마이크로어레이 스크리닝을 통한 박테리아 퇴치성 폴리머의 고처리량 식별

여러 폴리머 스팟이 있는 멸균된 아가로스 코팅 마이크로어레이 슬라이드를 멀티웰 플레이트에 넣습니다. 아가로스는 비특이적 박테리아 결합을 최소화합니다.

슬라이드에 혼합 박테리아 배양액을 추가하고 부드럽게 교반하면서 배양합니다.

박테리아는 유리한 폴리머 반점에 결합하는 뚜렷한 접착 단백질을 분비하여 시간이 지남에 따라 박테리아 부착과 집락화가 더 강해집니다.

반대로, 구충제 폴리머는 단백질 흡착에 저항하고 박테리아 부착을 줄입니다.

인산염 완충 식염수 또는 PBS로 슬라이드를 헹구어 느슨하게 결합된 박테리아를 제거합니다.

DAPI를 첨가하여 표면에 부착된 박테리아의 DNA를 염색합니다.

슬라이드를 PBS로 세척하고 건조시킨 다음 접착식 커버슬립으로 밀봉합니다.

외부 슬라이드 표면을 에탄올로 멸균합니다.

명시야 이미지를 캡처하여 폴리머 스팟을 찾습니다. 그런 다음 형광 모드로 전환하여 폴리머 스팟의 형광을 감지합니다.

감소된 형광을 나타내는 폴리머 반점은 박테리아 부착이 최소화되었음을 나타내며 박테리아 퇴치성 폴리머로 식별됩니다.

마이크로어레이용 접종을 배양하고 준비한 후, 텍스트 프로토콜에 따라 UV 멸균된 폴리머 마이크로어레이를 직사각형 4웰 플레이트에 넣고 6밀리리터의 혼합 박테리아 배양물을 추가합니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 5일 동안 부드럽게 교반하면서 배양합니다. 배양 후 PBS를 사용하여 마이크로어레이를 부드럽게 두 번 헹굽니다.

그런 다음 PBS에 DAPI 밀리리터당 1마이크로그램을 첨가하고 30분 동안 배양합니다. 다음으로, 마이크로어레이를 새로운 4웰 플레이트로 옮기고 마이크로어레이를 PBS로 덮은 다음 부드럽게 소용돌이칩니다. 그런 다음 PBS를 한 번 교체하고 세척을 반복합니다.

헹굼 후 공기 흐름 하에 마이크로어레이를 건조시킨 다음 밀봉 필름을 도포하고 유리 커버 슬립을 마이크로어레이 슬라이드에 부착합니다. 접착제가 마르면 70% 에탄올을 사용하여 외부 표면을 살균합니다. 20x 주관이 장착된 형광 현미경을 사용하여 명시야 및 DAPI 채널의 각 폴리머 스폿에 대한 단일 이미지를 캡처합니다.