레이저 캡처 미세해부를 사용한 단일 세포 샘플링: 이질적인 세포 집단에서 표적 세포를 수확하는 기술

레이저 캡처 미세 해부는 유리 슬라이드에서 준비된 세포 혼합물에서 단일 표적 세포를 조달하는 데 도움이 됩니다. 표면에 UV 투과성 생화학적으로 불활성 멤브레인으로 코팅된 적절한 유리 슬라이드를 가져가는 것부터 시작하십시오. 슬라이드를 UV 광선에 노출시켜 더 나은 세포 접착을 위해 더 친수성을 만듭니다.

슬라이드를 세포원심분리기 장치에 조립합니다. 장치의 깔때기 포트에 세포 현탁액을 추가합니다. 원심력이 집중되어 유리 슬라이드의 작은 영역에 세포의 단층을 증착할 수 있도록 하는 세포 원심분리기. 슬라이드를 자연 건조시키십시오.

슬라이드를 놓습니다.amp이 위로 향하게 하여 레이저 미세해부 현미경 아래에 놓습니다. 관심 셀을 둘러싼 영역을 정의합니다. 이제 레이저 빔의 초점을 맞춰 멤브레인 코팅과 함께 표적 세포 함유 영역을 해부합니다. 그런 다음 레이저 빔의 초점을 해제하고 펄스를 주어 압력을 생성합니다. 이 에너지는 미세 해부 영역을 슬라이드 위에 배치된 완충액이 포함된 사전 조립된 수집 튜브의 거꾸로 된 캡으로 투석시킵니다.

튜브를 꺼내 캡을 닫습니다. 튜브를 돌려 단일 표적 세포가 포함된 완충액을 튜브 바닥으로 가져옵니다. 추가 분석이 있을 때까지 튜브를 냉장 보관하십시오.

레이저 mircodissection의 경우, 전체 300마이크로리터의 세포 현탁액을 300 x g의 멤브레인 코팅 슬라이드에 5분 동안 세포원심분리합니다. 그런 다음 멤브레인 코팅된 슬라이드를 레이저 유사체 해부가 가능한 현미경에 놓습니다. 다음으로, 4.5마이크로리터의 세포 용해 마스터 믹스를 0.2밀리리터 PCR 튜브의 캡에 피펫팅합니다.

샘플 위에 캡을 놓고 레이저 미세 해부로 단일 세포를 수확합니다. 그 직후 PCR 캡에 분리된 세포가 있는지 확인합니다. 레이저 이상 해부 현미경에서 PCR 튜브를 제거하고 튜브를 닫습니다. 짧은 회전으로 튜브 바닥의 모든 액체를 모으십시오.