지원되는 평면 지질 이중층과의 T 세포 상호 작용을 연구하기 위한 In Vitro 기술

지원되는 지질 이중층 또는 SLB가 포함된 흐름 슬라이드를 가져갑니다.

SLB는 형광단으로 표지된 특정 리간드(세포간 접착 분자 1 또는 ICAM-1 및 항-CD3 항체)에 접합됩니다.

T 세포와 형광단 태그가 부착된 항-CD107a Fab(탈과립 마커에 대한 항체의 항원 결합 단편)을 추가합니다.

T 세포 수용체-CD3 또는 TCR-CD3 복합체는 항-CD3 항체에 결합하여 TCR을 유발합니다.

트리거링 유도 인사이드 아웃 신호는 고정된 ICAM-1에 결합하는 표면의 인테그린을 활성화합니다.

접합은 세포골격 재구성(미세소관 재배열 및 SLB 표면에서 세포의 측면 확산을 유도하는 액틴 중합)을 유도합니다.

확산은 더 많은 리간드-수용체 상호 작용을 통해 초분자 활성화 클러스터 또는 SMAC를 형성하여 면역 시냅스를 생성합니다.

T 세포 용해 과립은 미세소관을 따라 이동하고 원형질막과 융합하여 항-CD107a Fab에 결합하는 세포 표면의 탈과립 마커를 노출시킵니다.

형광 현미경을 사용하여 TCR-CD3 복합체, 인테그린 및 탈과립 마커가 풍부한 면역 시냅스를 시각화합니다.

먼저 폴리프로필렌 가위형 집게를 사용하여 유리 커버슬립을 갓 준비한 산성 피라냐 용액에 25-30분 동안 담그십시오. 세탁이 끝나면 세탁할 때마다 신선한 양의 초순수로 커버슬립을 7번 헹구고 젖은 커버슬립을 따로 보관하여 깨끗한 유리에서 남은 물이 굴러떨

어지도록 합니다.

커버슬립이 건조되면 멸균 흐름 후드 내의 자체 접착식 슬라이드 채널 중앙에 최종 리포솜 혼합물 2마이크로리터를 정확하게 분취하고, 즉시, 그러나 조심스럽게 깨끗하고 건조한 커버슬립 하나를 슬라이드에 정렬하여 커버슬립이 슬라이드의 끈적끈적한 쪽으로 부드럽게 내려갈 수 있도록 하고, 폴리프로필렌 가위형 집게의 외부 링을 사용하여 주변 접촉부에 부드러운 압력을 가합니다. 슬라이드와 함께 커버슬립을 덮고 누출을 방지하기 위해 슬립이 슬라이드에 단단히 부착되어 있는지 확인합니다. 그런 다음 슬라이드를 뒤집고 유성 마커를 사용하여 슬라이드 어셈블리 외부의 이중층 주위에 4개의 점을 그립니다.

첫 번째 주입 전에 채널의 한 포트를 진입 포트로, 다른 포트를 출구 포트로 지정하여 실험 내내 이 지정을 유지합니다. 기포 형성을 방지하려면 슬라이드 채널의 고무 씰이 팁에 관통되는 느낌이 들 때까지 피펫 팁의 끝을 입구 포트에 직접 삽입하십시오.

천천히 채널을 50마이크로리터의 따뜻한 분석 완충