동종면역 유도 혈관 거부 반응을 연구하기 위한 마우스 대동맥 삽입 모델

마취된 기증자 마우스를 준비하고 바로 누운 자세로 놓습니다. 정중선 절개를 하여 복강을 노출시킵니다.

장을 외부화하여 신장 동맥 아래에 신장하 복부 대동맥 또는 IAA를 위치시켜 산소가 공급된 혈액을 운반합니다.

산소가 제거된 혈액을 운반하는 인접한 하대정맥에서 IAA를 분리합니다.

IAA 근처의 작은 가지를 결찰하고 고정amp IAA를 혈류를 방해합니다.

적절한 길이의 부분을 절제하여 식염수에 넣습니다.

다른 유전적 배경을 가진 수혜자 마우스로 절차를 반복합니다.

해부학적 방향과 일치하도록 기증자 IAA를 수혜자 내에 이식합니다.

기증자 이식편 끝을 수혜자 말단에 봉합하여 종단 간 문합을 수행합니다.

클램프를 풀고 누출 없이 정상적인 혈류를 확인하십시오. 장을 복강으로 되돌립니다. 다음으로 절개 부위를 봉합합니다.

이 모델은 이식된 IAA 이식편에 대한 면역 반응을 연구할 준비가 되었습니다.

수술 현미경 아래 멸균 드레이프로 싸인 깨끗하고 얇은 플렉시글라스 보드에 기증자 마우스를 8-30배 배율로 누운 자세로 놓는 것으로 시작합니다.

발가락 꼬집기로 적절한 외과적 마취를 확인한 후 멸균 가위를 사용하여 치골에서 검상돌기까지 정중선을 단일 절개합니다. 다음으로, 작은 견인기를 사용하여 복벽을 열어 복강을 노출시킵니다. 그런 다음 끝이 있는 멸균 면이 있는 어플리케이터를 사용하여 내장을 동물의 왼쪽 위쪽으로 부드럽게 집어넣습니다. 식염수에 적신 거즈로 조직을 덮고 생식 기관을 아래쪽으로 움직여 신장하 대동맥과 하대정맥 또는 IVC를 찾습니다.

이제 의료용 번호 5 겸자를 사용하여 분기점 근처의 왼쪽 신장 동맥에서 IVC에서 대동맥을 분리합니다. 그런 다음 10-0 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 대동맥 근처의 작은 가지를 결찰합니다. 기증자 대동맥과 IVC가 분리되면 식염수로 혈관을 포화시킵니다. 노출된 구멍을 적신 거즈로 덮고 기증자를 멸균 구역에 따로 보관합니다.

이제 수혜자 마우스를 현미경 아래에 놓고 방금 시연한 대로 수혜자 대동맥을 IVC에서 분리합니다. 그런 다음 두 개의 4mm 미세혈관 클램프를 관심 부분의 근위부 및 원위부에 약 5mm 간격으로 배치합니다. 다음으로, Vannas-Tübingen 현미 가위를 사용하여 단일 수평 대동맥 절개술을 하고 기증자 대동맥 이식편을 수용하기 위해 복부 대동맥의 0.5mm 이하를 절제합니다.

기증자를 현미경으로 되돌리고 방금 시연한 대로 3-4mm 이식편 세그먼트를 횡단합니다. 그러면. 25게이지 5/8 바늘을 사용하여 절제된 대동맥을 헤파린 식염수로 세척하고 바늘 끝이 혈관에 닿지 않도록 주의하고 얼음 위에 헤파린 처리 식염수가 담긴 용기에 혈관을 넣습니다.

절제 후 30분 이내에 기증자 대동맥 이식편을 수혜자의 동소 위치에 배치하여 각 이식편의 해부학적 방향을 수혜자의 해부학적 방향과 일치시킵니다. 그런 다음 혈관의 외막을 부드럽게 잡고 5번 집게를 사용하여 약간 거꾸로 합니다. 이제 겸자를 사용하여 10-0 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사에 부착된 바늘을 혈관벽의 전체 두께를 통해 구동하여 기증자 대동맥 이식편을 수혜자의 절제된 혈관에 고정합니다.

연속 스티치를 배치하려면 이식편의 상단과 하단 모두에 9시 방향에 스테이 봉합사를 배치합니다. 그런 다음 3시 방향부터 이식편의 상단에서 시작하여 절제된 끝을 두 개의 고정 봉합사로 문합하고 봉합사를 스테이 봉합사에 고정합니다. 그런 다음 이식편을 뒤집고 혈관의 등쪽 부분까지 봉합사를 계속하여 원점 스테이 봉합사를 만납니다. 혈관에 큰 압력을 가하지 않고 봉합사를 고정하고 하부 문합에 대해 봉합을 반복합니다.

문합이 완료되면 원위 미세혈관 클램프를 풀어 혈관을 통한 역행성 혈류를 허용합니다. 출혈이 관찰되지 않으면 근위 클램프를 풉니다. 혈액 폐색이 관찰되지 않으면 한 쌍의 집게를 사용하여 스테이 봉합사의 한쪽 끝을 부드럽게 잡고 혈관을 약간 피하여 혈관의 뒷벽을 검사합니다. 주름이 관찰되어서는 안 됩니다. 기증자와 수혜자 혈관 모두에서 격렬한 맥박 패턴이 관찰되면 면으로 끝이 있는 어플리케이터를 사용하여 장을 복강으로 되돌립니다.

마지막으로 바늘 홀더와 Graefe 집게를 사용하여 5-0 폴리프로필렌 봉합사와 연속 봉합으로 복벽을 닫습니다. 피하 봉합을 사용하여 동일한 봉합사로 피부층을 닫습니다. 뒷다리의 운동 기능을 관찰하여 수술의 성공 여부를 평가할 수 있습니다.