Name: 파지 - 표시 합성 항체 라이브러리의 확장 성 높은 처리량 선택 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 55 s
Description: 학습하세요 파지 표시 합성 항체 라이브러리에서 고친도 Fab 클론을 고처리량으로 분리하는 확장 가능한 방법을. 수백 개의 항원에 대해 병렬 선택을 수행하여 면역학 및 항체 공학 연구에 활용할 수 있습니다.

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우리는 NIH 일반 기금을 감사드립니다 - 단백질 캡처 시약 프로그램 재조합 항체 네트워크 항체 선택 및 특성화 파이프 라인 및 로봇 선택 플랫폼의 자금 조달 구매 혁신에 대한 캐나다 재단의 개발 자금을 지원합니다.

<ol><li>Winter, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Man-made+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Man-made antibodies.</a> Nature. 349, 293-299 (1991).</li>
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<li>Schofield, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+phage+display+to+high+throughput+antibody+generation+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Application of phage display to high throughput antibody generation and characterization.</a> Genome Biol. 8, R254(2007).</li>
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<li>Colwill, K., Graslund, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+roadmap+to+generate+renewable+protein+binders+to+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">A roadmap to generate renewable protein binders to the human proteome.</a> Nat. Methods. 8, 551-558 (2011).</li>
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<li>Pershad, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+a+panel+of+highly+specific+antibodies+to+20+human+SH2+domains+by+phage+display%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Eng.+Des.+Sel%22%5BJournal%5D)">Generating a panel of highly specific antibodies to 20 human SH2 domains by phage display.</a> Protein Eng. Des. Sel. 23, 279-288 (2010).</li>
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<li>McLaughlin, M. E., Sidhu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+and+analysis+of+peptide-recognition+domain+specificities+by+phage+display+and+deep+Sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Engineering and analysis of peptide-recognition domain specificities by phage display and deep Sequencing.</a> Methods Enzymol. 523, 327-349 (2013).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal. Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>den Engelsman, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+assessment+of+protein+aggregates+in+pharmaceutical+biotech+product+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Strategies for the assessment of protein aggregates in pharmaceutical biotech product development.</a> Pharm. Res. 28, 920-933 (2011).</li>
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<li>Mahon, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+interrogation+of+a+minimalist+synthetic+CDR-H3+library+and+its+ability+to+generate+antibodies+with+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Comprehensive interrogation of a minimalist synthetic CDR-H3 library and its ability to generate antibodies with therapeutic potential.</a> J. Mol. Biol. 425, 1712-1730 (2013).</li>
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저자가 공개하는 게 없다.

시험 관내 항체 선택에서 수행 할 때, 선택 성공의 두 가지 주요 결정 요인에 따라 선택하는 선택) 잘 접혀진 표적 항원의 분리 (1)이며, 2) 높은 다이버 시티 기능성 항체 라이브러리의 이용. 많은 경우에, 잘 접혀, 전체 길이 단백질의 충분한 양의 가용성은 제한 될 수있다. 이러한 제한을 극복하는 한 가지 방법은 적당한 친 화성 태그 박테리아 발현 벡터에 삽입 생물 정보 학적 분석 (22)로부터 식별되고 합성 된 도메인을 사용하는 것이다. 용해도를 증가 정제를 용이 불안정 도메인을 안정화. (11)에게 원하는 삽입 서열은 매우 다양한 항원 생성 플랫폼 있도록 가상적 합성하는 기능을하는 생명 공학 분야에 사용되는 태그로 다양하다. GST-태그 형식이 공통이지만, 이전에 성공적인 결과왔다헥사 히스티딘, 된 Fc, 할로, 말 토스 결합 단백질과 부위 - 특이 적 바이오 틸 태그를 사용하여 수득하고이를 무수...

포스트 게놈 시대의 시작과 함께, 특징 및 단백질을 조절하는 고품질의 결합 시약의 가용성은 새로운 연구 및 치료 길을 열 필수적이다. 항체는 기초 연구 및 진단 도구 및 잠재적 치료제로 모두 학문과 산업 연구원에 중요한 계속. 당연히, 사용자 정의 항체를 생성하기 위해 기존의 하이 브리 도마 기술에 의존하는 대부분의 계약 항체 개발 기업의 인상적인 성장이 있었다. 그럼에도 불구하고, 파지 디스플레이 항체 라이브러리를 사용하여 체외 선택은 기존의 기술 한계 1, 2에 직면 수있는 고유의 장점과 성공을 제공 할 수있는 강력한 대안 기술이되고있다. 연구 도구, 생성하는 두 가지 주요 과제로 높은 품질의 항체에 대한 상당한 수요에 비추어 신 재생 항체는 1) 선택 처리량과 2) 항원 유명하다ailability. 그룹 번호는 현재 처리량 및 항체 인식의 속도를 향상 목적 체외 선택 파이프 라인에서 설명 하였다. 이러한 설명 세부 전체 길이 중 하나에 선택 등이 가능한 다양한 접근 방식을 사용, 2, 3, 4 대상으로, 또는 구조적 도메인 5,6,7 관련 중 하나 비드 기반 6,8 또는 3,4 항원 고정화 방식을 기반 접시입니다. 또한, 유전자 합성 기술 (9)의 성장 채택 합리적 비용 효과적인 잠재적 정제, 전장 항원의 충분한 양을 얻는 데 어려움을 완화 할 수 특히 고립 도메인으로 체계적인 항원 생성을 만들었다. 나란히 두 기술을 사용함으로써, 자 급식 및 확장 항원 생성 및 항체 선택 파이프 라인 표현 항원 도메인 큰 세트 항체 평행 절연을 가능하게하고 차 시약의 개발을 촉진 것이라고 고안했다구조적으로 또는 기능적으로 관련 단백질의 전체 클래스를 racterizing. 이 목표, 표현할 수있는 항원 도메인, 유전자 합성, 항원과 확장 성을 파지 디스플레이 항체 선택의 높은 처리량 세균 표현의 실리 식별의 부부가 개발 한 통합 파이프 라인을 향해. 이 파이프 라인은 (라이센스 또는 물질 전달 계약을 통해 점점 사용할 수있는 항체 라이브러리 포함) 대부분의 생명 과학 실험실에서 사용할 기본적인 인프라가 필요합니다,뿐만 아니라 산업적인 규모에서 사용하기 위해를 자동화에서 쉽게 다룰 수있다. 이 프로토콜을 이용하면, 친 화성 태그 항원 수백 도메인을 생성 할 수 있고, 통상적으로 이들 중 많은 항원에 매우 특이 적 항체 단편을 분리. 파지 디스플레이 기술 된 Fab, scFv를, 자율 된 Fv 도메인과 재조합 포함한 친 화성 시약 다양한 포맷과의 호환성을 입증했다 도시작은 &#39;대안 프레임 워크&#39;(설계 ankyrin 반복 단백질 (DARPINS), 피브로넥틴 (FN), 리포 칼린 도메인과 10 개)의 성장 배열입니다. 그것은 이러한 방법은 다른 유형의 라이브러리에 적용 할 수있는 것으로 추정되지만 토론은 항체의 Fab 단편의 단리 본 예에서는 제한된다. 이 기술을 사용하면, 작은 낮은 나노 몰 친화 팹, 전장 단백질 결합과 같은 면역과 같은 면역 기능적 이는 많은 RNA 결합 단백질 등이 성공적으로 선정 된 전사 인자 도메인, SH2 도메인을 포함한 단백질 도메인 듣기 , 면역 및 면역 조직 화학. 중요한 것은, 재조합 바인딩 클론이 완전히 재생하고 표현에서 다시 생성 될 수있다, 따라서 엄격한 복제 검증의 비용을 정당화, 박테리아 생산 제공 일관성 향상, 재현성 및 비용 효율성을 통해 구성한다. 이 제자에ocol 및 첨부 동영상은, 고정 된 항원 도메인을 사용 파지 디스플레이 라이브러리의 항체 선택을위한 기본적인 방법은 입증된다. 다른 태그 11,12,13 및 선택 포맷이 성공적으로 사용되어왔다 13,14,2 있지만이 특정 방법은 마이크로 웰 플레이트에서 수동 흡착에 의해 고정 된 GST-태그 단백질 도메인을 사용합니다. 식별 및 검증을 위해 특별히 풍부한 클론 항체를 분리하기위한 선택 매개 변수의 병렬 모니터링 선택의 설정 및 행동에 중요한 고려 사항이 자세히 설명되어 있습니다.

<table><tbody><tr><td>재료</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>: New Brunswick Innova44 스택형 인큐베이터 쉐이커</td>, <td>Eppendorf</td><td>M1282-0004</td><td></td></tr><tr><td>Liquidator, 96채널 수동 벤치탑 피펫팅 시스템</td><td>, Anachem Ltd</td><td>, LIQ-96-200</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 쉐이커</td>, <td>VWR</td><td>12620-926</td><td></td></tr>, <tr><td>ThermoScientific Sorvall ST-40 탁상용 원심분리기</td><td>, Thermo Product</td><td></td><td></td>75004525</tr><tr><td>ELx405 Select Deep Well Microplate Washer</td><td>Biotek</td><td>ELX405USD</td><td></td></tr><tr><td>맞춤형 고처리량 자동 파지 선택 로봇</td><td>S& P Robotics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 원추형 팔콘 튜브: 50ml</td><td>VWR</td><td>21008-178</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 원추형 팔콘 튜브: 15ml</td><td>VWR</td><td>89039-668</td><td></td></tr><tr><td>Axygen 1.7ml 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Corning</td><td>MCT-175-L-C</td><td></td></tr><tr><td>96-well/384-well Maxisorp 플레이트</td><td>Sigma</td><td>M9410-1CS</td><td></td></tr><tr><td>Corning 96-well V-bottom deep-well block</td><td>Corning</td><td>3960</td><td></td></tr><tr><td>Axygen Mini-tube 96-well sterile microplate blue box</td><td>Corning</td><td>AXY-MTS-06-C-R-S</td><td></td></tr><tr><td>통기성 접착 플레이트 밀봉 필름</td><td>VWR</td><td>60941-084</td><td></td></tr><tr><td>시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>이름</td><td>회사</td><td>카탈로그 번호</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 글리콜</td><td>Bioshop</td><td>PEG800.1</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>Bioshop</td><td>YEX401.1</td><td></td></tr><tr><td>바이오-트립톤</td><td>Bioshop</td><td>TRP402.1</td><td></td></tr><tr><td>N-Z 아민</td><td>Sigma</td><td>C7290</td><td></td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>Sigma</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>락토스</td><td>Bioshop</td><td>LAC234</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>Bioshop</td><td>GLY001.500</td><td></td></tr><tr><td>카르베니실린&nbsp;</td><td>Bioshop</td><td>CAR544.10</td><td></td></tr><tr><td>카나마이신</td><td>Bioshop</td><td>KAN201.25</td><td></td></tr><tr><td>테트라사이클린&nbsp;</td><td>Bioshop</td><td>TET701.25</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Bioshop</td><td>TWN510.500</td><td></td></tr><tr><td>일염기성 인산칼</td>륨 <td>Bioshop</td><td>PPM302.1</td><td></td></tr><tr><td>이염기성 인산나트륨</td><td>Anachemia</td><td>84486-440</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Bioshop</td><td>SOD001.10</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨</td><td>Bioshop</td><td>POC308.1</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>Bioshop</td><td>CCL302.500</td><td></td></tr><tr><td>황산마그네슘</td><td>EMD</td><td>MX0070-1</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘</td><td>Bioshop</td><td>MAG510.500</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl</td><td>Amresco</td><td>0621-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Na2SO4</td><td>Bioshop</td><td>SOS513.500</td><td></td></tr><tr><td>한천</td><td>Bioshop</td><td>AGR001.500</td><td></td></tr><tr><td>SybrSafe DNA 젤 염색</td><td>Invitrogen</td><td>S33102</td><td></td></tr><tr><td>인산</td><td>Acros 유기물</td><td>201140010</td><td></td></tr><tr><td>라이소자임</td><td>Bioshop</td><td>LYS702.25</td><td></td></tr><tr><td>benzonase</td><td>Novagen</td><td>71205</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td></td><td>Bioshop</td><td>TRX506.500</td></tr><tr><td>프로테아제 억제제 칵테일 정제</td><td>Roche</td><td>11 836 170 001</td><td></td></tr><tr><td>Ni-NTA 수지&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>1018240</td><td></td></tr><tr><td>1,000x helper phage (M13K07) stock (1013 phage per ml)NEB</td><td></td> <td>N0315S</td><td></td></tr><tr><td>HRP conjugated M13-specific antibody (anti-M13-HRP).</td><td>GE 헬스케어</td><td>27-9241-01</td><td></td></tr><tr><td>TMB 기질: TMB와 H2O2 peroxidase 기질을 동일한 부피로 혼합하십시오.</td><td>KPL</td><td>50-76-00</td><td></td></tr><tr><td>dNTP 바이오</td><td>베이직</td>스 <td>DD0056</td><td></td></tr><tr><td>Taq 중합효소</td><td>Genscript</td><td>E00007</td><td></td></tr><tr><td>엑소뉴클레아제</td><td>GE 헬스케어&nbsp;</td><td>EZ0073X-EZ</td><td></td></tr><tr><td>새우 알칼리성 인산가수분해효소</td><td>GE 헬스케어</td><td>E70092Z-EZ</td><td></td></tr></tbody></table>

파지 - 표시 합성 항체 라이브러리의 확장 성 높은 처리량 선택

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

모두 기초 연구 및 임상 응용의 요구를 충족하는 항체에 대한 수요가 높고, 향후 대폭 증가 할 것이다. 그러나, 기존의 단일 클론 기술이 작업까지 혼자가 아니라는 것을 알 수있다. 이것은 프로테옴의 모든 요소들에 접근 고품질 재생 친 화성 시약에 대한 수요를 충족시키기 위해 대안적인 방법의 개발을 유도 하였다. 이를 위해, 파지 표시 합성 항체 라이브러리에서 선택을 수행하기위한 높은 처리량 방법은 다양한 항원을 포함하는 애플리케이션을 위해 고안되었으며, 빠른 처리 속도 및 성공에 최적화. 여기서, 프로토콜은 비디오 시연 수동 96 채널 액체 핸들러 또는 로봇 자동화 된 시스템을 사용하여 타겟의 수백에 대해 높은 다이버 시티의 Fab 라이브러리로부터 파지 클론의 선택을 도시 평행 상세하게 설명한다. 이 프로토콜을 이용하여, 사용자는 하나의 항원을 생성 할 수있는 수백,병렬로 항체를 선택 6-8 주 이내에 항체 결합을 확인합니다. 강조는 다음과 같습니다 ⅰ) 가능한 항원 형식, ⅱ) 사전 선택 항원의 특성, ⅲ) 중요한 특정 및 선호도가 높은 클론의 선택에 영향을 미치는 단계, 및 ⅳ) 모니터링 선택 효과와 초기 항체 클론 특성화 방법. 이 방식으로, 우리는 단일 막 통과 수용체, 단백질 분비 호르몬, 멀티 도메인, 세포 내 단백질을 포함하는 많은 타겟 클래스 합성 항체 단편 (Fab를)를 얻었다. 이 조각은 쉽게 전체 길이 항체로 변환하고 높은 친화력과 특이성을 나타내는 것으로 확인되었다. 또한, 그들은 웨스턴 블로 팅, ELISA, 세포 면역, 면역 및 관련 분석을 포함하여 표준 면역의 다양한 기능으로 입증되었다. 이 방법은 항체 발견을 촉진하고 궁극적으로 목표 O를 실현 가까이 우리를 가져올 것이다F 프로테옴에 재생 고품질 항체를 생성하는 단계를 포함한다.

본원에 기재된 프로토콜은 병렬 조합 된 Fab 파지 표시 라이브러리로부터 structurally- 기능적 관련 항원 도메인 모두의 다양한 항체 단편을 분리하는데 사용되어왔다. 가용성 항원과 관련된 문제는 항체의 선택 (23)에 적합한 항원 발현 도메인 실리 식별에 의해, 많은 경우에 회피 될 수있다. 실험실 내에서 동일한 항체 선택으로 (도 1) 항원의 발현을 연결함으로써 그 선택에 중요한 항원 파라미터들이 더 쉽게 제어 할 수있는 통합 된 파이프 라인을 구축하는 것이 가능해진다. 대부분의 경우, 도메인 경계의주의 결정은 항체 선택의 성공적인 사용에 대한 표현과 96 또는 24도 deepwell 판에 높은 처리량 표현에서 충분히 순수한 항원의 적절한 수량의 분리 (그림 2) 할 수 있습니다. 연속 동안선택 프로세스의 발사 속도는, 구체적으로는, 항원 농도 용출 된 파지 및 파지의 농축은 ELISA 분석에서 적정 어느 파지 (도 3)<...

방법은 항원 동시에 수백 대해 파지 디스플레이 조합 항체 라이브러리의 합성 확장, 고 스루풋 선택을 수행하기위한 시각적 반주하여 설명한다. 이 병렬 접근 방식을 사용하여, 우리는 표준 면역의 기능적인 다양한 항원에 대한 높은 친화력과 특이성을 나타내는 항체 단편을 격리했다.

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

이 확장 가능한 절차의 전반적인 목표는 고처리량 접근 방식을 사용하여 파지 디스플레이 라이브러리로부터 특정하고 결합력이 높은 fab 파지 클론을 분리하는 것이며, 이를 통해 수백 개의 항원성 표적 도메인에 대해 병렬 선택을 수행할 수 있습니다. 이는 먼저 정제된 항원성 도메인을 마이크로웰 플레이트에 고정함으로써 달성됩니다. 다음 단계는 연속적인 선택 라운드를 통해 마이크로플레이트에 고정된 항원에 특이적으로 결합하는 fab 파지 클론을 노출, 캡처, 방출 및 증폭하는 것입니다.이 과정 동안, 각 단계에서 풀링(pooled) 방법을 사용하여 선택의 효율성을 모니터링합니다. 마지막 단계는 분리된 fab 클론의 특이성, 친화도 및/또는 활성을 평가하는 것입니다. 결과적으로, 수많은 항원에 대해 특이성이 높고 친화력이 강한 fab 단편들이 병렬로 분리되며, 이를 통해 구조적 또는 기능적으로 관련된 단백질 전체 클래스의 분석에 유용한 항체를 생성할 수 있습니다.이 방법의 중요성은 학계나 산업체 실험실 모두에서 기존 항체 개발 기술의 한계를 극복하고 개발 속도를 높일 수 있는 대안을 제공한다는 점에 있습니다. 하이브리도마와 같은 기존 항체 개발 기술과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 동물을 사용할 필요가 없다는 것입니다. 또한 독성 단백질이나 비면역원성 단백질을 포함하여 사실상 모든 단백질에 적용할 수 있습니다.앞서 살펴보겠지만, 이 과정은 쉽게 병렬화할 수 있으며 궁극적으로 특정 항원에 특이적인 고친화도 항체를 인코딩하는 재생 가능한 재조합 DNA와 기능적이고 표준화된 면역 분석법을 단 6~8주 만에 얻을 수 있게 해줍니다. 의생명 연구에서 항체의 중요성을 고려하여, 저희는 실험실의 규모와 가용 자원 범위에 상관없이 접근성을 유지하면서 항원 생성 및 항체 선택 및 확인 과정을 고처리량 방식으로 적응시키고 확장할 기회를 찾았습니다. 파지 선택 당일 아침에 T1 파지 내성 E. coli 세포의 단일 콜로니를 픽업하십시오.이를 50 µg/mL의 tetracycline이 포함된 2YT 배지 1 mL에 접종합니다. 콜로니를 2.5 cm 궤도 진탕기(orbital shaker)에서 200 RPM으로 진탕 배양합니다. 배양액의 성장이 육안으로 확인되면, 세포를 tetracycline이 보충된 필요한 부피의 배지로 옮깁니다.선택 웰당 100 µL, 또는 96-웰 플레이트당 약 10 mL의 양이 충분히 준비되어야 합니다. 배양액의 분

scalable-high-throughput-selection-from-phage-displayed-synthetic

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오에서는 표적 단백질에 대한 친화도가 높은 단백질을 발현하는 사전 엔지니어링된 파지를 분리하는 파지 디스플레이 기술을 보여줍니다.

Phage Display를 사용하여 타겟 단백질에 대한 친화도가 높은 단백질 선택

파지 디스플레이는 그 고정 된 분자와 상호 작용하는 단백질이나 단백질 부분을 캡처 할 수있는 강력한 기술이다. 생성하는 파아지 cDNA 라이브러리의 형식과 스크린의 결정이 제작되면, 여기에 설명 된 프로토콜 인터랙의 식별에 이르는 효율 선호도 선택을 허용한다.

재조합 단백질의 미끼를 사용 파지 디스플레이와 궁합 선택을위한 프로토콜

설명 하는 프로토콜 건설, 특성화 및 DNA 소스에서 만든 "domainome" 라이브러리 (선택의 대상)에 대 한 선택 수 있습니다. 이것은 다른 기술을 결합 하 여 연구 파이프라인에 의해 달성: 파지 디스플레이, 접이식 기자와 다음 세대 시퀀싱 데이터 분석을 위한 웹 도구.

위하여-Seq: Domainome 라이브러리 건설, 유효성 검사 및 페이지 표시 및 다음 세대 시퀀싱 선택 프로토콜

이 프로토콜에서는 맞춤형 다양성 합성 항 체 살 균 소 전시 도서관의 건설에 대 한 자세한 절차를 설명합니다. 합성 항 체는 질병 진단 및 치료제를 기초 연구에서 광범위 한 응용 프로그램 있다.

합성 살 균 소의 건설 맞춤형 다양성 팹 라이브러리 표시

임의의 주어진 소분자 리간드에 대해 원하는 친화성 및 특이성을 가진 화학적으로 유도된 단백질 이분화 시스템을 만드는 것은 많은 생물학적 감지 및 작동 응용을 가질 것이다. 여기서, 우리는 파지 디스플레이 조합 단일 도메인 항체 라이브러리의 단계적 선택을 통해 화학적으로 유도된 이량화 시스템의 de novo 엔지니어링을 위한 효율적이고 일반화 가능한 방법을 설명한다.

결합 단일 도메인 항체 라이브러리의 단계별 파지 선택에 의해 고도로 특이적 화학적으로 유도된 단백질 이분화 시스템 생성

이 연구는 약물 펩티드 상호 작용을 식별하기위한 전략을 제시하는 것을 목표로했다. 이 전략은 석영 결정 마이크로 밸런스 (QCM) 바이오 센서에 기초한 약물 인식 짧은 펩타이드의 바이오 패닝을 포함하고, 단백질에 대한 약물 인식 및 약물 결합 부위의 음장 에 대해 얻은 정보를 정량적으로 평가하기위한 생물 정보학 분석이 뒤따릅니다.

약물 단백질 상호 작용의 글로벌 검증을 위한 바이오센서 기반 고처리량 바이오패닝 및 생물정보학 분석 전략

유비퀴티뉴션은 번역 후 중요한 단백질이며, 이의 난독증은 수많은 인간 질환에 연루되어 있다. 이 프로토콜은 파지 디스플레이가 유비퀴티니션의 특이성, 효율성 및 패턴을 제어하는 E3 리개아의 활성을 결합하고 조절할 수 있는 새로운 유비퀴틴 변종을 분리하는 방법을 자세히 설명합니다.

파지 디스플레이를 사용하여 E3 리개아제용 유비퀴틴 변종 변종 변조기 개발

이 프로토콜은 관심 항원에 결합하는 단백질 변이체를 풍부하게 하기 위해 효모 표면 디스플레이 선택 캠페인을 수행하기 위한 필수 단계를 설명합니다.

효모 표면 디스플레이에 의한 단백질 공학

이 방법은 높은 감도에 감염된 생쥐들의 bronchioalveolar 세척 (BAL) 유체에서 H1N1의 탐지를위한 적외선 염료 기반 이미징 시스템의 사용을 설명합니다. 이 방법론은 96에서 수행할 수 있습니다 - 또는 판 384 자, 시험 물질 &lt;10 μl 볼륨이 필요하고 여러 병원체의 동시 상영을위한 잠재력을 가지고 있습니다.

인플루엔자 바이러스에 대한 높은 처리량 검출 방법

루트 매듭 nematodes있는 화면 식물 별개의 두 가지 방법이 설명되어 있습니다. 설명한 방법은 번식 프로그램에서 이러한 식물의 이용을 촉진 비파괴 방식으로 nematodes과 높은 처리량 화면을 포함합니다.

루트 - 매듭 Nematodes과 높고 낮은 처리량 화면 Meloidogyne SPP.</em

학습하세요 파지 표시 합성 항체 라이브러리에서 고친도 Fab 클론을 고처리량으로 분리하는 확장 가능한 방법을. 수백 개의 항원에 대해 병렬 선택을 수행하여 면역학 및 항체 공학 연구에 활용할 수 있습니다.

파지 - 표시 합성 항체 라이브러리의 확장 성 높은 처리량 선택

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