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소화 가능한 탄수화물은 식물 조직의 비구조적 구성 요소이며 식물 성장과 신진대사를 위한 예비 에너지원 역할을 합니다.
비구조적 탄수화물을 정량화하려면 튜브에 측정된 양의 식물 조직을 섭취하십시오. 튜브에 희석된 황산을 넣고 샘플을 가열합니다. 가열 시 황산은 소화 가능한 탄수화물의 다당류를 각각의 단당류 서브유닛으로 가수분해합니다.
샘플을 식힙니다. 튜브를 원심분리하여 소화되지 않은 식물 물질을 펠릿화하고 단당류를 포함하는 상청액을 얻습니다.
상청액을 신선한 튜브로 흡인하고 단당류를 페놀 용액으로 처리한 다음 황산을 첨가합니다. 튜브를 소용돌이쳐 내용물을 혼합하고 배양합니다.
배양하는 동안 황산은 단당류를 탈수하여 푸르푸랄 유도체를 생성합니다. 이러한 푸르푸랄 유도체는 페놀과 반응하여 황금 용액을 생성합니다.
식물 샘플의 탄수화물 함량에 해당하는 490나노미터에서 황금 용액의 흡광도를 분광학적으로 결정합니다.
다음으로, 다양한 농도의 포도당 용액을 취하고 페놀-황산 처리를 반복하여 다양한 색상 강도를 산출하고 표준 곡선을 그립니다. 미지의 탄수화물 샘플의 흡광도 값을 포도당 표준과 비교하여 식물 조직에서 소화 가능한 탄수화물의 함량을 얻습니다.
먼저, 각 조직 샘플의 복제본을 유리 15밀리리터 튜브에 담습니다. 튜브에 라벨을 붙이고 각 샘플의 정확한 질량을 기록합니다.
그런 다음 각 튜브에 1밀리리터의 0.1몰 황산을 넣고 캡을 단단히 닫습니다. 그런 다음 튜브를 끓는 수조에 1시간 동안 넣습니다.
튜브를 미지근한 수조로 옮겨 식힙니다. 그런 다음 튜브의 내용물을 라벨이 붙은 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브에 붓습니다. 그런 다음 튜브를 15,000g에서 10분 동안 원심분리 합니다. 마이크로피펫을 사용하여 상청액을 표지된 새 1.5밀리리터 튜브로 옮깁니다.
피펫을 사용하여 알려지지 않은 각 샘플 15마이크로리터를 자체 시험관으로 옮깁니다. 그런 다음 각 튜브에 385마이크로리터의 증류수를 추가합니다.
흄 후드에서 각 표준 및 알려지지 않은 샘플 시험관에 400 마이크로리터의 5% 페놀을 추가합니다. 그 직후 각 튜브에 황산 2밀리리터를 첨가합니다.
용액 표면에 황산을 첨가해야 합니다.
튜브를 10분 동안 배양한 후 튜브를 소용돌이치게 합니다. 그런 다음 튜브를 추가로 30분 동안 배양합니다.
각 샘플 튜브에서 800마이크로리터를 3개의 폴리스티렌 1.5밀리리터 세미마이크로 큐벳으로 옮깁니다. 그런 다음 분광 광도계를 490나노미터로 읽도록 설정하고 빈 큐벳으로 보정합니다.
마지막으로 분광 광도계를 통해 각 큐벳을 실행하고 흡광도를 기록합니다.
