마이크로 컴퓨터 단층 촬영 영상에 대한 Microfil와 허혈성 뒷발과 혈관의 관류에 삼투의 약물 전달 (Drug Delivery)

이 절차의 전반적인 목표는 마우스의 허혈성 뒷다리에 국소 물질 전달을 위한 삼투압 펌프의 생체 내 삽입과 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 이미징을 위한 마이크로필을 사용한 후속 뒷다리 혈관 관류를 입증하는 것입니다. 이것은 먼저 실험 동물의 어깨와 뒷다리를 절개하여 동물의 등 안쪽을 따라 칼집 튜브의 터널링을 허용함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 채워지고 프라이밍된 삼투압 펌프와 카테터를 튜브를 통해 삽입하고 펌프를 동물의 뒤쪽으로 봉합합니다.

다음으로 튜브를 제거합니다. 대퇴동맥은 대퇴골 분기점에 근위부로 이중 결찰되어 있으며 절개 부위를 봉합합니다. 그 후, 힌딘 혈관 구조에는 infrarenal abdominal aorta catheter를 통한 실리콘 라디오 픽 이미징 에이전트인 microfill이 관류됩니다.

궁극적으로, 마이크로필(microfill)로 볼 수 있는 쥐 허혈성 뒷다리의 혈관 캐스트의 3D 이미지를 이미지화할 수 있습니다. 저는 텍사스 심장 연구소(Texas Heart Institute)의 분자 심장학 연구소(Molecular Cardiology Research Laboratories)의 책임자인 리처드 딕슨(Richard Dixon) 박사입니다. 저희 연구실은 심혈관 질환 및 말초 혈관 질환을 치료하기 위한 다양한 세포 및 약물 기반 치료제를 개발해 왔습니다.

말초 혈관 질환에서 화합물을 테스트하는 가장 일반적인 모델 중 하나는 동물 설치류 뒷다리 허혈 모델입니다. 우리는 최근에 이 모델에 대한 여러 가지 중요한 발전을 이루었으며 이 비디오 프레젠테이션에서 이를 소개하고자 합니다. 매일 약물 주사와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 이 기술이 동물 취급 및 보험에 대한 필요성을 줄인다는 것입니다.

시작 기간 동안 물질의 로컬 투여를 계속합니다. 또한, 마이크로필 주조 혈관의 마이크로 CT 이미징은 마이크로 CT가 전체 샘플에 걸쳐 혈관성을 나타내는 진정한 정량적 및 체적 3차원 분석을 렌더링할 수 있기 때문에 조직학적 또는 레이저 도퍼 풍부 이미징보다 유리합니다. 멸균 기술을 사용하여 빈 펌프의 무게를 측정하고 무게를 밀리그램 단위로 기록하는 것으로 시작합니다.

다음으로, 하나의 CC 주사기와 뭉툭한 끝이 있는 27 게이지 주입 튜브를 사용하여 펌프에 PBS를 천천히 채웁니다. PBS가 펌프 상단에 도달하면 주입을 중지하십시오. 여분의 용액을 닦아낸 후 채워진 펌프의 무게를 잰다.

그런 다음 한 쌍의 집게를 사용하여 흐름에서 흰색 플랜지를 끊습니다. 감속자는 P 50 카테터로 감속자 양쪽 끝에서 3-4mm 떨어진 튜브 덮개를 구부리거나 찌그러뜨리지 않도록 주의합니다. 이제 주사기를 사용하여 카테터를 채우고 감속재를 사용하여 주사기를 카테터의 원위부에 부착한 상태로 둡니다.

유량 조절기를 펌프에 삽입하기 시작합니다. 카테터가 펌프 표면과 같은 높이가 되면 카테터에서 주사기를 제거하고 PBS에서 섭씨 37도의 펌프를 밤새 배양합니다. 수술 당일, 완전히 진정된 엎드린 쥐에게 안연고를 바르고, 그런 다음 동물에게 불소의 연속적인 흐름을 전달하는 맞는 콧방울을 놓습니다.절개 부위에 마취제를 주입한 후 포비돈 요오드 용액과 70% 에탄올로 피부를 치료합니다.

그런 다음 척추 옆의 견갑골 부위를 4-6mm 절개합니다. 가는 집게를 사용하여 피하막을 분리합니다. 그런 다음 마우스를 누운 위치로 돌린 후 미세 수술 용 가위를 사용하여 대퇴 동맥의 경로를 따라 무릎 위 내측 허벅지 쪽으로 0.8-1cm 절개를 만듭니다.

그런 다음 작은 칼집 튜브를 사용하여 허벅지 내측에서 뒤쪽 절개 부위까지 몸통 측면을 터널로 뚫습니다. 다음으로, 마우스를 엎드린 자세로 되돌린 후 프라임 삼투압 펌프의 카테터를 칼집 튜브를 통해 허벅지로 안내한 다음 펌프를 동물의 뒤쪽 내부에 배치합니다. 6 oh prolene 봉합사로 뒤쪽 절개 부위를 닫습니다.

마우스를 누운 자세로 놓은 후 다시 한 번 칼집 튜브를 제거하고 허벅지의 절개 부위를 통해 카테터를 노출시킵니다. 수술용 테이프로 다리를 고정합니다. 그런 다음 견인기를 사용하여 절개 부위를 열고 피하 지방 조직을 분리하여 혈관 조직을 드러냅니다.

그런 다음 가늘고 뾰족한 집게를 사용하여 막성 대퇴골 수초를 부드럽게 뚫습니다. 과도한 출혈을 일으키지 않고 혈관 다발에 접근하기 위해. 대퇴 동맥을 사타구니 근처의 대퇴 정맥 및 신경에서 조심스럽게 절개하고 분리합니다.

그런 다음 대퇴 동맥을 차단하기 위해 2개의 8개의 오프롤렌 인접 봉합사를 배치하고, 대퇴 동맥 근위부에서 대퇴부 분기점에 2-3mm 떨어진 곳에서 전복부 FMRI와 상복부 동맥의 근위부에 위치합니다. 이제 카테터를 적절한 길이로 자릅니다. 팁을 허벅지의 전외측 부위에 놓고 6.0 프롤렌 봉합사로 팁을 표재성 근막에 고정합니다.

이미징을 준비하기 위해 마취된 마우스를 누운 자세로 놓고 1000IU 헤파린 나트륨 0.2cc를 피하주사하여 마우스가 콧방울에 부착되어 있는 동안 동물의 혈관 구조에서 응고를 방지합니다. 복부 장기를 동물의 왼쪽으로 이동한 후 흉강과 하복부가 노출될 수 있을 만큼 크게 절개합니다. 하부 대동맥을 노출시키려면 대동맥과 하대정맥을 조심스럽게 분리해야 합니다.

다음으로, 근위 근하 복부 대동맥을 접합하고 바늘 끝을 사용하여 혈관을 작게 절개합니다. 그런 다음 P 10 카테터에 부착된 27 및 반 게이지의 뭉툭한 바늘을 하부 대동맥에 삽입하고 6 오 봉합사로 바늘을 고정합니다. 27 및 반 게이지 바늘을 고정한 후 오른쪽 심방을 절개하고 불소를 과다 투여하여 안락사를 유도하고 과도한 체액이 배출될 수 있도록 합니다.

이제 헤파린 식염수로 채워진 20cc 주사기를 바늘 끝에 부착하고 최소 5분 동안 혈관 구조를 세척합니다. 플러싱이 시작되면 노즈 콘을 제거하고, 마이크로필을 주입하는 것은 절차에서 가장 어려운 단계입니다. 성공을 보장하기 위해서는 항해로 관류한 후 모든 혈액을 혈관에서 헹구는 것이 중요하며, 이제 포르말린으로 채워진 20cc 주사기를 카테터에 부착하고 추가로 5분 동안 혈관에 압력을 가합니다.

마지막으로, 5분 동안 마이크로필로 혈관을 천천히 관류합니다. 최적의 용기 주조를 달성하기 위해 마이크로필을 투여할 때 일정한 압력을 가하도록 주의하십시오. 선택적으로, 이 시점에서 피부를 절개하여 얼굴 분석을 위한 마이크로필로 채워진 혈관 구조를 볼 수 있습니다.

조영제의 중합을 위해 동물을 10%NBF로 채워진 용기에 넣고 24시간 후에 섭씨 4도에서 보관하십시오. 해부 도구를 사용하여 하복부 대동맥 원위 피부를 제거합니다. NBF를 새로 고치고 동물을 실온의 용기에 다시 넣습니다.

4일 후, 뼈 석회질 제거를 용이하게 하기 위해 반대쪽 및 허혈성 뒷다리를 절개합니다. 표본을 포름산 용액에 48시간 동안 넣은 다음 흐르는 물에 1시간 동안 헹굽니다. 마지막으로 표본을 10%NBF로 되돌리고 fron 및 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 이미징을 진행합니다.

이 첫 번째 그림은 대퇴 동맥의 수술 전 혈액 관류와 수술 결찰에 대한 대표적인 레이저 도플러 이미지를 보여줍니다. 마우스의 뒷다리에서 허혈은 마이크로필로 혈관 주조 후 화살표로 표시된 바와 같이 왼쪽 뒷다리에 생성되었으며, 혈관 네트워크의 3D 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 이미지는 마이크로필이 혈관을 효과적으로 채울 수 있음을 보여줍니다. 그러나 불연속성은 기포, 압력 부족 또는 마이크로 필의 점도와 같은 다양한 절차적 요인으로 인해 발생할 수 있으며, 불연속성 지점은 화살표로 표시됩니다.

이 비디오를 시청한 후에는 허혈 수술 후 쥐의 뒷다리에 물질을 안정적으로 전달하기 위해 천식 펌프를 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.