Name: 인간 배아 줄기 세포 인구에서 Hepatocyte 같은 전지의 강력한 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-26T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: 학습하세요 인간 배아 줄기 세포에서 간세포로 효율적으로 분화시키는 방법을. 약 90%의 효율로 기능성 간세포를 생성하여 약물 독성 예측과 간 기능 연구에 활용할 수 있습니다.

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박사 헤이가 RCUK 원정대에 의해 지원되었다, 박사 서쪽은 외과 부에 의해 지원되었다, 박사 Medine는 BHF 코어 기금에서 부여에 의해 지원되었다 씨, Baltasar Lucendo - Villarin은 MRC 박사 Studenship에 의해 지원되었다. 박사 만주국은 중국 정부의 장학금으로 지원했다.

<ol><li>Asgari, S., Pournasr, B., Salekdeh, G. H., Ghodsizadeh, A., Ott, M., Baharvand, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+a+new+era+for+hepatology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: a new era for hepatology.</a> J. Hepatol. 53, 738-751 (2010).</li>
<li>Hay, D. C., Pernagallo, S., Diaz-Mochon, J. J., Medine, C. N., Greenhough, S., Hannoun, Z., Schrader, J., Black, J. R., Fletcher, J., Dalgetty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+Screening+of+Polymer+Libraries+to+Define+Novel+Substrates+for+Functional+Hepatocytes+with+Inducible+Drug+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Unbiased Screening of Polymer Libraries to Define Novel Substrates for Functional Hepatocytes with Inducible Drug Metabolism.</a> Stem Cell Research. 6, 92-101 (2011).</li>
<li>Payne, C. M., Samuel, K., Pryde, A., King, J., Brownstein, D., Schrader, J., Medine, C. N., Forbes, S. J., Iredale, J. P., Newsome, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Functional+Hepatocyte+Like+Cells+in+Immune+Compromised+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Persistence of Functional Hepatocyte Like Cells in Immune Compromised Mice.</a> Liver International. 31, 254-262 (2011).</li>
<li>Greenhough, S., Medine, C., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+Stem+Cell+Derived+Hepatocyte+Like+Cells+and+their+Potential+in+Toxicity+Screening%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Pluripotent Stem Cell Derived Hepatocyte Like Cells and their Potential in Toxicity Screening.</a> Toxicology. 278, 250-255 (2010).</li>
<li>Medine, C. N., Greenhough, S., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Stem+Cell+Derived+Hepatic+Endoderm+in+Human+Drug+Discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Society+Transactions%22%5BJournal%5D)">The Role of Stem Cell Derived Hepatic Endoderm in Human Drug Discovery.</a> Biochemical Society Transactions. 38, 1033-1036 (2010).</li>
<li>Hannoun, Z., Fletcher, J., Greenhough, S., Medine, C. N., Samuel, K., Sharma, R., Pryde, A., Black, J. R., Ross, J. A., Wilmut, I., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Comparison+between+Conditioned+Media+and+Serum+Free+Media+in+Human+Embryonic+Stem+Cell+Culture+and+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Reprogramming%22%5BJournal%5D)">The Comparison between Conditioned Media and Serum Free Media in Human Embryonic Stem Cell Culture and Differentiation.</a> Cellular Reprogramming. 12, 133-140 (2010).</li>
<li>Dalgetty, D. M., Medine, C., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+Future+Challenges+in+Stem+Cell-Derived+Liver+Technologies%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Progress and Future Challenges in Stem Cell-Derived Liver Technologies.</a> American Journal of Physiology - Gastrointestinal and Liver Physiology. 297, 241-248 (2009).</li>
<li>Hay, D. C., Fletcher, J., Payne, C., Terrace, J. D., Gallagher, R. C. J., Snoeys, J., Black, J., Wojtacha, D., Samuel, K., Hannoun, Z., Pryde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Efficient+Differentiation+of+hESCs+to+Functional+Hepatic+Endoderm+Requires+ActivinA+and+Wnt3a+Signalling%5BTitle%5D)+AND+%22+Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Highly Efficient Differentiation of hESCs to Functional Hepatic Endoderm Requires ActivinA and Wnt3a Signalling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 12301-12306 (2008).</li>
<li>Fletcher, J., Cui, W., Samuels, K., Black, J. R., Currie, I. S., Terrace, J. D., Payne, C., Filippi, C., Newsome, P., Forbes, S. J., Ross, J. A., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Inhibitory+Role+of+Stromal+Cell+Mesenchyme+on+Human+Embryonic+Stem+Cell+Hepatocyte+Differentiation+is+Overcome+by+Wnt3a+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+and+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">The Inhibitory Role of Stromal Cell Mesenchyme on Human Embryonic Stem Cell Hepatocyte Differentiation is Overcome by Wnt3a Treatment.</a> Cloning and Stem Cells. 10, 331-340 (2008).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

우리는 인간의 HLCs의 확장 수준을 생성하는 간단한 균일한 및 체외에서 높은 재현성 모델을 개발했습니다. 우리의 모델은 외부 협력 연구소들에 의해 검증되었습니다. 우리는 일상적으로 발달 마커와 간 특정 기능 assays (대부분의 상업 사용할 수있는)의 집 도구 상자에서 우리를 사용하여 줄기 세포 파생 HLCs을 특징. 우리 과정에서 중요한 단계는 다음과 같습니다 pluripotency 줄기 세포의 유지 보수, 최종 endoderm에 줄기 세포 분화를 직접하는 기능, 간장 endoderm의 균질 문화의 사양과 능력은 체외에서 광범위한 기능을 전시 성숙 간장 endoderm를 파생합니다. HLC 기술을 파생 줄기 세포의 대규모 배포하는 한 제한은 문화의 성숙 간장 endoderm (matrigel에 ~ 4 일)의 단기 차별화된 기능을하고 있습니다. 이러한 이유로 우리는 폴리머를 가려 냈습니다바이오 활성화 및 새로운 세포 지원을위한 라이브러리입니...

Matrigel 코팅 접시 flasks <ol><li> Matrigel (10 ML, BD Biosciences, 영국), -20 ° C.에 저장 </li><li> KO - DMEM (500 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> 조직 문화 플레이트 (물론 6 자 12, 코닝, 영국) </li><li> 조직 문화 플라스크 (통풍 25cm2, 코닝, 영국) </li></ol> hESC 유지 보수 <ol><li> 마우스 배아 fibroblast 에어컨 매체 (MEF - CM) (100 ML, R &amp; D 시스템, 미국), -20에 저장 ° C. </li><li> BSA 용액 (50 ML, 시그마 알드리치, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> 인간 기본적인 fibroblast의 성장 인자 (100 μg, Peprotech, 미국), -20 ° C.에 저장 </li></ol> collagenase와 Passaging hESCs <ol><li> hESCs의 합류 잘 또는 술병. </li><li> 적절하게 Matrigel 코팅 우물 또는 flasks. </li><li> Phospate은 식염수 버퍼링 (- MgCl 2, CaCl - 2) (500 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), 실온에서 보관합니다. </li><li> Collagenase IV (1g, Gibco, Invitrogen, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> 마우스 배아 fibroblast 에어컨 매체 (MEF - CM) (100 ML, R &amp; D 시스템, 미국). </li><li> 인간 기본적인 fibroblast의 성장 인자 (100 μg, Peprotech, 미국). </li></ol> 간장 endoderm로 hESCs의 분화 <ol><li> RPMI 1640 (500 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> B27 보충 (10 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), -20에 저장 ° C. </li><li> Activin (2 μg, Peprotech, 미국), -20에 저장 ° C. </li><li> 재조합 마우스 Wnt3a (2 μg, R &amp; D 시스템, 미국), -20 ° C.에 저장 </li><li> KO - DMEM (500 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> KO - SR (500 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), -20 ° C.에 저장 </li><li> 비 필수 아미노산 (100 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> β - 메르 캅 토 에탄올 (10 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> DMSO (시그마 알드리치, 영국), 실온에서 보관 </li><li> Leibovitz L - 15 배지 (500 ML, Sigm올드 리치, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> Tryptose 인산 국물 (100 ML, 시그마 알드리치, 영국), 4 저장 ° C. </li><li> Foetal 소 혈청, inactivated 열 (500 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), -20 ° C.에 저장 </li><li> 하이드로코티손 21 - hemisuccinate (100 MG, 시그마 알드리치, 영국), -20 ° C.에 저장 </li><li> 인슐린 (췌장 소) (100 MG, 시그마 알드리치, 영국), -20에 저장 ° C. </li><li> L - 글루타민 (100 ML, Gibco, Invitrogen, 영국), -20 ° C.에 저장 </li><li> 아스코르비 산 (25g, 시그마 알드리치, 영국), -20에 저장 ° C. </li><li> 인간 HGF (10 μg, Peprotech, 미국), -20 ° C.에 저장 </li><li> 재조합 인간 Oncostatin M (OSM) (50 μg, R &amp; D 시스템, 미국), -20에 저장 ° C. </li><li> 주사기 필터 유닛에게 0.22 μm의 (Millipore, 영국)을 구동 </li></ol> hESC 파생된 간장 Endoderm의 Characterisation Immunostaining <ol><li> 인산 버퍼 염분 (- MgCl 2, CaCl - 2) (500 ML, Gibco, Invitrogen, 영국); sto상온에서 다시. </li><li> PBST, PBS는 0.1 % 십대 초반 20 (시그마 - 올드 리치, 영국)와했다. </li><li> Paraformaldehyde (PFA) (시그마 - 올드 리치, 영국)가 저장이 -20 ° C., PBS로 구성되어 있습니다 </li><li> 글리세롤 (시그마 - 올드 리치, 영국), 상온에서 저장합니다. </li><li> 트리스베이스 (시그마 - 올드 리치, 영국), 상온에서 저장합니다. </li><li> 에탄올 </li><li> 세럼 (AbD Serotech, 영국), -20 ° C.에 저장 </li><li> 차 항체, 알렉사의 Fluorophores (분자 프로브, Invitrogen, 영국). </li><li> MOWIOL 4-88 (Polysciences Inc의 미국은) 당 제조 업체의 지시로 트리스 HCL과 글리세롤로 구성되어 있습니다. DAPI는 (피어스, 써모 피셔 과학, 영국) 1:1000 희석에 MOWIOL 솔루션에 추가됩니다. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> 차 항체 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 항원 * </td><td> 유형 </td><td> 공급 </td><td> 노동 희석 </td></tr><tr><td> 장백의 </td><td> 단클론 마우스 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> 5분의 100 </td></tr><tr><td> E - Cadherin </td><td> 단클론 마우스 </td><td> Millipore </td><td> 100분의 1 </td></tr><tr><td> α - 페토 프로테인 </td><td> 단클론 마우스 </td><td> 시그마 </td><td> 500분의 1 </td></tr><tr><td> SSEA - 4 FITC </td><td> 단클론 마우스 </td><td> Biolegend </td><td> 100분의 1 </td></tr><tr><td> IgG </td><td> 단클론 마우스 </td><td> DAKO </td><td> 500분의 1 </td></tr><tr><td colspan="2"> 차 항체 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 안티 마우스 FITC 활용 </td><td> 단클론 염소 </td><td> Invitrogen </td><td> 4백분의 1 </td></tr></tbody></table> 표 2. hESC 파생된 간장 endoderm의 immunostaining에 사용되는 항체의 농도가 사용, 그리고 기업 발전 종들은에서 구입한 수 있습니다. 간장 Endoderm 및 Normalisation의 기능 분석 (MG 단백질 당) <ol><li> P4 - 글로 CYP3A4, CYP1A2, 키트 및 luminometer (Promega, 미국). </li><li value="1"> 화이트 플랫 하단에 96 잘 분석 플레이트 (BD Biosciences, 영국). </li><li> BCA 분석 키트 (피어스, 써모 피셔 과학, 영국). </li><li> 투명 96 잘 분석 플레이트 (이와키, 영국) </li></ol>

인간 배아 줄기 세포 인구에서 hepatocyte 같은 전지의 강력한 생성

Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations

모델링 인간의 약물 독성의 진전에도 불구하고, 많은 화합물 unpredicted 부작용으로 인해 임상 실험 중에 실패합니다. 임상 연구의 비용은 실질적으로 있으며, 따라서 더 예측 독성학 화면은 개발 및 약물 개발 (Greenhough 외 2010) 초기에 배치되는 중요합니다. 인간 hepatocytes 약물 독성 평가에 대한 현재 황금 표준 모델을 대표하지만, 변수 함수를 전시 제한된 리소스입니다. 따라서, 불후의 세포 라인과 동물 조직 모델의 사용은 정기적으로 자신의 풍부한로 인해 고용하고 있습니다. 두 소스가 유익한 있지만, 그들은 가난한 기능, 종의 다양성 및 / 또는 문화에 불안정 (Dalgetty 외 2009)에 의해 제한됩니다. Pluripotent 줄기 세포 (PSCs)은 세포와 같은 인간 hepatocyte의 매력적인 대안 소스 (HLCs) (Medine 외 2010)입니다. PSCs 자기 갱신과 성인에있는 모든 체세포 유형 분화 수 있으며, 따라서 대표차별화된 세포의 가능성이 무진장 소스. 우리는 자동화 및 산출 기능 인간 HLCs (; 플레쳐 외 2008; Hannoun 외 2010; 페인 외 2011 헤이 헤이 외 2011 외 2008) 의무, 고효율, 간단하게 절차를 개발하였습니다. 우리는 우리의 기술은 약물 발견, 질병 모델링, 엑스트라 물질 장치의 건설과 가능성을 기반으로 세포 이식 요법에 대한 HLCs의 확장 생산으로 이어질 것이라 생각합니다.

이 문서는 인간의 배아 줄기 세포 집단에서 인간 간장 endoderm의 생성에 초점을 맞출 것이다.

인간 배아 줄기 세포 인구에서 Hepatocyte 같은 전지의 강력한 생성

Despite progress in modelling human drug toxicity, many compounds fail during clinical trials due to unpredicted side effects. The cost of clinical ...

다음 실험의 전반적인 목표는 체외에서 인간 간 생물학을 연구하기 위해 균일한 수준의 인간 간세포를 생산하는 것입니다. 이는 인간 배아 줄기 세포 또는 인간 배아줄기세포를 최종 배배엽으로 유도함으로써 시작되며, A와 WIN A.As T에서 활성화되는 생리학적 자극을 사용하여 두 번째 단계인 최종 배배엽은 두 번째 단계에서 매우 효율적으로 간 내배엽으로 유도됩니다. 다음으로, 인간 배아줄기 유래 간 내배엽을 체외에서 성숙시켜 기능성 인간 간세포를 생성합니다.PCR 웨스턴 블로팅(Western blotting), 면역형광, 엘리자(Eliza's) 및 약물 대사(drug metabolism)의 결과는 이 방법이 약 90%의 효율로 인간 배아줄기세포에서 간세포를 유도한다는 것을 나타냅니다.이 기술을 사용하면 이론적으로 상당한 수준의 인간 간 기능을 나타내는 1차 인간 간세포의 무진장 공급을 생성할 수 있습니다. 미래에는 약물 독성을 정확하게 예측하고 인간의 간을 지원하는 데 도움이 될 것입니다. 비결은 태양의 분화와 인간 세포의 핵 밀도를 높이는 것입니다.이 방법의 시각적 시연은 코어 세포 밀도가 균질한 세포 집단을 생성하는 데 필수적이기 때문에 매우 중요합니다. 우리는 이 기술을 성공적으로 수행할 수 있도록 전 세계 4개 현장에서 15명 이상의 개인을 교육했습니다. 인간 배아 줄기세포 배양으로 시작하여 염기성 FGF가 보충된 마우스 배아 섬유아세포 조건화된 배지 ORM cm이 있는 마트리겔 코팅된 플레이트에서 증식합니다.간 분화 이전에 유지된 인간 배아줄기세포를 주의 깊게 특성화하는 것이 중요합니다. 예를 들어, 이러한 세포는 인간의 배아줄기세포 형태를 나타냅니다. 또한 만능 줄기 세포 마커인 OCT 4 및 nano를 positive control H seven human ESC line과 유사한 수준으로 발현합니다.또한, 인간 ESC는 SS EEA 4에 양성입니다. 인간 E ESC가 30-60% co-fluency에 도달하면 ME CM을 새로 준비된 분화 배지로 교체합니다. 간 분화를 시작하려면 3일 동안 24시간마다 배지를 교체해야 합니다.3일 후, 세포는 내배엽 표현형으로 분화하기 시작하면서 삼각형 모양을 띠게 됩니다. 매체를 SR DMSO 구분으로 전환합니다. 4-5일 동안 배지 배양.48시간마다 매체를 교체합니다. 이 5일의 기간이 지나면 세포는 간 세포의 특징인 다각형 모양을 취하기 시작합니다. 인간 배아줄기세포세포와 간내배엽의 분화는 9일째까지 일련의 심오한 형태학적 변화에 반영됩니다.더욱이, 9일 동안 옥타 포의 발현은 점차 감소한다. 대조적으로, FP와 알부민의 간 전사체는 7일째부터 증가합니다. 세포를 성숙시키고 48시간마다 새로운 배지로 9일 동안 최종 배지에서 간 표현형을 유지하여 계속합니다.마지막으로, 위상차 현미경으로 배양된 세포를 모니터링하여 뾰족한 삼각형 모양에서 다각형 모양을 나타내는 특징적인 간 형태로의 점진적인 형태학적 변화를 확인하여 간 내배엽 기능 분석을 정량적으로 평가합니다. 사이토크롬 P four 50 효소 활성, 특히 SIP 3 A 4 또는 SIP 1 A 2의 경우. 첫 번째 배양 17일째.인간 ESC 유래 간 내배엽 세포는 특정 기질이 삼중 반응을 수행합니다. 조직 배양 배지를 음성 대조군 배양물로 사용하여 섭씨 37도에서 5시간 동안 배양하는 것을 잊지 마십시오. 상층액을 수집하고 제조업체의 지침에 자세히 설명된 대로 기초 효소 활성의 상대적 수준을 측정합니다.이제 각 샘플에 대해 A-B-C-A-S에 의해 결정된 단백질 밀리그램당 효소 활성을 계산합니다. 이 간 내배엽의 체외 성숙 방법에 의해 파생된 일반적인 배양물의 면역 염색. 3개의 인간 간 마커, 알부민, FP 및 ein의 균일한 발현을 입증합니다.이 비디오를 시청한 후에는 인간 및 학습 줄기 세포를 간세포와 효율적으로 구별하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 일단 숙달되면, 이 기술은 100만 개의 세포당 약 2분 30초의 약정으로 매일 수행할 수 있습니다. 분화 과정에서 매일 형태학적 변화를 확인하는 것은 매우 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 문서는 장기적 폴리머 코팅 된 표면을 개발에 초점을 맞출 것이다, 줄기 세포의 안정적인 문화는 인간의 간세포를 산출했다.

최적화 된 합성 표면을 간세포 표현형 사용 안정화

여기에 제시된 방법은 다 능성 줄기 세포로부터 인간 간세포 - 유사 세포를 생성하기 위해 확장 및 우수 제조 기준 (GMP) 레디 분화 시스템을 설명한다. 이것은 기초 및 응용 연구 인간 간 인간 간세포 - 유사 세포를 생성하기위한 비용 효과적이고 표준화 된 시스템으로서 작용한다.

정의 및 간세포와 같은 세포의 확장 성 생성 인간 다 능성 줄기 세포에서

여기에 제시 된 프로토콜 간 질환의 치료에 대 한 작은 분자를 식별 하기 위한 플랫폼을 설명 합니다. 단계별 설명 Ipsc 96 잘 접시에서 hepatocyte 특성을 가진 세포로 분화 하 고 작은 분자에 대 한 잠재적인 치료 활동 화면 셀을 사용 하는 방법을 자세히 제시 합니다.

약물 발견에 대 한 만능 줄기 세포 유래 Hepatocyte 같은 세포를 유도 하는 인간을 사용 하 여

이 프로토콜에는 hepatocyte 같은 셀 96 잘 접시 형태로 인간의 pluripotent 줄기 세포에서 생산 하는 반자동된 접근 방식을 설명 합니다. 이 프로세스는 신속 하 고 비용 효율적인, 품질의 생산 기초 및 응용 연구를 인간의 hepatocyte 같은 셀 배치를 안심 수 있도록 합니다.

만능 줄기 세포에서 세포 처럼 Hepatocyte의 반자동된 생산

이 프로토콜은 18일 만에 인간 만능 줄기 세포(hPSCs)로부터 간세포 유사 세포를 효율적으로 생성하는 단층, 무혈청 방법을 상세히 기술한다. 이것은 hPSCs가 간세포 같이 세포를 형성하기 전에 원시적인 선미, 결정적인 내배엽, 후방 포인및 간 싹 선조와 같은 중간 세포 모형으로 순차적으로 분화하는 것과 같이 6단계를 수반합니다.

인간 다능성 줄기 세포를 간 세포로 효율적으로 분화

이 프로토콜은 정의된 배양 시스템 및 세포 자가 조립을 사용하여 인간 다능성 줄기 세포로부터 간구를 생성하는 접근법을 기술한다. 이 프로토콜은 다수의 세포주에서 재현가능하고 비용 효율적이며 생체 의학 적용을 위한 안정적인 인간 간구의 생산을 허용합니다.

다능성 줄기 세포에서 3차원 인간 간구의 혈청 무료 생산

이 문서의 목표는 만능 줄기 세포로부터 인간 간 선구분화를 유도하는 표준화된 접근법을 제공하는 것입니다. 즉시 사용 가능한 미디어 제형이 있는 이 절차의 개발은 사용자에게 생체 의학 연구 및 번역을 위한 인간 간 세포를 생성하는 촉진 시스템을 제공합니다.

정의된 분화 시스템을 사용하여 만능 줄기 세포에서 간 선조 사양

이 원고는 hESC 분화 시 활성A및 CHIR99021을 최종 엔도덤(DE)으로 분화하여 인간 배아 줄기 세포(hESC)를 기능성 간세포와 같은 세포(HLC)로 분화하기 위한 상세한 프로토콜을 설명합니다.

인간 배아 줄기 세포에서 헤파토세포와 같은 세포 유도를 위한 효율적인 방법

여기에서 우리는 정상 상태 말초 혈액에서 분리된 단핵 세포를 사용하여 인간 자가 간 스페로이드를 생성하는 비유전적 방법을 제시합니다.

간 질환 연구를 위한 말초 혈액의 인간 간 스페로이드

이 프로토콜은 빠르고 재현 가능한 내배엽 간 오가노이드(eHEPO)의 생성을 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하면 eHEPO를 2주 이내에 생산할 수 있으며 차별화와 기능을 잃지 않고 장기(1년 이상)로 확장할 수 있습니다.

기능성 내배엽 간 오가노이드(endodermal hepatic organoids)의 생성

사용 가능한 만능줄기세포(PSC)-기능성 세포 분화 시스템은 현재 심각한 line-to-line 및 batch-to-batch 변동성 문제로 인해 어려움을 겪고 있습니다. 여기에서는 심장 분화를 주요 예로 사용하여 이미지 기반 기계 학습을 기반으로 PSC 분화 과정을 지능적으로 모니터링하고 조절하는 프로토콜을 제시합니다.

만능줄기세포 분화를 모니터링하기 위한 살아있는 세포 이미지 기반 기계 학습 전략

학습하세요 인간 배아 줄기 세포에서 간세포로 효율적으로 분화시키는 방법을. 약 90%의 효율로 기능성 간세포를 생성하여 약물 독성 예측과 간 기능 연구에 활용할 수 있습니다.

인간 배아 줄기 세포 인구에서 Hepatocyte 같은 전지의 강력한 생성

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