비행 성능의 정확하고 빠른 측정을위한 개선 된 방법에 초파리

이 절차의 전반적인 목표는 초파리의 비행 성능을 빠르고 정확하게 측정하는 것입니다. 이것은 먼저 비행 실린더에 파리를 떨어뜨림으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 디지털 카메라로 착륙면을 이미지화하는 것입니다.

마지막 단계는 이미징 소프트웨어를 사용하여 각 파리의 착륙 높이를 측정하여 데이터를 분석하는 것입니다. 궁극적으로 이 절차는 비행 능력을 손상시키는 노화 또는 신경 퇴행과 같은 돌연변이 및 상태를 식별하고 비행 성능을 정량화하는 데 도움이 됩니다. 원래 비행 테스터와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 비행을 방해하는 돌연변이 및 기타 조건에 대한 높은 처리량 검사에 더 적합하다는 것입니다.

우리는 원래 비행 테스터를 사용하여 많은 수의 유전자형을 테스트하는 데 얼마나 많은 시간이 소요되는지 깨달았을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올렸습니다. 체인 cl을 사용하여 비행 실린더를 링 스탠드에 고정합니다.amps. 웨이 접시를 위해 실린더 아래에 약 3cm를 남겨 두십시오.

웨이 접시에 미네랄 오일을 얇게 바르고 비행 실린더 아래로 밀어 넣습니다. 깔때기를 두 번째 링 스탠드에 고정합니다. 깔때기의 바닥이 비행 실린더의 상단과 같은 높이가 되도록 깔때기의 높이를 조정합니다.

깔때기의 가장 좁은 부분은 파리 바이알보다 좁아야 합니다. 드롭 튜브의 직경은 플라이 바이알보다 약간 넓어야 바이알이 자유롭게 떨어질 수 있습니다. 드롭 튜브를 깔때기 상단에 삽입하고 클로 클램프를 사용하여 고정합니다.

다음으로 폴리 아크릴아미드 시트에서 비행 실린더의 내부 둘레보다 약간 작은 너비로 비행 실린더 길이의 직사각형 조각을 자릅니다. 시트에 탱글 트랩 접착제를 얇게 바르고 시트를 고정할 수 있도록 코팅되지 않은 상단과 하단에 충분한 공간을 남겨둡니다. 시트의 접착제가 한 시간 동안 건조된 후 접착제가 안쪽으로 향하게 하여 시트를 비행 실린더에 밀어 넣습니다.

그런 다음 소나무 지지 브래킷을 사용하여 카메라 트랙을 조립합니다. 트랙 바닥이 렌즈를 막지 않고 카메라를 지지할 수 있는지 확인하십시오. 그런 다음 플라스틱 시트에 대한 카메라의 시야를 방해하지 않는 위치에 스토퍼를 나사로 고정합니다.

바이알당 20마리 이하의 파리로 테스트할 파리의 바이알을 수집합니다. 파리를 바이알 바닥으로 부드럽게 두드립니다. 바이알의 플러그를 뽑고 드롭 튜브에 삽입합니다.

바이알을 놓습니다. 바이알이 좁아지는 깔때기의 벽에 부딪히면 비행 실린더로 분출되는 파리. 드롭 튜브를 들어 올려 빈 바이알을 제거하고 원하는 경우 더 많은 파리를 넣습니다.

10개의 바이알에서 최대 200개의 플라이를 단일 폴리 아크릴아미드 시트에서 쉽게 테스트하고 이미지화할 수 있습니다. 이제 플라스틱 시트를 제거하고 평평한 흰색 표면 흰색 포스터 보드가 벤치 탑이 어두운 색 인 경우 사용할 수 있습니다. 플라스틱 시트 위에 카메라 트랙을 조립합니다.

카메라는 시야각에서 시트의 상단과 하단을 모두 가질 수 있도록 시트보다 충분히 높아야 합니다. 캡처 버튼을 누른 상태에서 트랙을 따라 카메라를 밀어 파노라마 이미지를 획득합니다. 비행 챔버 아래의 접시에 있는 기름에 떨어지는 파리의 수는 수동으로 계산할 수 있습니다.

시행 사이의 각 시도에 대해 시트에서 파리를 제거하고 시트를 재사용할 수 있습니다. 이미지 J 소프트웨어에서 이미지 파일을 열고 필요한 경우 계단참 표면적만 포함하도록 이미지를 자릅니다. 코팅된 영역이 얽힘 트랩을 얽히게 합니다.

이미지를 8비트 그레이 스케일로 변환하고 임계값을 만듭니다. 흰색 배경을 필터링합니다. 각 플라이를 식별하기 위한 매개변수를 설정합니다.

analyze particles 메뉴를 사용하여 매개변수를 정의합니다. 시연 장치를 사용하여 입자를 식별하는 데 사용됩니다. 5-90픽셀 제곱의 영역과 0.4-1.0의 원형도는 모든 샘플을 정확하게 식별합니다.

이제 각 입자에 대해 생성된 좌표 목록을 사용하여 각 파리의 위치를 측정합니다. 픽셀 단위의 X 좌표는 센티미터로 변환할 수 있습니다. 계단참 높이를 계산하려면 테이블을 스프레드시트로 가져오고 분석을 진행합니다.

비행 결함이 있는 것으로 알려진 슬로우 포케 돌연변이 파리의 비행 성능을 야생형 캔톤 파리와 비교했습니다. 모든 파리는 생후 3일이었고, 실온 조절에서 자란 파리는 실린더 상단 근처에 지속적으로 착륙했습니다. 착륙의 확산은 느린 찌르기 돌연변이에게 훨씬 더 컸습니다.

73cm의 캔톤의 평균 착륙 높이는 44cm의 슬로우 포크 돌연변이보다 훨씬 컸습니다. 이 절차에 따라 조직학과 같은 추가 방법을 사용하여 비행 근육, 운동 뉴런 또는 신경근 접합부의 구조적 무결성에 관한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 oph에서 비행 성능을 신속하게 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.