신속한 Colorimetric Assays는 질적 Biomolecular 샘플에서 RNA와 DNA를 구별 할

다음 실험의 전반적인 목적은 잠재적으로 이질적인 생체 분자 샘플에 핵산 및/또는 환원당이 포함되어 있는지 확인하는 것입니다. 그리고 만약 그렇다면, 당 부분의 상이한 반응성에 기초하여 RNA와 DNA를 구별하라. 이는 먼저 Benedict 분석을 적용하여 생체 분자 혼합물에 유리 환원당이 포함되어 있는지 확인함으로써 달성됩니다.

두 번째 단계 파일로, arsen 또는 assay가 사용되며, 이는 설탕 성분에 펜토 링이 포함되어 있는지 여부를 확인합니다. 다음 요리 : Diphenyl amine 시약은 펜토 설탕이 DNA에서와 같이 deoxyribose인지 또는 RNA에서와 같이 그렇지 않은지 여부를 결정하는 데 사용됩니다. 결과는 샘플에서 당 기반 성분의 차등 반응성에 의해 형성된 쉽게 구별되는 색상 제품을 기반으로 하는 바이오 고분자의 유형을 보여주며, 이는 분광 광도 측정을 사용하여 표준 곡선에 대해 분석할 수 있습니다.

형광 염료, 피코 그린 또는 사이버 골드를 이용한 전기영동과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 가장 큰 장점은 크기, 충전량 또는 당 성분에 따른 제한이 없고 당 환원을 위한 시간 및 비용 측면에서 효율적이라는 점이다. 무수 940 밀리몰, 탄산나트륨 588 밀리몰, 구연산나트륨 이수화물 및 68 밀리몰 구리로 구성된 6 x Benedict's 시약을 적절한 부피로 준비합니다. 2 개의 황산염 펜타 수화물.

분석할 각 샘플에 대해 100마이크로리터의 six x Benedict 시약을 1.5ml 마이크로 원심분리 튜브에 추가합니다. 각 튜브에 10-500 마이크로 리터의 샘플을 추가하고 이중 증류수를 추가하여 최종 부피를 600 마이크로 리터 와류 또는 피펫으로 가져옵니다. 용액을 혼합합니다.

20 분 동안 끓는 물 목욕에 있는 표본을 배양하고, 그 후에 약 10, 000 분당 회전수에 5 분 동안 원심 주입하기 전에 10 분 동안 냉각시키십시오. 미립자 물질을 침전하려면 475 나노 미터의 물로 UV 대 분광 광도계를 블랭킹 한 후 supinate를 깨끗한 vete로 옮깁니다.

펜토 당을 분석하기 위해 샘플의 흡수도를 측정합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 24.2 밀리몰, 6몰 염화수소 및 0.025 중량당 중량 염화철 육수화물로 신선한 2 x BAL 시약을 준비합니다. 각 샘플에 대해 500마이크로리터의 담즙 시약을 마이크로 원심분리 튜브에 추가합니다.

각 튜브에 10-500마이크로리터의 샘플을 추가하고 이중 증류수를 추가하여 최종 부피를 1밀리리터로 만듭니다. 혼합. 샘플을 20분 동안 끓인 다음 샘플을 회전시켜 미립자 물질을 침전시킨 후 10분 동안 실온으로 냉각하고 물을 블랭크로 사용하여 660나노미터에서 흡광도를 측정합니다.

60 밀리 몰 디 페닐 아민, 7 몰 빙초산, 179 밀리 몰 황산 및 부피 당 62 % 부피로 구성된 두 개의 x 접시 디 페닐 아민 시약을 준비합니다. 에탄올. 각 반응에 대해 500마이크로리터의 시약, 샘플 및 이중 증류수를 결합하여 총 부피를 1ml로 만듭니다. 샘플을 20분 동안 끓인 후 실온을 식힌 후 회전시켜 600나노미터에서 흡광도를 측정합니다.

여기에 표시된 Benedicts Biles 무기고 및 접시에 대한 그녀의 대표적인 정성적 데이터, 알려진 참조 화합물에 대한 diphenyl amine 분석. 왼쪽 패널에는 positive 및 negative control이 모두 표시되고, 오른쪽 패널에는 assay의 가시적 검출 범위가 표시됩니다. 이 패널은 다양한 이질성의 샘플에 대한 접시의 반응을 보여줌으로써 분석의 견고성을 보여줍니다.

예를 들어, RNA가 있는 DNA 또는 단백질이 있는 DNA가 있습니다. Dish 분석의 긍정적인 결과는 오염된 RNA 또는 단백질이 있는 경우에도 샘플을 포함하는 DNA에 대해 보존됩니다. 이전 샘플의 희석 범위는 각 반응에 고유한 시각적 검출 한계가 있기 때문에 다양합니다.

분석되는 설탕의 종류에 따라 육안 검출이 아닌 스펙트럼 측광을 사용하여 이 표준 곡선에 표시된 대로 측정 범위를 개선할 수 있습니다. 베네딕트 분석법의 경우, 이 기법을 완전히 익히면 제대로 수행한다면 30분 이내에 완료할 수 있습니다.