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마우스로부터 분리된 좌골 신경부터 시작합니다.
신경 내의 뉴런을 형질감염시켜 형광 세포질 단백질을 발현했습니다.
신경을 짓밟아 부상을 유발했고, 이는 봉합사로 표시되었습니다.
해당 부위의 손상된 축삭 분절이 퇴화되고 모집된 대식세포가 파편을 제거합니다.
슈완 세포는 증식하여 안내 트랙을 형성하고 축삭 재성장을 촉진하는 신경 영양 인자를 분비합니다. 축삭은 이 트랙을 따라 확장되어 신경을 재생합니다.
세포 구조를 보존하기 위해 신경을 고정한 다음 부착된 비신경 조직을 제거합니다.
잔류 고정액을 제거하기 위해 완충액으로 세척하십시오.
현미경 슬라이드에 신경을 놓고 설치 매체를 바르고 커버슬립을 놓습니다.
이미징을 위해 동일한 초점면 내에 축삭을 배치하기 위해 신경을 평평하게 합니다.
낙후형광 현미경을 사용하여 압착 부위에서 원위 끝까지 축삭을 추적하여
재생 길이를 측정합니다.
DRG를 신경근 및 좌골 신경과 함께 해부 현미경 아래에서 마이크로 가위와 마이크로 겸자로 조심스럽게 분리합니다.
그런 다음 좌골 신경을 섭씨 4도에서 밤새 4% PFA로 직접 옮깁니다. 해부 현미경으로 형광 표지 감각 축삭을 이미지화하고 측정하려면 마이크로 가위와 마이크로 겸자로 고정된 좌골 신경에 부착된 조직과 막을 조심스럽게 벗겨냅니다. 그런 다음 PBS로 신경을 세 번 세척합니다.
다음으로 좌골 신경을 슬라이드 위에 놓고 똑바로 유지합니다. 신경 주위에 80마이크로리터의 퇴색 방지 용액을 추가한 다음 그 위에 덮개를 깔아주세요. 장착된 전체 조직을 압력으로 평평하게 만듭니다.
그런 다음 모자이크 획득 및 이미지 처리를 위한 액세서리가 장착된 거꾸로 된 낙광 현미경 아래에 납작한 조직을 놓습니다. 재생된 축삭의 길이를 측정할 때 좌골 신경에서 식별 가능한 모든 형광 표지 축삭을 압착 부위에서 원위 축삭 끝까지 추적합니다.
