Name: 생성 및 마우스의 동맥 병변의 3 차원 정량 광학 프로젝션 단층 촬영을 사용하여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 45 s
Description: 배우세요 마우스 동맥 병변의 3차원 정량 분석을 위한 광학 투영 단층촬영법을. 이 기술은 죽상경화성 및 신내막 병변을 시각화하여 심혈관 질환 메커니즘 연구에 활용됩니다.

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(; 헨리 Dryerre 방식 LL)과 자금 조달 영국 심장 재단 (PWFH, BRW, DJW,이 작품은 에든버러 대학 (NSK)과 카네기 신뢰에서 studentships에 의해 지원되었다 RG를 / 05 / 008, PG / 05 / 007; PG / 08 / 068 / 25,461)와 웰컴 트러스트 (Wellcome Trust) (JRS, BRW, DJW; 08314 / Z / 07 / Z). 저자는 심혈관 과학 센터에 연구 우수상의 BHF-지원 센터에서 제공하는 자신의 일을 지원하기 위해 감사하고 있습니다. 저자는 신생 내막 병변 생산의 수술 모델의 설립에 교수 마사 타카 사타 (도쿠시마 대학) 및 (의학의 마운트 시나이 학교에서 박사 Ernane리스 &#39;그룹) 박사 이고르 Chersehnev의 조언에 특히 감사하고 있습니다. 비디오 제작 및 SATA 등으로 사용할. (http://plaza.umin.ac.jp/~msata/english.htm) 특히 유용했다.

마우스 대퇴 동맥의 내막 병변 1. 수술 유도 <ol><li> 동물을 이용한 실험은 국가 및 기관의 윤리 규정에 따라 수행되어야한다. 모든 수술 적절한 무균 기술을 사용하여 수행되어야한다. 신생 내막 병변 유도 로크 외. (12)와 SATA 외. (13)에 의해 기술 된 방법의 변형을 사용하여 달성된다. </li><li> 수컷 C57BL6 / J 마우스 체중 (나이 10~12주을 중량 25~30g)를 유도 한 다음 챔버 4-5 %의 이소 플루 란을 전달하여 마취시키다. 마취를 유도 한 후, 37 ° C에서 체온을 유지하기 위해 가열 된 매트에 마우스를 옮긴다. 마스크를 통해 이소 플루 란 (2-3 %)의 관리를 계속합니다. </li><li> 마취의 적절한 수준 (발가락 핀치에 대한 응답의 부족) 유도되면, 부 프레 노르 핀의 투여에 의해 진통 커버를 제공 (0.1 ㎎ / ㎏ -1). 그런 다음 부정사 위치에 마우스를 올려왼쪽 뒷다리의 복부 표면을 면도 거라고. </li><li> 슬와 동맥과 복부 벽 분기 사이에, 대퇴 신경에서 대퇴 동맥과 정맥을 분리하는 무딘 절개를 사용, 상단 뒷다리의 근육을 노출 절개를합니다. / 브이 lignocaine w 1 %를 사용하여 필요에 따라 상처 관개. </li><li> (슬와 동맥 즉시 분기 아래) (복부 벽에 가까운)과 말초 근위 대퇴 동맥과 혈액의 흐름을 제어하는​​ 정맥 주위에 임시 합자 (6/0 Mersilk)를 놓습니다. 다음 (대퇴 동맥으로 분기에 말단 약 2-5mm에 대한) 슬와 동맥을 분리하고 원심 결찰. 슬와 동맥 아래에 두 번째, 비구 속성 합자를 놓습니다. </li><li> 근위 임시 결찰에 압력을 적용하여 출혈을 방지 대퇴 동맥과 분기 바로 원위 슬와 동맥에 작은 절개 (arteriotomy)를, 확인. 직선 사전, 0.014 &quot;가이드 와이어를 꼬셔복벽의 방향을 따라 대퇴 동맥 1.5 cm와 30 초 (도 1A)에 대해 위치에 남겨. </li><li> 가이드 와이어를 제거하고 그 목적을 위해 배치 된 합자를 사용하고, 대퇴 동맥을 폐색 않도록주의하면서, arteriotomy 위의 슬와 동맥 결찰. 참고 : 결찰에 의한 부상. 관내 부상없이 신생 내막 리모델링은 대퇴 슬와 동맥 또는 (그림 1B 및 1C)을 결찰에 의해 유도 될 수있다. 이 추적이 1.1-1.5 단계를 달성하기 위해. 그러나 arteriotomy하지 않지만 (ⅰ) (단계 1.6 회피)이 슬와 동맥과 분기점에서 대퇴 동맥 또는 (ⅱ) 결찰 대퇴 동맥 바로 원위 슬와 동맥 결찰. 단계 1.8를 진행합니다. </li><li> 임시 합자를 제거 불연속 외부 봉합 (5/0 Mersilk)에 상처를 닫고 EMLA 크림 (2.5 % 리도카인, 2.5 % prilocaine)을 적용한다. 동물이 다시 허용<html> 의식 (일반적으로 5 ~ 10 분)을 얻고 그들의 새장 주위를 자유롭게 이동할 수 있도록 (약간의 파행은 영향을받는 다리에 알 수 있습니다 만,이 수술 후 첫 2-3일을 통해 해결해야한다) 객실을 보유로 돌아 가기 전에. 마우스는 수술 후 단독으로 수용 할 필요가 없습니다. </li><li> 동물들은 최대 3 개월 동안 복구 할 수 있습니다. 작은 병변 7 일 와이어 손상 후 ~ 나타나기 시작하고 21-28일 ~ 후 안정적인 최대 크기에 도달 할 것입니다. </li></ol> 아포 지단백 E의 동맥 경화성 병변 2. 유도 - / - 마우스 <ol><li> 12 주 남성, 육주 (집에서 자란) 이전 아포 E-널 마우스로, 서부 다이어트 (연구 다이어트, 미국 0.2 % 콜레스테롤)을 관리합니다. </li><li> 동맥 경화성 병변은 종종 대동맥 궁과 주요 지점 (그림 2)의 총 점검에 볼 수 있습니다. </li></ol> 3.을 분석 동맥 병변 사용하여 광학 프로젝션 단층 촬영 (OPT) NT &quot;&gt; 참고 : 쥐의 대퇴 동맥과 대동맥 궁 샘플에서 병변의 OPT 이미지를 투사 광학 단층 촬영기를 이용하여 구 하였다. <ol><li> 10 % 중성 완충 포르말린을 이어 헤파린 (10 U / ㎖) 인산염 완충 식염수 (PBS)를 사용하여, 단말기 마취 하였다 (80 mg / kg 펜토 바르 비탈 나트륨) 하에서 (rongeur)로 고정하고 방혈하여 쥐를 안락사. </li><li> 적절한 대퇴 동맥이나 대동맥 궁과 주요 지점 (왼쪽 경동맥, 좌측 쇄골 하 동맥, 팔 머리 트렁크)를 분리하고, 외부 근교 외막 물질을 제거. 필요할 때까지 70 % 에탄올에 저장하기 전에 10 % 포르말린의 O / N에서 후 수정. </li><li> 1.5 % 저 융점 아가로 오스에 포함 동맥은 113 V 와트 만 여과지 미리 필터링. 자기 선택하는 각각의 샘플을 부착 마운트의에 맞춰 선박 축과 시아 노 아크릴 레이트 접착제로 탑재합니다. 원뿔 모양으로 초과 아가로 오스를 낸다. 적어도 12 시간 동안 100 % 메탄올 탈수. </li><li> C벤질 알코올, 벤질 벤조 에이트의 혼합물에 (12 ~ 24 시간 동안)에 의해 리어 침지 용기 (1 : 2 v / v)로. </li><li> 교정 단층 촬영기 클리어 샘플을 놓습니다. 1,024 X 1,024 해상도를 설정하고 관심의 전체 영역을 볼 수있는 광학 배율을 결정합니다. OPT 볼륨이 Z 축이 동일한 해상도로 재구성된다 등방성 (즉, 1024 X 1024 X 1024), 복셀의 크기 ~ 200㎛ 인. 재건 아티팩트가 될 가능성이 있기 때문에이 해상도를 통해 견적을 나타낼 수있다. 그 시야, 전송 채널에서 시야 중심에서 자체 축에 회전되도록 샘플의 위치를​​ 조정한다. </li><li> GFP1 필터 방출 채널 (여기 필터 (425) 내지 밴드 패스 내지 40; 발광 필터 : 475 nm의 롱 패스)에서, 시편을 집중하고, 생성 된 화상의 동적 범위를 최대화하기 위해, 노광 시간을 조정 (과잉 포화 방지). 0.9 ° 회전 단계와, 단지 GFP1 방출 채널 스캔 용기. &lt;/ 리&gt; <li> 완료시 DataViewer 소프트웨어를 사용하여 데이터 수집의 품질을 확인한다. 스캐너에서 표본을 제거합니다. </li><li> 처리가 정상적으로 왁스 파라핀하기 전에 다음 조직 학적 분석,&gt; 24 시간 동안 100 % 메탄올 장소 샘플을 허용합니다. </li></ol> 4. 이미지 재건 및 분석 여과 역 투영에 의한 단층 재 건설 NRecon 또는 유사한 소프트웨어를 사용하여 수행된다. 재건은 일괄 적으로 무인 수행 할 수 있습니다. <ol><li> 오정렬을 보상 및 이미지 세기 레벨을 조정하여 이미지 품질을 향상. </li><li> DataViewer 소프트웨어를 사용하여 영상 재구성의 품질을 확인합니다. </li><li> 분석을위한 시료의 해당 섹션을 확인합니다. 내강 차원이 기록 될 경우 혈관 사이의 일관성이 길이를 유지합니다. </li><li> 수동 매 50 재 구축 단면에서 1에 해당하는 경계를 추적하여 병변의 윤곽을 정의. </li><li> 컴퓨터에서 생성 된 보간이 올바른지 확인하기 위해 각 인터리브 단면을 확인합니다. 필요한 경우 수동으로 경계를 조정합니다. </li><li> 단지 병변 선택되도록 그레이 레벨 임계 값을 설정하고, 측정 데이터를 반출. </li><li> 각 스캔의 경우, 병변을 포함하는 관심의 수직 영역을 정의하고 미디어와 신생 내막의 경계를 추적 (예., 내부 탄성 얇은 판의 위치) 매 50 번째 스캔 라인. 소프트웨어의 인터리브 스캔 라인에 대한 내막 / 미디어 국경을 보간하고, 확인하고 필요한 경우에 맞게 수정합니다. 또한,이 세그먼트는 흰색 픽셀이 신생 내막을 나타내는 블랙 픽셀 특허 루멘을 표현하는 바이너리 이미지 세트를 생성하기 위해 수동으로 정의 강도 임계치에 입체 볼륨을 정의. </li><li> 촬영 측정은 다음과 같습니다 : 총 병변 볼륨 (대상 볼륨), 내강 볼륨 (총 부피 - 객체 볼륨)과 병변의 크로스 종파 루멘 분포를연구 선박의 축 방향 길이를 따라하는 ional 지역. </li></ol>

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저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없습니다.

3 차원 분석은 교체 또는 정지 동맥 병변 형성의 연구의 대부분을 뒷받침하는 2 차원 조직 학적 기술에 추가하기위한 큰 잠재력을 가지고있다. 여기 OPT는 (아마도이​​ 기술을 이용하여 성공적으로 분석 할 수있는 가장 작은 혈관을 나타내는 뮤린 대퇴부 동맥에) 작은 쥐의 동맥에 나타낸다. 또한, 그러나, 동맥 (병변) 중소 규모 인간 혈관을 포함하는 다른 종에서 사용하기에 적합하다; 우리 그룹이 성공적으로 토끼 대동맥의 병변을 분석하는 기술을 사용하고있다 (Bezuidenhout 등;. 미 출판). OPT 전통적인 조직학 분석 비해 빠르게 증가 구조 정보를 약속하고 조직 학적 및 면역 조직 화학적 기법을 사용하여 두 샘플의 후속 분석을 방지하지 않는 장점을 갖는다. OPT를 사용하여 제조 된 화상은 환부 형성의 위치를​​ 보여주는 해부학 상세히 준이들 지역에서 병변의 크기입니다. 이 연구에 사용 된 동맥 따라서 (아마 회전 부정 정렬, 불완전 청소, 반사 / 굴절 아가로 오스의 정점에 포커싱 문제로 인한) 유물에 의해 어느 정도 손상 기술과 이미지 품질에 대한 해상도의 한계에 아마 가까운 . 그럼에도 불구하고, 요구 사항 (즉, 용기 벽의 층)이 남아 있고, 따라서 뚜렷한 기술 각 층의 정량화에 매우 유용하다. 사실상, 이미지는 샘플에서의 선택된 부위에서 혈관의 플라크 - 함유 섹션 병변 내강 부피의 측정뿐만 아니라, 병변의 단면적과 루멘을 제공하기 위해 신속하고 재현 가능하게 정량화 될 수있다. 대형 (대동맥)과 중간 크기 (대퇴, 경동맥, 쇄골) 쥐의 동맥 - 그 일반적으로 마우스의 동맥 경화 및 neotintimal 병변 형성의 분석에 사용이 - 성공적이었다이 방법을 사용하여 분석 하였다. 사실 우리는 지금 동맥 경화와 신생 내막 병변의 크기에 약리학 적 개입과 유전자 조작의 효과를 입증하는 OPT를 사용했다. 혈관 내피 세포에서 엔도 텔린 B 수용체의 선택적 삭제하지 않았다 (15) 반면, 예를 들면, 엔도 텔린 수용체 차단이 신생 내막 병변 형성을 변경. 쉬운 마우스에서 동맥 경화증, 효소 유전자의 결실 11β-HSD1 16 galectin 3 17 죽상 경화성 병변의 크기를 줄이기 위해 도시 하였다. 병변 볼륨의 정량은 OPT의 명백한 혜택입니다. 그것은 일반적으로 조직 학적 방법으로 얻은 것보다 동맥 4 총 병변 부담의 더 많은 정보 표시를 제공합니다. 전체 병변을 분석하는 것은 선박의 개별 섹션이 분석을 위해 선택하는 경우 필연적으로 발생합니다 선택 편견과 오류를 줄일 수 있습니다. 종 병변 프로파일의 생산은 OPT의 또 다른 힘이다부상 13,16 다른 유형 (도 5)에 의해 유발 된 병변의 비교에 의해 강조. 예를 들어, 완전한 결찰 와이어 삽입 모두 femero - 오금 분기에 가까운 거의 총 폐색을 유도. 와이어 손상, 동맥 결찰에 의해 유도되는 병변 크기가 급격히 감소하고 사라지는 반면, 스캔 된 부분의 전체 길이를 따라 연장 그러나 제조 병변. 이 패턴은 혈관의 가이드 와이어의 삽입에 의한 손상의 큰 범위와 일치한다. 조직 학적 섹션을 사용하여 비슷한 결과를 생성하는 비용이, 시간과 노동 집약적. OPT의 장점은 (우리가 일상적으로 하루에 20 척을 스캔 한)가 생산하는 이미지의 품질과 상대 속도와 단순성을 포함한다. 화질이 3 차원 화상을 생성하기위한 다른 방법으로, 우수 또는 적어도 필적 나타나는 생체, Y (예컨대 MRI와 같은 마이크로 CT)등의 OPT가 (우리의 연구 / 이미지 일반적으로 1-2sec이었다에 대한 통합 시간)과 저렴 짧은 검사 시간을 필요로한다. 시료 준비는 수일에 걸쳐 연장되지만 작은 노동 혈관 일괄 제조 될 수 있어야하고, 데이터가 하나의 세션에서 취득 할 수있다. 따라서, 스루풋이 높고 스캐너의 확장 사용을 요구하지 않는다. 중요한 것은, OPT의 비파괴 특성은 면역 검사에 대한 관심의 위치를​​ 식별하기 위해 사용될 수있는 수단; 따라서 절단의 양을 감소하고 필요한의 염색. 이것은 고해상도 초음파의 개발이 동맥 병변이 크기의 체적 정량 대체 방법을 제공하는 것을 가능하지만, 저자들은이 애플리케이션을 보여 모든 출판물 모르고. 아마도 당연히, OPT의 화질은 (물론, 단지 작은 샘플들에 수행 될 수있다) 현미경 기법에 떨어진다. 제안 된 상세 검색은 reconstructio하기데이터의 N 화질 19,20 향후 개선시킴으로써 이러한 한계를 해결할 수있다. 다른 방법론적인 관심사는 조직 처리 샘플의 특성을 변경하는 점이다. 예를 들어, 클리어링 제의 친 유성 성질은, 벤질 알코올 / 벤질 벤조 에이트 (BABB)는 물론, 탈수 및 지방 제거 단계도의 특징이며, 비록 종래 탈수 (수축을 일으킬 수 반면, 죽상 경화 병변에서 지질을 제거 가능성 파라핀 왁스에 포함 샘플 준비). BABB (예 : 글리세롤 21)은 형태 만 작은 변화가 발생 친수성 청소 에이전트와의 비교 등이 조사에 사용되었다. 특히 중요한 세포의 3 차원 배열을 추적하고 동맥 리모델링에 관련된 인자 시그널링에 관한 OPT의 발전 및 개선을위한 여러 가지 가능성이 존재한다. 이러한 인 동맥 조직 강한 형광도,해부학적인 이미지가 생성 N 장점은, 표백 (22)의 기존의 방법에 의해 급냉되지 않는 RNA 및 단백질 분포 패턴을 평가하기 위해 형광 프로브의 사용을 제한 할 수있다. 송신 촬상하여 시각화 비색 프로브의 사용은 (예를 들면 β 갈 락토시다 제)이 한계를 극복 할 수있다. 결론적으로, OPT는 쥐의 동맥의 내막에 병변의 3 차원 이미징을위한 큰 잠재력을 가지고있다. 그것은 일반적으로 노동 집약적이고 효율적으로 총 병변 볼륨을 나타내지 않는 2 차원 방법에 상당한 진보를 나타냅니다. OPT는 상대적으로 빠르고, 편리하고 비파괴입니다. 이미지 분석의 새로운 발전은 더 기술의 전력 및 유틸리티를 높일 것을 약속드립니다.

동맥 병변의 형성은 심혈관 질환 (1)과 관련된 높은 이환율과 사망률의 핵심입니다. 병변 형성을 손상이 동맥하도록 자유롭게 염증 반응에 의한 것으로 추정된다. 재 협착 병변을 신속하게 (스텐트 시술 후, 예를 들어) 급성 기계적 손상을 다음 개발할 반면 동맥 경화성 병변은 동맥벽 만성 상처에 대한 응답으로 서서히 형성한다. 동맥 병변의 발달에 기여하는 메커니즘은 종종 중요한 유전자 조작 (1)과 조합하여, 적절한 동물 모델을 사용함으로써 상당히 밝혀져왔다. 이 생체 내 및 생체 외에서 검출이나 작은 동물의 병변 분석을 위해 개선 된 방법의 개발로 변화되지만 병변의 크기 및 조성의 분석은 고전적 (생체 외, 2 차원 조직학에 크게 의존하고있다 &lt;SUP&gt; 3). 동맥 병변의 조직 학적 분석은 노동 집약적이고 시간 소모적이며, 3 차원 구조의 제한된 정보를 제공한다. 예를 들면, 병변은 일반적으로 부담 병변의 단면적을 측정함으로써 평가된다 (무작위로 선택된 어느 부위에서 또는 최대 폐색 부위). 이는 전체 병변 부담의 불완전한 분석을 제공합니다. 3 차원 화상 화 기술은 이러한 문제에 대한 해결 방안을 제공하지만 놀랍게도 몇 적합한 접근법 설명되었다 항목 마운트. 이것은 자기 공명 영상 (MRI) 4 및 X 선 단층 촬영 (CT) 5 단일 광자 공 초점 현미경에 대해 너무 크지 만 너무 작은 마우스의 혈관 크기에 주로 기인 할 수있다. 생쥐의 동맥 경화 병변의 연구에 생체 자기 공명 영상의 응용 프로그램 및 마이크로 CT들은 비교적 큰 동맥에서, 제한된 해상도를 제공합니다 제안합니다. 이에 추가, 상대적으로 긴 획득 시간이 필요합니다처리량 제한 (주사 비용을 증가)를 4,6-. (예 : 빛 간섭 단층 촬영 3,7 및 사진 음향 단층 촬영 (8)과 같은) 새로운 광학 이미징 양식의 개발은 쥐의 동맥 병변의 이미지를 개선하기위한 많은 가능성을 제공합니다. 비슷한 잠재력은 마우스 배아의 분석을 할 수 있도록 개발 된 광학 프로젝션 단층 촬영 (OPT)으로 표시됩니다. OPT는 직경 9 ~ 0.3-10 mm에 이르기까지 이미지를 표본으로 설계되었다. 전송 된 영상은 다색 가시광 반투명 시료의 투명도를 기록하고,이 해부학 적 구조의 식별을 위해 사용될 수있다. 내생의 특정 파장 (예를 들어, 콜라겐, 엘라스틴) 및 샘플에서 외생 형광 여기에 다음과 같은 빛의 방출 영상 기록 방출. 다른 조직 성분 유형 및 autofluorescent 종의 밀도에 차이가 수 있으므로이 또한 (해부학 적 정보를 제공 할 수있다현재). 또한, 면역 또는 유전자 발현의 분포는 적절한 형광 프로브 (10)를 이용하여 결정될 수있다. 어느 촬상 모드 (전송 또는 방출)의 경우, 광은 회전 샘플 (0.9 ° 씩 통상의 이미지 (400))와 같은 반복 촬상을 허용하도록 전하 결합 소자에 집중된다. 이들은 (예 원뿔 알고리즘을 사용하여 여과 역 투영 () 또는 반복적 재구성 등) 표준 단층 재구성 방법에 의하여 대량의 계산을 위해 사용될 수있다. 이전 커크비 등. (11)에 설명 된대로이 동영상은, 동맥 경화 및 신생 내막 병변의 빠른 정량화하고 비용 효율적인 3 차원 분석을 선택 우리의 새로운 응용 프로그램을 보여줍니다. 기법은 일반적으로 사용되는 세 가지 모델 병변 크기를 정량화하기에 적합한 것으로 나타났다 : (I) 대퇴 동맥 와이어 손상; apolipoprotei에서 (ⅱ) 대퇴 동맥 결찰, 및 (iii)식이 - 유도 된 죽상 경화증N E 결핍 (의 apoE - / -) 마우스.

<table><tbody><tr><td>작동 현미경</td><td>Zeiss, 독일</td><td></td><td>OPMI Pico i</td></tr><tr><td>마취 기계</td><td>Vet Tech, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluovac</td><td>Harvard Apparatus 영국</td><td>340387</td><td></td></tr><tr><td>Fluosorber</td><td>Harvard Apparatus 영국</td><td>340415</td><td></td></tr><tr><td>비드 살균기</td><td>Fine Science Tools, 영국</td><td>1800-45</td><td></td></tr><tr><td>가열 매트</td><td>미세 Sceince Tools, UK</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>MS1602S</td><td>PB1502 또는 동급</td></tr><tr><td>봉합사</td><td>Ethicon, UK</td><td></td><td>5/0 Mersilk</td></tr><tr><td>Guidewire</td><td>Cook Inc, US</td><td>C-PMS-251</td><td>0.014"</td></tr><tr><td>봉합사 실크</td><td>파인 사이언스 도구, 영국</td><td>18020-60</td><td>6/0 Mersilk</td></tr><tr><td>수술 도구</td><td>파인 사이언스 도구, 영국</td><td>14058-09</td><td>터프컷 아이리스 가위</td></tr><tr><td>Cohan-Vannas 스프링 가위</td><td>파인 사이언스 도구, 영국</td><td>15000-01</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 집게</td><td>파인 사이언스 도구, 영국</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>모리아 아이리스 집게</td><td>파인 사이언스 도구, 영국</td><td>11370-31</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Hemostat</td><td>Fine Science Tools, 영국</td><td>13008-12</td><td></td></tr><tr><td>Bulldog clips</td><td>Fine Science Tools, 영국</td><td>18050-35</td><td></td></tr><tr><td>Bioptonics 3001 Tomograph&nbsp;</td><td>Bioptonics, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마그네틱 OPT 마운트</td><td>Bioptonics, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Computer</td><td>Dell Inc, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>연동 펌프</td><td>Gilson</td><td>F117606</td><td>Minipuls 3</td></tr><tr><td>DataViewer 소프트웨어&nbsp;</td><td>Skyscan, 벨기에</td><td>v.1.4.4</td><td></td></tr><tr><td>NRecon 소프트웨어&nbsp;</td><td>Skyscan, 벨기에</td><td>v.1.6.8</td><td></td></tr><tr><td>CTan 소프트웨어</td><td>Skyscan, 벨기에</td><td>v.1.12</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Merial Animal Health Ltd, 영국</td><td>AP/Drugs/220/96</td><td>100% 흡입 증기, 액체</td></tr><tr><td>의료 산소</td><td>BOC Medical, 영국</td><td>UN1072</td><td></td></tr><tr><td>Vetergesic</td><td>Alstoe Animal Health Ltd, 영국</td><td></td><td>0.3 mg/ml</td></tr><tr><td>1% 리그노카인</td><td>Hamlen Pharmaceuticals, 영국</td><td>LD1010</td><td>10ml 앰플</td></tr><tr><td>EMLA 크림</td><td>Astra Zeneca, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pentobarbital</td><td>Ceva Animal Health Ltd, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Western Diet</td><td>Research Diets, 미국</td><td>D12079B</td><td>0.2% 콜레스테롤</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>시그마 영국</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>헤파린(점액)</td><td>Leo Laboratories, 영국</td><td>PL0043/003GR</td><td>250,000 단위</td></tr><tr><td>중립 버퍼 포르말린</td><td>시그마, 영국</td><td>HT501128</td><td>10%</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>VWR BDH Prolabo, 영국</td><td>20821.33</td><td>절대 분석기R&nbsp;</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Invitrogen, 영국</td><td>16020050</td><td>저융점</td></tr><tr><td>여과지</td><td>GE Healthcare, 영국</td><td>113v</td><td>Whatman</td></tr><tr><td>Cyanoacrylate 접착제</td><td>Henkel, 영국</td><td>4304</td><td>록타이트</td></tr><tr><td>벤질 알코올</td><td>Sigma, 영국</td><td>B6630</td><td></td></tr><tr><td>벤질 벤조 에이</td><td>트 Sigma, 영국</td><td>402834</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>VWR BDH Prolabo, 영국</td><td>20856.296</td><td>100%</td></tr></tbody></table>

생성 및 마우스의 동맥 병변의 3 차원 정량 광학 프로젝션 단층 촬영을 사용하여

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

적절한 동물 모델에서 생성 및 혈관 병변 분석은 환부 형성의 병인 및 신규 한 치료의 작용에 관한 중요한 정보를 생성, 심장 혈관 질환에 대한 연구의 기초이다. 아테롬 발생하기 쉬운 마우스, 병변 유도 수술 방법 및식이 변형의 사용은 극적 질환 개발과 새로운 치료의 잠재적 인 기여 메커니즘에 대한 이해를 향상되었다. 고전적으로, 병변 분석은 2 차원의 조직 학적 기법을 이용하여 생체 외 수행된다. 이 문서에서는 동맥 병변의 3 차원 정량 광학 프로젝션 단층 촬영 (OPT)의 응용 프로그램에 대해 설명합니다. 이 기술은 비파괴 같이, 표준 조직 학적 및 면역 조직 화학적 분석에 부속으로서 사용될 수있다. 신생 내막 병변은 마우스 대퇴 예술의 와이어를 삽입하거나 결찰에 의해 유도 된동맥 경화 병변 동안 ERY은의 apoE 결핍 쥐에 동맥 경화 다이어트의 관리에 의해 생성되었다. 병변은 보완적인 조직 학적 및 면역 조직 화학 분석 다음 autofluorescent 방출의 OPT 영상을 이용하여 조사 하였다. 기본 혈관 벽에서 명확하게 구별 병변 OPT. 병변 크기 병소 용적과 최대 단면적의 계산을 가능하게 된 면적을 이용하여 2 차원의 섹션에서 계산되었다. OPT를 사용하여 생성 된 데이터는 기술의 정확성과 분석의 전통적인 방법에 (오히려 다른 것보다) 보완 가능성을 확인, 조직학을 사용하여 얻은 측정 값과 일치했다. 이 작품은 동맥 경화와 신생 내막 병변을 영상화에 대한 선택의 가능성을 보여줍니다. 그것은 혈관 리모델링의 일상적인 3 차원 정량화를위한 ​​신속하고 많이 필요한 생체 기술을 제공한다.

정상 (unlesioned) 뮤린 대퇴부 동맥 예비 스캔 (N = 5) 상기 전송 촬상 유용한 이미지를 제공하지 않았다 보였다. 방출 된 신호의 기준 흡수 / 산란이 없기 때문에이 송신 imaging.However 너무 투명 (보다는 너무 불투명)되고 해제 동맥의 결과이고, 이는 발광 이미징에 유용하다. 대조적으로, 대퇴 동맥 (14 엘라스틴위한 410 nm의 여기 피크와 일치) 405-445 nm에서 여기 다음 최고의 신호, 발광 채널 강하게 autofluoresce. 이 이미지에서 복원 된 2 차원 조각은 명확하게 루멘과 외막과 루멘에서 용지를 구별. 쥐의 대퇴 동맥에서 이십팔일 와이어 - 후 (N = 6) 또는 ligation- (N = 5)에 의한 부상 신생 내막의 비후가 아닌 단층 촬영 배출 전망에 분명했다 (그림 3A)를 수확. 복원 2 dimens에서하는 ional 조각은, 동심 신생 내막 병변은 자신의 약한 방출 (그림 3B 그림 S1)에 의해 미디어에서 구별 할 수 있습니다. 동맥 경화 마우스의 OPT 방출 대동맥 궁의 전체 마운트 샘플의 이미지와 주요 지점 (N = 8) 예상되는 해부학 적 분포가 확인 된 병변 (예., 대동맥 궁, 완두 동맥과 기원의 작은 곡률 왼쪽 경동맥과 좌측 쇄골 하 동맥 (그림 4A).의 횡단면 영상이 (그림 4b는, S2 및 S3 피규어) 일반적으로 편심 병변이었고, 쉽게 미디어와 루멘 구별 있다고 지적했다. OPT 다음 조직 학적 분석을위한 처리 동맥이 성공적으로 조직 학적 (미국 트리 크롬, PICR를 사용하여 염색 섹션, OPT의 비파괴 특성을 확인osirius 적색)과 면역 조직 화학 (α-SMA, 맥-2) 기술 (도 3C와 4C). OPT를 이용하여 병변의 크기의 측정은 동일한 동맥 (11)로부터 촬영 된 이미지의 단면 조직 학적 분석을 이용하여 얻어진 측정 값과 일치하는 것으로 나타났다. 와이어 - (R 2 = 0.92) 및 결찰에 의한 (R 2 = 0.89) 신생 내막 병변과 동맥 경화성 플라크 (R = 0.85 2)을 선택하고 선형 회귀에 의해 밀접하게 연관 조직학에 의해 얻어진 병변 영역의 면적 측정 측정. OPT의 중요한 이점은 3 차원 분석을 가능하게하는 기능입니다. 이 기술로 병변의 체적 정량을 개발함으로써, 우리는에서 와이어에 병변 볼륨을 기록 할 수 있었다 (0.1100 ± 0.0091 mm 3, N = 6)와 결찰 - 부상 대퇴 동맥 (0.0200 ± 0.0089 mm 3, N = 5), 또한 동맥 경화 팔 머리 동맥에서 (0.180 ± 0.018 mm 3; N = 8). 측정 재현성 (각각 5.4 %의 변동 계수, 11.4 %, 4.8 %, N = 4)이었다 병변 모든 유형. 와이어 부상 혈관 신생 내막 병변은 이전에 의해 입은 피해의 큰 정도와 일치 결찰에 의해 생성 된 그보다 더 큰 (P &lt;0.0001)이었다. 생성 된 데이터는 (그림 참조 S1 - S3) 병변 프로파일 (그림 5)로 표현하고 역동적 인, 질적 평가를 위해 렌더링 할 수 있습니다. 이러한 접근 방식은 분명히 다른 부상 절차에 응답하여 환부 형성의 정도를 입증 부상 혈관 병변 형성의 치우침을 강조 하였다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig1.jpg" /> 그림 1 : 쥐의 대퇴 동맥에 병변 형성을 시작하는 방법 &amp; #.160; 슬와 동맥 arteriotomy 의하여, 대퇴 동맥에 혈관의 유도도 (A)는 역행 삽입 및 내피 손상의 제거를 스트레칭 응답하여 병변 형성을 자극한다. 혈액 흐름은 용기의 손상된 부분을 통해 다시 설정됩니다. 관내 신축성 삭박 또는 혈류 중단없는 (B) 신생 내막 증식은 대퇴 또는 대퇴 동맥 분기 바로 원위 슬와 동맥를 결찰에 의해 유도 될 수있다. (C)보다 심각한 비 denuding 부상 / 증식 반응은 대퇴 동맥의 분기점에 걸쳐 대퇴 및 오금 동맥 모두 결찰에 의해 유도 될 수있다. 이 기술은 대퇴 동맥의 말단부에 혈류를 차단하는 것이다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig2.jpg" /> 그림 2 :. 12주는 대동맥 궁과 주요 지점에서 병변 증착의 특성 패턴을 개발하기위한 마우스 대동맥 아치 죽종의 특성 증착 경향이 죽상 동맥 경화증 (Apolipopotein E 결핍 생쥐)는 높은 콜레스테롤 서양 음식을 공급. 알 수 있듯이, 병변은 대동맥 궁, 팔 머리 동맥, 해부 현미경 총 검사, 표시 (화살표), 그리고 왼쪽 경동맥과 좌측 쇄골 하 동맥의 오스티. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig3.jpg" /> 도 3 :. 왼쪽 대퇴 동맥의 결찰 다음 병변 형성 (명확성을 높이기 위해 반전 - 어두운 영역은 강한 발광에 대응) (A) 비 형광 방출 단층 화상 내막의 비후의 식별을 허용 (적색 arrowhe광고). (B) 영역과 고유 혈관 내강이 단층 촬영 재구성에서 구별 될 수있다. (C) 조직 학적 분석 (미국 트리 크롬은) OPT를 사용하여 얻은 이미지와 명확한 유사성을 강조한다. (AC)에서 스케일 바는 200mm입니다. 커크비 등. (AC) 11 스케일 바에서 적응 200 μm의 수 있습니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig4.jpg" /> 그림 4 :. 대동맥 아치 (어두운 지역에 따라서 선명도를 개선 강한 방출 표시되도록 반전) 동맥 경화가 발생하기 쉬운 쥐의 대동맥 궁에서 죽종의 영상 (A) 죽종 (빨간색 화살촉), 쉽게 비 단층 이미지에서 알 수있다 사이트에 (그림 2 참조) 광학 현미경 하에서 검사에 의한 죽종 베어링으로​​ 예측했다. (B)이 분포의이 패턴은 단층으로 CR 확인OSS 섹션. (C) 조직 학적 (미국 트리 크롬) 염색 병변 분석에 전통적인 접근 방식과 OPT의 보완 적 성격을 여러 가지 다른 항체을 강조하여 가까운 단층 촬영 섹션과 유사하고, 면역을 보여줍니다. (A-B)에서 스케일 바는 1mm이다; (C)에서 스케일 바는 250 μm의입니다. RSA 오른쪽 쇄골 하 동맥; RCA, 오른쪽 경동맥; LCA, 왼쪽 경동맥; LSA는, 쇄골 하 동맥을 왼쪽; BCA, 팔 머리 동맥; AAO, 대동맥을 상승; DAO는 대동맥을 내림차순. 커크비 등에서 적응. (11) <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig5.jpg" /> 그림 5 : 병변 루멘 프로파일의 분석은 동맥 손상의 다른 방법에 대한 응답으로 신생 내막 증식의 정도를 나타냅니다 다양한 광학 프로젝션 단층 촬영은 병변을 허용하고 루멘은 단면 measuremen 교차.TS는 대퇴 동맥을 따라 거리에 대해 도시합니다. 이 명확 총 결찰 (C)가 결찰의 사이트에서 완전한 폐쇄를 생산하지만 병변이 동맥을 따라 멀리 연장하지 않는 반면, 손상되지 않은 동맥 (A) 부분 결찰 (B)와 비교가, 작은, 상대적으로 분리 된 병변을 생산하는 것을 보여줍니다 . 와이어 내강 손상 (D)은 거의 완전하게 시료의 말단부를 흡장 및 동맥 주사 단면의 전체 길이를 따라 연장되는 병변을 생성한다. 커크비 등에서 적응. (11) 그림 (S1). 결찰 부상을 다음 마우스 대퇴 동맥에서 얻은 단면 이미지의 애니메이션 재건. 애니메이션 이미지의이 유형은 모두 정성 및 정량 분석에 유용합니다. 애니메이션 동맥의 원위부 섹션 기단으로부터 폐색 신생 내막의 점진적 발달을 이동함에 따라, 디스크루멘 미디어에서 ernible 쉽게 알 수있다. 곁가지를 쉽게 식별 할 수 있고, 분명 내강 흡장 및 크기가 증가함에 따라 병변 동맥의 외측 리모델링이있다. 결찰 부위에 도달하면, 용기의 완전 폐색이 발생한다. 커크비 등에서 적응. (11) .. (- 처음 나타나는 왼쪽)과 하강 (오른쪽) 대동맥 그림 (S2) 동맥 경화가 발생하기 쉬운 마우스에서 대동맥 궁의 단면 이미지의 애니메이션 재건 애니메이션은 상승의 단면으로 시작한다. 작은 병소의 대동맥 궁 방향으로 이동함에 따라 주사 대동맥에서 나타난다. 이미지는 완두 (왼쪽), 왼쪽 경동맥 (가운데)과 왼쪽 쇄골 (오른쪽) 동맥의 병변 많이 오스티을 보여 아치를 통해 이동합니다. 스캔이 지점을 따라 원심 이동하면 병변이 점차 subc에 처음으로 감소 사라lavian 동맥, 후 경동맥에 마지막으로 팔 머리 동맥. 흥미롭게도,이 용기와 분류기 위에 팔 머리 동맥 이동에 병변이 오른쪽 경동맥과 오른쪽 쇄골 하 동맥으로 나눕니다. 커크비 등에서 적응. (11) 그림 (S3). 애니메이션, 동맥 경화가 발생하기 쉬운 마우스에서 대동맥 궁의 볼륨 렌더링 된 이미지. 광학 프로젝션 단층 촬영 아포 리포 단백질 E 결핍 마우스의 대동맥 궁에서 병변의 분포를 보여,이 경우에는 3 차원 이미지를 생성 할 수있다. () 죽종은 (왼쪽 경동맥과 쇄골 하 동맥의 오스티과 대동맥 궁의 작은 곡률에, 팔 머리 동맥을 통해) 예상 사이트에 존재한다. 원 화상에 중첩 될 때 단면 베어링 (B) 세그먼트와 (적색 도시) 병변의 렌더링은 플라크의 분포를 강조한다.커크비 등에서 적응. (11)

심혈관 질환의 동물 모델에서 동맥 병변의 생체 외 분석은 고전적으로 조직학 및 면역 조직 화학 기술에 의존합니다. 이는 3차원 병변에서 2차원 측정을 제공합니다. 이 원고는 광학 투영 단층촬영을 사용하여 3차원의 정량적 분석을 위한 동맥 병변의 발생에 대해 설명합니다.

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

본 절차의 전반적인 목표는 광투사 단층촬영(optical projection tomography)을 이용하여 마우스의 죽상경화성 및 신내막 병변을 시각화하고 3차원적으로 정량화하는 방법을 보여주는 것입니다. 이는 먼저 수술적 방법이나 죽상경화증 발생 소인이 있는 마우스에게 고콜레스테롤 식단을 제공하여 동맥 병변을 생성함으로써 수행됩니다. 다음 단계로 표적 동맥을 분리한 후 광투사 단층촬영을 사용하여 스캔합니다.마지막 단계는 이미지 재구성을 수행하고, 병변을 식별하며, 병변의 부피를 측정하는 것입니다. 최종적으로, 이미지 분석을 통해 병변의 해부학적 재구성 결과와 병변 부피 및 동맥 협착의 정량화 결과를 얻을 수 있습니다. 본 연구팀은 심근경색 및 뇌졸중과 같은 생명을 위협하는 합병증으로 이어지는 동맥 협착을 유발하는 병변 형성의 근본 기전을 이해하는 데 관심을 두고 있습니다.광학 투영 단층 촬영(optical projection tomography)의 이번 적용 사례는 본 연구그룹의 Dr. Nicholas Kirkby가 Dr. Lucy Lowe와 협력하여 개발하였으며, 본 실험실의 박사후 연구원인 Dr. Jung Shi Wu가 시연할 예정입니다. 조직학 및 면역조직화학 염색과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 노동 강도가 낮고, 2차원이 아닌 3차원 분석이 가능하다는 점입니다. 대퇴 동맥 병변을 유도하는 이 기술은 R 및 동료들과 Sada 및 동료들의 방법을 수정하여 적용하였습니다.본 텍스트 프로토콜에서는 식이 조절을 통해 죽상동맥경화성 병변을 유도하는 방법을 설명합니다. 몸무게가 25에서 30 g 사이인 10~12주령의 C 57 black six 마우스를 준비하십시오. 마우스가 마취되면 체온 유지를 위해 가온 패드 위에 놓고, 노즈 콘을 통해 2~3%의 isof fluorine을 공급합니다.마우스가 발가락 꼬집기 자극에 반응하지 않으면 buprenorphine을 0.1 mg/kg으로 투여합니다. 다음으로, 마우스를 등으로 눕히고 왼쪽 뒷다리의 복측 표면을 제모합니다. 그 후, 오금동맥의 분지점과 복벽 사이의 상단 뒷다리 근육이 드러나도록 절개합니다.전 과정 동안 둔성 박리를 통해 대퇴동맥 및 대퇴정맥으로부터 대퇴신경을 분리하십시오. 1% w/v canine li 용액으로 조직의 습윤 상태를 유지하십시오. 다음으로, 복벽 근처와 슬와동맥 분지 바로 아래의 대퇴동맥 및 대퇴정맥 주위에 6.0 Mers 실크 결찰사를 임시로 배치하십시오.이는 혈류를 조절하기 위한 것입니다. 그다음 대퇴동맥과 분지되는 지점에서 원위쪽으로 2~5mm 떨어진 오금동맥을 분리하고, 오금동맥 하단을 결찰합니다. 두 번째 결찰사를 배치합니다.이제 대퇴동맥과 분지되는 지점 바로 원위부의 슬와동맥에 와이어 삽입을 위한 작은 절개창을 만듭니다. 절개 부위를 통해 복벽 방향의 대퇴동맥으로 출혈이 발생하는 것을 방지하기 위해 근위측 임시 결찰사에 압박을 가합니다. 0.014 inch G 와이어를 약 1~1.5 cm 정도 삽입합니다.30초 동안 그대로 둔 후 제거합니다. 그런 다음 결찰사를 사용하여 절개 부위 상단의 오금동맥을 결찰합니다. 이때 대퇴동맥이 폐쇄되지 않도록 주의하십시오.이제 임시 결찰사를 제거합니다. 5.0 mercal을 사용하여 불연속 연속 봉합으로 상처를 폐쇄합니다. 그 다음 EMLA 크림을 도포합니다.동물을 회복 케이지에서 의식을 회복하고 움직임이 돌아오게 한 뒤 홈 케이지로 돌려보냅니다. 다리에 2~3일 정도 파행이 나타날 수 있으나, 그렇다고 해서 마우스를 격리할 필요는 없습니다. OPT의 경우, 펜토바르비탈로 말기 마취를 유도하여 마우스를 안락사시켜야 합니다.그 다음, 방혈을 동반한 경심장 관류 고정을 수행합니다. 이제 대퇴동맥 또는 대동맥궁과 그 분지들을 분리합니다. 이 과정에서 불필요한 주변 조직을 모두 제거하십시오.그 다음, 조직을 10% 중성 완충 포르말린에 담가 하룻밤 동안 고정합니다. 다음 날 조직을 70% 에탄올에 보관하거나, 여과된 1.5% LMP aeros에 동맥을 매립하여 진행합니다. 약 40°C의 용융된 aeros에 조직을 천천히 넣습니다.에어로스를 다듬어 원뿔 모양으로 만듭니다. 이제 이 표본을 100% methanol에 최소 12시간 동안 담가 탈수시킵니다. 탈수가 완료되면, benzo alcohol과 benzo benzoate를 1:2 비율로 혼합한 액체로 혈관을 투명화합니다.용기를 이 용액에서 12~24시간 동안 배양합니다. 다음 날, 미리 보정된 토모그래프에 투명화된 샘플을 로드합니다. 해상도는 1024로 설정합니다.1024 픽셀로 설정하십시오. 관심 영역의 배율을 설정합니다. Z축은 자동으로 동일한 해상도로 설정됩니다.복셀 크기는 약 200 microns가 됩니다. 다음으로, 명시야(Brightfield) 채널을 사용하여 시료가 시야 중심에서 자체 축을 중심으로 회전하도록 배치합니다. GFP 필터 방출 채널을 사용하여 초점을 맞추고, 이미지의 동적 범위를 최대화하도록 노출을 조정합니다.과포화를 피하십시오. 이제 0.9도 간격으로 GFP emission 채널 하나만 사용하여 용기를 스캔합니다. 그 후 샘플을 파라핀에 임베딩하기 전 최소 24시간 동안 100% methanol에 다시 넣어 두어야 합니다.조직학적 분석을 위해, 데이터 뷰어 소프트웨어를 사용하여 n recon 소프트웨어 또는 유사한 소프트웨어에서 획득한 이미지를 엽니다. 이미지 재구성 품질을 확인하고, 이미지 품질을 개선하며, 이미지 강도를 조정하고, 샘플이 이상적인 회전축에서 어긋난 부분을 소프트웨어를 통해 보정합니다. 각 스캔에 대해 병변을 포함하는 수직 관심 영역을 정의합니다.매 50번째 스캔 라인마다 중막과 내탄성판 위치 사이의 경계를 추적하십시오. 그 다음 소프트웨어를 통해 나머지 모든 스캔의 경계를 보간하고, 이러한 보간 결과들을 수동으로 확인하여 필요한 경우 수정하십시오. 이제 흰색 픽셀은 신내막을, 검은색 픽셀은 개통된 내강을 나타내는 이진 이미지 세트를 생성하십시오.이는 강도 임계값을 정의함으로써 수행됩니다. 이 작업이 완료되면 객체 부피는 총 병변 부피가 되며, 루멘 부피는 총 부피에서 객체 부피를 뺀 값이 됩니다. 따라서 축 방향 길이를 따른 병변과 루멘의 분포를 평가할 수 있습니다.와이어 유도 또는 결찰 유도 손상 후 28일째에 생쥐의 대퇴 동맥을 적출하였습니다. 재구성된 2차원 슬라이드의 방출 투영 영상에서 신내막 증식이 뚜렷하게 나타났습니다. 동심원 형태의 신내막 병변을 구분할 수 있었습니다.APOE 결핍 마우스의 전체 대동맥궁에 대한 광학 투영 단층 촬영 방출 영상에서 대동맥궁의 소만, 완두동맥, 그리고 좌측 경동맥 및 쇄골하동맥의 기시부에서 예상되었던 병변들이 확인되었습니다. 동일한 병변을 분할하여 빨간색으로 렌더링하였습니다. 원본 영상에 중첩되었을 때 플라크의 분포를 강조하기 위해, 횡단면 영상에서 중막과 내강을 구분함으로써 이들이 편심성 병변임을 보여주었습니다.여기에서 스캔이 이 분지들을 따라 원위부로 이동함에 따라, 병변은 쇄골하동맥에서 먼저 점차 감소하여 사라지고, 그다음 경동맥, 마지막으로 완두동맥에서 사라집니다. 흥미롭게도, 완두동맥의 이 병변은 혈관이 우경동맥과 우쇄골하동맥으로 나누어지는 혈류 분지점으로 이동합니다. OPT procedure 이후에는 병변의 성분이 무엇인지와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 조직학 및 면역조직화학 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.따라서 이 기술의 개발 이후, 혈관 연구 분야의 과학자들은 신내막 및 죽상경화성 병변의 발생 과정에서 내피 수용체, 렉틴 및 스테로이드 대사 효소의 역할을 조사할 수 있는 길을 열게 되었습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 광학 투영 단층 촬영법(optical projection tomography)을 이용하여 경동맥의 병변을 획득하고 분석하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

generation-3-dimensional-quantitation-arterial-lesions-mice-using

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

microCT으로 대비 향상된 작은 동물 혈관 이미징 시리얼에 대한 신속하고 비용 효율 높은 처리량...

MicroCT를 사용하여 대비 향상된 베셀 영상

관상 혈관의 시각화는 심장 혈관 질병의 우리의 이해를 증진하기 위해 중요합니다. 여기에서 우리는 마이크로 계산된 Tomography (μCT) 이미징을위한 준비, radiopaque 실리콘 고무 (Microfil)로 murine 관상 vasculature을 perfusing위한 방법을 설명합니다.

마이크로 계산된 Tomography 이미징을위한 준비로서 역행 관류 및 마우스 관상 Vasculature의 작성

조직화학적 및 면역조직화학적 분석과 결합된 대동맥동 및 상행 대동맥의 정밀 절단을 사용하여 마우스 모델에서 죽상경화성 병변을 정량화하고 특성화하는 절차를 설명합니다.

쥐의 대동맥 부비동의 동맥 경화 병변의 정량 분석​​ 및 특성

형광 매개 단층 촬영(FMT)과 마이크로 컴퓨터 단층 촬영(μCT)을 결합한 하이브리드 이미징 프로토콜을 설명합니다. 융합 및 재구성 후, 우리는 형광 분포의 정량적 측정을 추출하기 위해 대화형 장기 분할을 수행합니다.

하이브리드 μCT-FMT 및 촬상 화상 해석

자가 및 동종 골 이식의 주입은 주요 두개 안면 뼈 손실을 치료하는 방법을 받아 구성한다. 그러나 혈관 신생, 세포 분화 및 골 형성 간의 상호 작용에 그래프트 조성물의 효과는 불분명하다. 우리는 이식 근접에서 혈관 신생 골 형성의 상호 의존성을 규명하는 것을 목표로 멀티 모달 이미징 프로토콜을 제시한다.

컴퓨터 단층 촬영 및 골 형성 - 혈관 신생 커플 링의 광학 이미징 두개골 뼈자가 이식과 동종 이식 통합을 평가하기 위해

이 프로토콜은 대뇌 thromboemboli을 시각화 결합 된 근적외선 형광 (NIRF) 이미징 및 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (microCT)의 응용 프로그램을 설명합니다. 이 기술은 혈전 부담과 진화의 정량화 할 수 있습니다. microCT 기술은 금 나노 입자를 사용하여 살아있는 동물 내부 혈전 가시화하면서 NIRF 이미징 기술은 형광 절제 뇌 혈전 표지 가시화.

직접 대뇌 Thromboemboli 시각화를위한 결합 된 근적외선 형광 이미징 및 마이크로 계산 된 단층 촬영

여기, 선물이 혈관 형성에서 vivo에서 시각화 하는 프로토콜에 multiphoton 현미경 검사 법에 의해 3 차원 건설 기계에서 실시간. 유전자 변형된 건설 기계에서 신생 murine calvarial 중요 한 뼈 결함 모델에서 연구 했다. 더 많은 새로운 혈관 컨트롤에서 보다 처리 그룹에서 발견 했다.

Calvarial 중요 한 뼈 결함 수리 다 현미경 Vivo에서 유전자 변형 3D-PLGA/nHAp 비 계에 의해 신생 시각화

죽상 동맥 경화증의 뮤린 모형은 분자 수준에 병원성 통로를 조사하기 위하여 유용한 공구입니다, 그러나 병변 발달의 표준화한 정량화가 요구됩니다. 이 프로토콜은 대동맥 근, 대동맥 아치 및 brachiocephalic 동맥을 포함하여 주요 동맥 혈관에 있는 병변 크기를 결정하기 위하여 최적화된 방법을 기술합니다.

마우스에서 동맥 경화증의 정량화

여기서는 마이크로 엑스레이 계산단층 촬영을 사용하여 뮤린 뒷다리 혈관에 대한 시각화 및 정량화 방법을 설명합니다.

Murine 힌드사지 선박의 계산 단층 촬영 기반 3차원 시각화를 위한 샘플 준비

여기에서는 쥐 대동맥을 3차원(3D)으로 이미지화하기 위해 최적화된 조직 제거 프로토콜을 제시합니다. 우리는 면역 염색, 광학 제거 및 이미징에 대한 최첨단 절차를 설명하며, 죽상 경화성 플라크가 있는 말초 신경계의 해부학적 근접성과 죽상 경화증의 외막을 정의하기 위해 설명합니다.

죽상동맥경화증에서 대동맥 조직의 3차원 이미징

배우세요 마우스 동맥 병변의 3차원 정량 분석을 위한 광학 투영 단층촬영법을. 이 기술은 죽상경화성 및 신내막 병변을 시각화하여 심혈관 질환 메커니즘 연구에 활용됩니다.

생성 및 마우스의 동맥 병변의 3 차원 정량 광학 프로젝션 단층 촬영을 사용하여

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