더 반복하여 부착된 박테리아를 대부분 제거합니다.

다음으로, 보어가 넓어진 200마이크로리터 마이크로피펫 팁을 사용하여 100마이크로리터의 M9 버퍼에 있는 웜을 평평한 바닥 유리 시계 접시로 옮깁니다. 그런 다음 접시에 1-3 마이크로리터의 0.1 몰 레바미솔을 넣고 부드럽게 휘젓습니다. 이제 두 개의 주사기에 두 개의 25 게이지 바늘을 연결하여 각 손에 하나의 해부 도구를 만듭니다.

해부 현미경으로 각 바늘을 각 벌레 아래와 위에 놓고 가위와 같은 동작을 사용하여 두 번째 인두구 근처의 각 벌레를 미세하게 자릅니다. 레바미솔이 효과를 유지할 수 있도록 모든 동물을 적어도 한 번씩 5분 이내에 잘라냅니다.

- 접시에 담긴 동물의 해부는 5분 이내에 완료하는 것이 매우 중요합니다.

- 돌출된 생식선이 보이지 않으면 해당 동물은 건너뛰십시오. 적절한 압출 생식선이 여기에 보입니다.