May-Grunwald Giemsa 염색: 골수 세포를 염색하는 방법

- May-Grunwald Giemsa 또는 MGG 염색은 골수 세포 또는 BMC의 차등 염색을 위한 2단계 절차입니다. 염색을 시작하려면 유리 슬라이드에 BMC의 집중된 단층 도말을 얻습니다. 도말이 자연 건조되도록 합니다. 먼저 메탄올에 용해된 에오신과 메틸렌 블루를 함유한 May-Grunwald 염색으로 세포를 처리합니다.

용매 메탄올은 처음에 세포를 고정시킵니다. 순 양전하를 띤 염기성 염료인 메틸렌 블루(Methylene blue)는 핵산과 같은 산성 세포 성분을 염색합니다. 순 음전하를 띤 산성 염료인 에오신(Eosin)은 세포질 양이온 단백질과 같은 기본 세포 구성 요소를 염색합니다. pH 6.8의 완충 용액으로 세포를 처리하여 염료가 침전되어 세포 물질과 잘 결합할 수 있도록 합니다.

또한 산성 염료와 염기성 염료를 함유한 Giemsa 염색으로 세포를 처리하여 전체적인 염색 효과를 높입니다. 염기성 염료인 하늘색과 메틸렌 블루는 산성 성분의 염색을 강화하고, 산성 염료인 에오신 염료는 염기성 성분의 염색을 증가시킵니다.

현미경으로 보면 적혈구는 분홍빛이 도는 갈색으로 나타나고 혈소판은 작은 보라색 점으로 나타납니다. 과립구는 자주색-파란색 다엽 핵과 빨간색 과립 세포질을 나타냅니다. 무과립구는 큰 자주색-분홍색 핵이 있는 맑은 파란색으로 나타납니다. 다음 프로토콜에서는 골수 세포의 MGG 염색을 보여줍니다.

- 염색을 위해 골수 세포를 준비하려면 먼저 필터 카드가 미리 부착된 일회용 챔버로 밀어 넣고 챔버를 세포 원심분리기에 넣습니다. 각 필터 카드 챔버에 100마이크로리터의 FACS 버퍼를 추가하고 슬라이드를 잠시 원심분리합니다. 스핀이 끝나면 각 챔버에 100마이크로리터의 세포를 추가하고 세포를 원심분리합니다.

그런 다음 공기 건조를 위해 챔버에서 슬라이드를 조심스럽게 제거합니다. 골수 세포를 염색하려면 May-Grunwald 용액이 들어 있는 Coplin jar에 슬라이드를 5분 동안 담그십시오. 다음으로, 슬라이드를 pH 6.8의 완충 용액 병에 1분 동안 옮깁니다. 그런 다음 슬라이드를 Giemsa R 용액에 10분 동안 옮긴 다음 pH 중성수로 10초 동안 세척합니다.

세척 후 슬라이드를 자연 건조시키고 각 샘플에 장착 매체 한 방울을 바르십시오. 그런 다음 커버 유리의 한쪽 가장자리를 슬라이드에 놓고 커버 유리를 셀 위로 조심스럽게 내리면서 부드럽게 눌러 기포를 제거합니다.