Name: 에 셀 운명을 따라 E. 대장균 파지 람다에 의해 감염 후 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: 학습하세요 형광 현미경을 이용하여 E. coli의 파지 람다 감염 후 세포 운명을 실시간으로 관찰하는 방법을. 이 기술은 미생물학 및 바이러스학 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

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우리는 마이클 Feiss과 파지 생성 및 정화에 안내를위한 장 Sippy에 감사하고 있습니다. 우리는 세포 인식 소프트웨어, Schnitzcell를 제공하기 위해 마이클 Elowitz 감사드립니다. , 웰치 재단 (기금 Q-1759)과 인간 프론티어 과학 : 골딩 연구실에서 작품은 국립 보건원 (R01GM082837), 국립 과학 재단 (살아있는 세포의 물리 센터 082,265, PFC)의 보조금에 의해 지원됩니다 프로그램 (RGY 2,008분의 70).

<ol><li>Oppenheim, A. B., Kobiler, O., Stavans, J., Court, D. L., Adhya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Switches+in+bacteriophage+lambda+development%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Switches in bacteriophage lambda development.</a> Annu. Rev. Genet. 39, 409-429 (2005).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

박테리아 변종, 파지 및 Plasmids : 스트레인 LE392은 supF입니다. 그것은 (자세한 내용은 표 1 참조) 파지의 게놈에 Sam7 돌연변이를 억제하기 위해 선정되었습니다. 따라서, 유도 lysogens 결국 lyse과 파지 입자를 공개, lytic 경로를 선택으로 의지 감염된 세포합니다. Lysogenic 세포가 30에서 재배 ° C 파지의 게놈에서 857 allele CI 민감한 온도의 존재로 인해. 열 유도 후, gpD - EYFP과 야생 유형 gpD는 λ LZ1의 게놈과 플라스미드 pPlate * D 각각에서 공동으로 표현됩니다. 그 결과, 새로 만든 파지 λ LZ2의 capsid는 gpD - EYFP 및 gpD 단백질의 혼합물이 포함되어 있습니다. 이 모자이크 파지는 개별 phages 5 감지를 허용 구조적으로 안정적이고 충분히 형광입니다. PP RE - mCherry는 lysogenic pathwa의 선택을 검색하는 데 사용 플라스미드 기자입니다Y. 발기인 P의 RE는 lysogeny 1,11의 설립시 CII에 의해 활성화됩니다. PP RE - mCherry 5 mCherry 12 GFP를 교체하여 PE-GFP 11에서 파생되었다. 자세한 내용은 이전 작품 5를 참조하십시오. 성장 조건 매개 변수 : lysogen 유도 동안 (제 1), 180 rpm에서의 가벼운 흔들림은 좋은 바이러스 수율이 13을 제공합니다. 포도당 신진 대사로 피해야한다 성장 매체에 포도당의 이용은 산성 신진 대사 제품을 생성하고, 성숙 람다 입자는 산성 pH의 13 살 불안정합니다. MgSO 4의 추가는 파지 capsid 3 안정화 목적으로합니다. 야생 유형 CI를 (대신 CI 857의) 수행 phages를 들어, lysogen은 DNA-손상 에이전트 미토 마이신 C 3을 사용 유도 할 수 있습니다. 단계 1.3에서, 37의 부화는 ° C는 일반적으로 90 분 초과 할 수 없습니다. 이 usef입니다<html> 매 30 분 OD 600까지 셀 밀도를 확인 UL. 좋은 lysate를 들어, OD 600 주변에 0.2 이하로 들어가게되고, 나머지 OD 600 세포 파편의 결과입니다. 새로 만든 파지는 세포 파편에 자신의 DNA를 삽입하기 시작 수 있으므로 너무 오래 잠복기는 낮은 파지 수율 될 수 있습니다. 단계 2.11과 2.13에 보이는 파지 밴드를 (적어도 1 개 10 11 파지 입자)을 획득하려면, 단계 1.2에서 적어도 500 ML 문화를 성장. 단계 5.1 및 5.2의 성장 매체에 0.2 % 말토오스의 추가는 양고기, 파지 람다 흡착 3,14에 대한 수용체의 표현을 유도 목적으로합니다. mCherry - 대신 단계 5.2의 100 배의 1,000 배 희석은 기자 플라스미드 PP의 RE에서 mCherry 배경 수준을 감소 목적으로합니다. 35를 실행 파지의 DNA 주입을위한 단계 5.5 ° C는 온도에 민감한 cI857 allele의 유도를 방지하기 위해 선택됩니다. 파지 정화 : jove_content &quot;&gt; 파지 정화 단계 (2.11 단계 2.1) 기타 정화 프로토콜 5 대체하지만, CsCl 평형 기울기 (단계 2.12 및 2.13)을 통해 최종 ultracentrifugation은 피할 수 있습니다. 스윙 버킷 로터는 단계 2.10과 2.12에 필요합니다 순수한 파지 주식을 취득하는 것은 쉽게 주일까지 소요될 수 있습니다. 날카로운 눈에 보이는 파지 밴드를 보장하기 때문에 확실히 아무 중간 단계에서 잘못하지 못하게 길을 따라 파지의 titer를 확인 할 필요가 있습니다. 파지 처리 : 제 2의 모든 정화 절차 동안, 그것은 파지는 파지 헤드에서 파지의 꼬리를 전단 않도록 부드럽게 lys​​ate 처리하는 것이 중요합니다. 제 5 (예를 들어, 5.7을 통해 5.5 단계)의 세포 감염 동안, 그것은 또한 감염된 세포에서 파지 입자의 전단을 방지하는 것이 중요합니다. 파지는 그 DNA를 주입 한 후 감염된 세포에서 끊어 경우, 결과는 &quot;어둠&quot;의 감염입니다 참고로 즉fection의 결과는 실험에서 관찰하지만 감염 파지는 안 될 것입니다. phages 또는 파지 / 세포 혼합물을 처리 할 때마다 이러한 문제를 최소화하기 위해, 우리는 다양한 피펫 팁을 사용합니다. DAPI 테스트 : DAPI (제 4 항)과 파지 주식을 염색하면 파지 주식의 순도를 확인하기 위해 신속하고 효율적인 방법입니다. 또한 시간이 지남에 따라 기존 파지 주식의 가능한 저하를 테스트하는 데 사용할 수 있습니다. 순수한 주식은 형광 현미경으로 YFP와 DAPI 신호의 공동 지방화 가까운 100 %이어야합니다. 우리는 일반적으로 YFP 명소의 1 % 미만이 입자가 성공적으로 바이러스 DNA를 포장하지 못했음을 나타냅니다하거나 이미 다른 곳에서 자신의 DNA를 주입 한 DAPI을 (바이러스 성 게놈없이 capsids을 대표하는) 포함하지 않는 것이 관찰합니다. DAPI 명소의 1 % 미만이 YFP를 (비 형광 phages에 해당)를 포함하지 않습니다. 이 경우가 아닌 경우, O에서 반복 할 필요가 2.14으로 2.12 단계를다시 정화 rder. 더 장기적으로 라이브 셀 이미징 여기 필요하지 않습니다 때문에 이미지 매개 변수로 돌아가서 단계 4.3 현미경 설정은 섹션 5에서처럼 중요하지 않습니다. 바라던 하나의 파지 입자의 형광 강도를 조정하는 경우 5 항에서와 같은 현미경 설정을 유지하는 데 유용합니다. PBS-아가로 오스 판은 매우 깨끗하고, 또는 DAPI 염색을 사용 너무 많이없는 경우, 파지의 DNA에 해당하는 일부 DAPI 장소는 &quot;후광&quot;로 둘러싸여 될 수 있습니다. 너무 작은 DAPI의 염료를 사용하는 경우, DAPI 채널의 신호는 매우 약한 수 있습니다. 현미경 시스템 : 제 6의 이미지를 들어, 우리는 100x 목표 (계획 Fluo, 수치 공 1.40, 기름 침수 세례) 및 표준 필터 세트 (니콘)와 상업 역 epifluorescence 현미경 (이클립스 TE2000-E, 니콘)을 사용합니다. 형광 광원은 빛 강도 ​​제어 아크 램프입니다. x, y 및 z PO : 다음 기능은 컴퓨터 제어sition, 시야 및 형광 셔터, 그리고 형광 필터 선택하실 수 있습니다. 자동 초점 기능이 필요합니다. 그렇지 않으면, 초점은 쉽게 시간 경과 동영상 (일반적으로 4시간 길이) 동안 멀어지기 수 있습니다. 이 병렬에서 여러 감염 이벤트를 수행 할 수 있습니다 각 시점에서 (X, Y) 여러 위치를 취득 할 수있는 기능은 유용합니다. 우리는 일반적으로 100 감염 이벤트까지 따라 각 영화 8 단계 위치를 취득. 우리가 사용하는 카메라는 16 비트 (Cascade512, Photometrics)의 동적 범위 16x16 규격 μm 픽셀 카메라와 냉각 512x512 CCD입니다. 인수는 MetaMorph 소프트웨어 (분자 장치)를 사용하여 수행됩니다. 현미경은 온도 조절 객실에 배치해야한다 또는 현미경 단계는 온도 조절 챔버로 둘러싸인해야합니다. 이미지 수집 : 라이브 셀 이미징를 들어, 표백하고 검사하고 사진을로 이어질 수 샘플의 불필요한 노출을 방지하기 위해 중요합니다totoxicity. 따라서 먼저 표백 과도하거나 억제 세포의 성장으로 이어지는되지 않고 형광 검출이 가능 최적의 빛 노출을 찾기 위해 시스템을 특징하는 것이 가장 좋습니다. 좋은 형광 이미지를 얻으려면 흥미 진진한 광도, 노출 시간 및 카메라 게인을 재생합니다. 단계 6.2-6.3에서 10 분 프레임 간격은 빛 노출을 최소화하기위한 목적으로 선택됩니다. 각 프레임에서 단지 하나의 포커스에 이미지가 위상 대비 (셀 인식) 및 형광 채널 (세포의 운명을 결정하는)에 필요합니다. 제 1 시점에서 YFP 채널을 통해하지만, 여러 Z-위치 이미지는 세포 표면에있는 모든 감염 phages를 캡처 할 필요가 있습니다. 초기 프레임에 YFP 노출 시간도 나중에 프레임에서 시간 경과 영화에 사용보다 더해야 할 수 있습니다. 이미지 분석 : 매우 신중하게 단계 7.1에서 세포 표면 주위에 파지 입자를 계산합니다. 으로상술 한 바와 같이, 우리는 단계 6.2에서 YFP 채널을 통해 Z-스택 일련의를. 그러나이 아직 계산을 도전 일부 형광 파지 입자 밖에서 초점을 남길 수 있습니다. 초기 시간 프레임에서 셀의 길이는 Metamorph 소프트웨어를 사용하여 측정됩니다. 셀의 길이는 ImageJ 또는 다른 소프트웨어 도구에 의해 측정 할 수 있습니다. 또한, 자동화 된 집 지어 MATLAB 프로그램은 세포 lineages 따라 시간이 지남에 형광 변화 등의 정보를 얻어 매우 유용 할 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> 클로로포름 </td><td> 피셔 과학 </td><td> C298-500 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 피셔 과학 </td><td> S271-3 </td></tr><tr><td> DNase I </td><td> 시그마 </td><td> D4527-10KU </td></tr><tr><td> RNase </td><td> 시그마 </td><td> R4642-10MG </td></tr><tr><td> PEG8000 </td><td> 피셔 과학 </td><td> BP233-1 </td></tr><tr><td> SM 버퍼 </td><td> Teknova </td><td> S0249 </td></tr><tr><td> NZYM </td><td> Teknova </td><td> N2062 </td></tr><tr><td> CsCl </td><td> 시그마 </td><td> C3011-250G </td></tr><tr><td> 주사기 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 309585 </td></tr><tr><td> 바늘 </td><td> Becton 디킨슨 </td><td> 305176 </td></tr><tr><td> 투석 카세트 </td><td> 열 과학 </td><td> 66,333 </td></tr><tr><td> 현미경 슬라이드 </td><td> 코닝 </td><td> 2947-75x50 </td></tr><tr><td> 아가로 오스 </td><td> 피셔 과학 </td><td> BP160-100 </td></tr><tr><td> SW40Ti 초 투명 관 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀 베는 날 </td><td> 344060 </td></tr><tr><td> SW60Ti 초 투명 관 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀 베는 날 </td><td> 344062 </td></tr><tr><td> SW40Ti 회 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀 베는 날 </td><td> 331302 </td></tr><tr><td> SW60Ti 회 </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀 베는 날 </td><td> 335649 </td></tr><tr><td> 굴절계 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 13-947 </td></tr><tr><td> Epifluorescence 현미경 </td><td> 니콘 </td><td> 이클립스 TE2000-E </td></tr></tbody></table> 표 2. 시약 및 장비.

에 셀 운명을 따라<em&gt; e. 대장균</em&gt; 파지 람다에 의해 감염 후

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

박테리오파지 (파지) 람다와 박테리아 E.를 포함하는 시스템 대장균은 오래 세포의 운명 결정 1,2의 패러다임을 역임했다. phages의 숫자로 셀의 동시 감염에 이어 두 경로 중 하나가 선택되어 lytic (악성) 또는 lysogenic (휴지) 3,4. 우리는 최근 휘황 개인 phages 라벨을위한 방법을 개발, 개인 phages와 셀 (5)의 수준에서 현미경으로 실시간으로 후 감염 결정을 검토 할 수 있었다. 여기, 우리는 이전 일 5에 설명 된 감염 실험을 수행하기위한 전체 절차를 설명합니다. 이 형광 phages의 창조, 세포의 감염, 현미경 이미징 및 데이터 분석을 포함하고 있습니다. 형광 파지는 capsid gpD 단백질의 &quot;하이브리드&quot;공동 표현 야생 유형과 YFP 퓨전 버전입니다. 원유 파지의 lysate 먼저 gpD-EYFP (Enh의 lysogen을 유도함으로써 얻을 수 있습니다플라스미드 표현 야생 유형 gpD을 품고, 옐로우 형광 단백질) 파지를 anced. 정화 단계의 시리즈는 다음 현미경으로 DAPI-라벨 및 이미징 다음, 수행됩니다. 이것은 균일, DNA 포장 효율성, 형광 신호와 파지 주식의 구조 안정성을 확인하기 위해 수행됩니다. 박테리아에 phages의 초기 흡착는 ° C 바이러스 DNA 주입 6 실행하는 35 짧은 부화에 의해 다음 다음에 얼음이 수행됩니다. 파지 / 박테리아 혼합는 다음 얇은 영양 한천 판, coverslip으로 덮여 있으며 epifluorescence 현미경 이미징의 표면으로 이동됩니다. 후 감염 과정은 10 분 간격으로, 4 시간에옵니다. 여러 단계 순위는 ~ 100 셀 감염이 단일 실험에서 추적 할 수 있도록 추적합니다. 각 위치와 시간 시점에서, 이미지가 위상 대비 빨간색과 녹색 형광 채널에 인수되어 있습니다. 위상 대비 이미지가 자동 cel 나중에 사용됩니다형광 채널이 감염 결과를 특성화하는 데 사용하는 동안 난 인정 : 재개 세포의 성장과 분열에 이어 lysogeny 요소의 세포 용해, 또는 표현 (빨간색)에 이어 새로운 형광 phages (녹색)의 생산. 인수 시간 경과 영화는 수동 및 자동 방법의 조합을 사용하여 처리됩니다. 각 감염 이벤트 (phages을 감염 예 수와 위치)뿐만 아니라 감염 결과 (용해 / lysogeny)에 감염 매개 변수의 식별의 데이터 분석 결과. 원하는 경우 추가 매개 변수를 추출 할 수 있습니다.

이 문서는 박테리오파지 람다의 감염의 휘황 라벨이 지정된 버전을 준비하기위한 절차를 설명합니다<em&gt; E. 대장균</em&gt; 박테리아, 현미경으로 감염 결과에 따라, 그리고 감염 결과의 분석.

에 셀 운명을 따라<em&gt; E. 대장균</em&gt; 파지 람다에 의해 감염 후

박테리오파지(phage) 람다와 박테리아 E. coli로 구성된 시스템은 오랫동안 세포 운명 결정의 패러다임으로 활용되어 왔습니다1,2. ...에 이어

이 실험 과정의 전반적인 목표는 형광 현미경을 사용하여 파지 lambda 감염 후 e coli 내의 황산염을 실시간으로 추적하는 것입니다. 우선 파지 lambda의 조정액(crude lysate)을 제조하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 파지를 정제하고, 튜브 내에서 파지 lambda로 e coli를 감염시킵니다.현미경 하에서 박테리아 세포의 운명을 지속적으로 관찰합니다. 궁극적으로, 세포 성장 또는 사멸과 관련된 서로 다른 형광 단백질의 발현을 통해 E. coli의 다양한 세포 운명을 실시간으로 확인할 수 있습니다. 일반적으로, 이 방법의 한 가지 점검 사항은 정제된 프론트 및 라벨링된 FI 스톡의 생성입니다.준비 및 정제 과정 중의 응집을 방지하기 위해, 건강한 세포 성장이 가능하도록 현미경의 이미징 파라미터를 최적화하십시오. E 3 92 Lambda LZ one PPL star D의 하룻밤 배양액을 LBM 배지에 접종하십시오. 세포 밀도가 OD 600 기준 약 0.6이 되면, 42 °C 워터배스 셰이커에서 lygen을 유도하십시오.용해가 확인될 때까지 37 °C에서 계속 배양합니다. 배양액이 투명해집니다. 이제 2% chloroform을 첨가하고, 실온에서 15분 동안 배양합니다.다음으로, 파지 용해물을 250 milliliter 병에 옮기고 배양액을 원심 분리합니다. 그 후 파지 입자가 포함된 상층액을 회수하고, 표준 파지 역가 측정 프로토콜에 따라 가시적인 잔해물을 제거하기 위해 2차 원심 분리를 수행합니다. 파지 농도를 측정하고, cesium chloride 구배를 통해 파지를 정제한 다음, aro slab 제작을 위해 DPI로 활성을 측정합니다.6개의 현미경 슬라이드를 70% ethanol로 세척합니다. 5개의 슬라이드를 표시된 대로 배치하고 테이프로 고정합니다. 이제 고정된 슬라이드 위에 배지에 1.5% aros를 녹인 용액을 붓습니다.기포가 생기지 않도록 주의하며 마지막 슬라이드를 맨 위에 배치합니다. 그 위에 무게추를 올리고 AROS를 약 30분 동안 냉각시킵니다. 측면의 슬라이드 4개를 제거하고 슬라이드 뭉치를 랩으로 포장합니다.형질전환된 박테리아의 하룻밤 배양액을 접종균으로 사용하여 LBMM에서 배양한 후, 박테리아 1 mL를 펠렛화하고 재현탁합니다. 넓은 피펫 팁을 사용하여 세포를 얼음처럼 차가운 LBMM 20 µL에 현탁합니다.정제된 파지 20 µL를 첨가합니다. 가볍게 혼합한 후, 파지가 흡착될 수 있도록 먼저 얼음 위에서 30분간 배양합니다. 그 다음 35 °C 항온수조에서 5분간 배양합니다.파지 DNA 주입을 유도하기 위해, 혼합하여 세포 응집물을 분리합니다. 혼합물을 LBMM에 1:10 비율로 희석합니다. 이제 LBM agro 슬랩에 배치합니다.커버 슬립 위에 파지 세포 혼합물 1 µL를 추가합니다. 흡수되면 다른 커버 슬립을 그 위에 조심스럽게 덮습니다. 초기 시간대에 대해 YFP 채널을 통해 이미지 세트를 획득하는 것으로 시작하십시오.200 nanometer Z축 간격으로 15장의 이미지를 연속 촬영합니다. 추가로, 위상차(phase contrast) 및 m cherry 채널을 통해 초점이 맞은 단일 이미지를 촬영합니다. 그 다음, 감염 후 세포 운명에 대한 타임랩스 동영상을 획득합니다.타임랩스 영상 촬영 중 광퇴색과 광독성을 최소화하기 위해, 각 채널의 시간대별 이미지당 단일 Z 위치 이미지를 사용하고, 위상차, YFP 및 M cherry 채널의 샘플을 약 4시간 동안 10분 간격으로 촬영하십시오. 이미지 분석은 파지의 수를 수동으로 세는 것부터 시작하며, 파지의 위치와 세포 길이 또한 기록하십시오. 초기 시간대에는 용균성, 용원성 또는 비감염성 중 세포의 운명을 기록하십시오.또한 타임랩스 영상을 재생하여 용해 시간을 비롯한 기타 필요한 정보를 기록하고, 자동 세포 인식 및 계보 추적 알고리즘을 사용하여 개별 세포의 시간에 따른 형광 수준과 같은 정량적 정보를 추가로 추출하십시오. 일반적으로 형광 표지된 파지의 플라크는 야생형보다 현저히 작으며, 성공적으로 정제된 파지의 YFP 및 DAPI 신호는 서로 공국소화(co-localize)됩니다. 이 데이터는 위상차, YFP 및 M cherry 채널의 이미지 세트와 타임랩스 영상에서 얻은 해당 중첩 이미지들을 결합한 것입니다.초기 시점에서 개별 파지들이 명확하게 보입니다. 여기 두 개의 세포는 각각 단일 파지에 의해 감염되었으며, 한 세포는 세 개의 파지에 의해 감염된 것이 보입니다. 일반적으로 일부 파지는 세포 표면에서 관찰되는 반면, 다른 파지들은 흡착되지 않은 상태로 관찰됩니다.시간이 지남에 따라 감염 결과가 뚜렷하게 구분됩니다. 80분 후, 단일 파지에 감염된 두 세포는 각각 용해 경로로 진입했습니다. 새로운 파지가 세포 내에서 생성됨에 따라, 세 개의 파지에 감염된 세포는 pre-motor로부터 m Cherry가 생성되는 것을 특징으로 하는 용원성 경로로 진입했습니다.이 영상을 시청한 후, 여러분은 phage lambda를 이용하여 e co 박테리아를 감염시키기 위한 정제된 파지 스톡을 제작하는 방법과 현미경 하에서 실시간으로 라이프사이클 이미징을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

Source: Saragliadis, A., et al. Producing Gene Deletions in Escherichia coli by P1 Transduction with Excisable Antibiotic Resistance Cassettes. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the phage-mediated transfer of donor DNA carrying an excisable antibiotic resistance cassette into Escherichia coli. The integrated cassette replaces the target gene via homologous recombination, resulting in a stable gene deletion.

Generating Gene Deletions in E. coli via Phage-Mediated Transfer of an Excisable Antibiotic Cassette

셀 무료 녹음 방송 번역 플랫폼의 새로운 세대 생화학 시스템에 생체 외에서 유전자 회로 실행을 통해 구성 설계 되었습니다. 이 문서에서는, 우리는 모든 대장균 세포 무료 TXTL 시스템을 사용 하 여 그들의 게놈에서 살 균 소 MS2, ΦΧ174, T7, 등는 합성 하는 방법을 설명 합니다.

에는 대장균-감염 살 균 소의 합성 기반 셀 무료 식 시스템

여기 선물이 다른 대장균 변종에 삭제 돌연변이 만들기 위한 기반으로 기존의 항생제 저항-카세트 삭제 구문을 사용 하는 프로토콜. 이러한 삭제 돌연변이 동원 고 P1 살 균 소 변환을 사용 하 여 받는 사람 긴장의 해당 장소에 삽입 될 수 있습니다.

Excisable 항 생 저항 카세트와 P1 변환 하 여 대장균 에서 생산 유전자 삭제

우리 둘 다 생체 외에서 그리고 vivo에서 감염 분석 호스트 인코딩 요인의 활동을 분석 하는 데 사용할 수 있습니다 설명 합니다.

셀룰러 및 Organismic 수준 호스트 응답 세균성 병원 체 프로브를 사용 하 여

세균성 세포의 화상 진찰은 큰 거대 분자 기계의 기능을 지시하는 정적 및 동적 프로세스를 정의에 초점을 맞춘 신흥 시스템 생물학 접근입니다. 여기서, 정량적 라이브 세포 영상 및 극저온 단층 촬영의 통합은 레지오넬라 뉴모필라 형 IV 분비 시스템 아키텍처 및 기능을 연구하는 데 사용된다.

레지오넬라 폐렴 구균 도트/Icm 분비 시스템의 시공간적 특징을 해결하기 위해 라이브 세포 이미징 및 극저온 단층 촬영 적용

여기에서는 DNA에 조립되는 EWS-FLI1 응축수의 생물물리학적 메커니즘을 연구하기 위해 단일 분자 이미징 방법인 DNA 커튼의 사용에 대해 설명합니다.

DNA에 조립되는 EWS-FLI1 응축수의 단일 분자 이미징

박테리아를 감염시키는 바이러스인 박테리오파지(파지)는 장내 마이크로바이옴의 필수 구성 요소입니다. 이러한 공생 생물이 박테리아 적합성과 개체군 역학을 주도하지만 장내 항상성과 질병에 미치는 영향에 대해서는 거의 알려져 있지 않습니다. 이 프로토콜은 마우스 모델 내에서 분리된 T4 파지를 연구하며, 다른 파지-박테리아 쌍에 적응할 수 있습니다.

쥐 장에서 T4 박테리오파지와 대장균 상호작용: 생체 내 숙주-박테리오파지 역학 연구를 위한 프로토타입 모델

여기 우리는 즉시 정화하여 intraperitoneal 접종 다음과 찬란 다음 주사 사이트에서 자신의 이해와 움직임을 모니터링하고 이러한 이벤트를 중재 전지 특성화 감염 두뇌 자료에서 집계 프리온 봉 라벨 면역 세포 프리온 이해와 인신 매매를 감시를위한 소설 분석을 설명합니다.

Intraperitoneal 감염 후 면역 세포의 인신 매매 형광등 프리온 로즈 시간을 모니터링

Burkholderia의 속의 구성원은 임상 중요성 병원균이다. 우리는 기계적 중단하고 후속 단백질체 분석에 2-D 겔 전기 영동을 사용하여, 전체 박테리아 단백질을 추출하는 방법을 설명한다.

총 단백질 추출 및 2-D 겔 전기 영동 방법에 대한<em&gt; Burkholderia의</em&gt; 종

방법은 항원 동시에 수백 대해 파지 디스플레이 조합 항체 라이브러리의 합성 확장, 고 스루풋 선택을 수행하기위한 시각적 반주하여 설명한다. 이 병렬 접근 방식을 사용하여, 우리는 표준 면역의 기능적인 다양한 항원에 대한 높은 친화력과 특이성을 나타내는 항체 단편을 격리했다.

파지 - 표시 합성 항체 라이브러리의 확장 성 높은 처리량 선택

학습하세요 형광 현미경을 이용하여 E. coli의 파지 람다 감염 후 세포 운명을 실시간으로 관찰하는 방법을. 이 기술은 미생물학 및 바이러스학 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

에 셀 운명을 따라

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