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마운팅 배지에 후기 16기 초파리 배아가 들어 있는 튜브로 시작합니다.
초파리의 운동 뉴런은 면역 표지되어 있습니다.
배아를 유리 슬라이드로 옮기고 마운팅 매체에서 제거합니다.
그런 다음 배아 복부 면을 위로 향하게 하여 해부합니다.
운동 뉴런이 포함된 앞쪽 부분의 방향을 등쪽이 위로 향하도록 합니다.
텅스텐 바늘을 사용하여 등쪽 정중선을 따라 자르고 체벽을 펼칩니다. 배아를 마운팅 매체로 옮깁니다. 그런 다음 내부 장기를 제거하여 라벨이 붙은 뉴런을 노출시킵니다
.
배아를 새 슬라이드로 옮긴 다음 장착하고 밀봉합니다.
빛이 배아를 통과하는 것을 미분 간섭 대비 현미경으로 관찰하여 고해상도 이미지를 생성합니다.
축삭 투영 패턴이 있는 레이블이 지정된 뉴런은 밝은 배경에 짙은 갈색으로 나타납니다.
운동 뉴런은 분절간 신경과 분절 신경, 근육을 자극하는 작은 분지인 횡신경의 두 가지 주요 신경으로 분기됩니다.
배아를 필렛하려면 유리 슬라이드에 스테이
지하십시오.먼저 글리세롤 복부 쪽이 위로 향하도록 한 방울로 옮깁니다. 다음으로 해부 현미경으로 몸 길이의 1/4에서 앞쪽 부분을 잘라냅니다. 그리고 운동 축삭이 없는 가장 뒤쪽 영역을 제거합니다.
이제 바늘 프로브를 사용하여 제제를 글리세롤 밖으로 옮기고 등쪽이 위로 향하도록 하고 시야에 수평으로 배치합니다. 다음 단계에서는 바늘 프로브의 속이 빈 부분에 삽입된 다음 끝을 구부린 미세한 텅스텐 바늘이 필요합니다. 텅스텐 바늘을 사용하여 배아의 뒤쪽 끝을 작은 자르고 등쪽 정중선을 계속 자릅니다.
바늘이 유리에 쉽게 구부러지기 때문에 해부 중에 텅스텐 바늘의 끝이 유리 슬라이드 표면에 닿지 않도록 하십시오.
그런 다음 프로브를 사용하여 제제를 글리세롤 방울로 되돌리고 등쪽이 위로 향하도록 배치합니다. 거기에서 각 체벽을 복부 측면 방향으로 펼쳐 체벽에서 내장을 분리합니다. 두 개의 몸벽이 분리되어야 합니다. 이제 프로브를 사용하여 체벽 플랩을 유리 슬라이드 위로 조심스럽게 이동합니다. 슬라이드에서 텅스텐 바늘을 사용하여 내부 장기를 옆으로 밀어 제거합니다.
텅스텐 바늘을 안정화하고 손상되지 않도록 하려면 텅스텐 바늘을 조작하는 동안 텅스텐 바늘을 유리 슬라이드 표면에 고정하는 속이 빈 바늘 프로브
를 고정하십시오.이제 준비물과 8마이크로리터의 마운팅 용액을 새 유리 슬라이드에 장착합니다. 커버슬립을 부착하고 일반 매니큐어로 가장자리를 밀봉합니다. 그런 다음 DIC 광학을 사용하여 고해상도로 이미지를 캡처합니다.
