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면역학
0 조회수 • 6:51 분 • July 8th, 2025
병원체 노출 후 대식세포는 활성화되어 전염증성 및 항염증성 사이토카인을 방출하여 면역 체계 반응을 조정합니다.
시험관 내에서 골수 유래 대식세포 활성화를 연구하기 위해, 분리된 마우스 골수 세포 현탁액을 배양 플라스크로 옮긴다. 잠시 인큐베이팅합니다.
중간엽 세포, 단핵구 및 성숙한 대식세포는 플라스크 표면에 부착되는 반면 조혈 전구세포는 현탁액으로 남아 있습니다.
조혈 전구 세포를 포함하는 배지를 수집하고 원심분리합니다. 대식세포 콜로니 자극 인자, M-CSF, 배지에 재현탁된 세포를 배양 플라스크로 옮깁니다.
M-CSF는 골수 전구 하위 집단을 대식세포로 분화시키며, 대식세포는 분지되어 플라스크에 부착됩니다.
비부착성 세포 함유 배지를 버립니다. M-CSF 배지를 추가하고 배양합니다. 대식세포가 완전한 기능 상태에 도달하면 수확합니다. 원심 분리기.
M-CSF 배지에 재현탁된 플레이트 대식세포를 멀티웰 플레이트 웰에 재현탁합니다. 대식세포가 웰에 부착된 후 인간 다클론 면역글로불린과 독소인 박테리아 지질다당류(LPS)를 추가합니다.
면역글로불린은 특정 FCγ 수용체에 결합하는 반면 LPS는 대식세포의 Toll 유사 수용체에 결합합니다. 이 공동 자극은 다운스트림 신호 전달 캐스케이드를 통해 항염증 대식세포 활성화를 유도하여 높은 수준의 항염증성 사이토카인과 낮은 수준의 전염증성 사이토카인의 방출을 유발합니다.
대식세포 활성화를 확인하기 위한 추가 분석을 위해 사이토카인 함유 배지를 수집합니다.
안락사된 쥐를 팔다리를 쭉 뻗은 채 폼 보드 위에 누운 자세로 고정한 다음 70% 에탄올로 다리를 청소합니다. 다음으로 약 2mm 깊이의 얕은 절단을 하여 각 뒷다리 표면의 피부와 털을 제거합니다. 그런 다음 조직을 해부하여 경골과 대퇴골에 접근합니다.
경골과 대퇴골을 제거하려면 고관절 바로 아래와 발목 위의 뼈와 근육을 자릅니다. 그런 다음 뼈에서 가능한 한 많은 근육 조직을 제거하십시오. 그런 다음 뼈를 70% 에탄올로 세척하고 1분 동안 증발시킨 다음 뼈 플러시 배지로 채워진 6웰 플레이트에 뼈를 넣습니다.
플레이트에서 대퇴골의 양쪽 끝에서 1mm를 다듬어 내부 구멍이 노출되도록 합니다. 26게이지 바늘이 충치에 접근할 수 있는지 확인하십시오. 다음으로 경골과 대퇴골을 무릎 관절에서 분리합니다. 그런 다음 10밀리리터 주사기에 부착된 바늘을 골강에 삽입하고 골수를 채취합니다.
4개의 뼈 모두에서 골수를 50밀리리
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