Name: 비행 성능의 정확하고 빠른 측정을위한 개선 된 방법에 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-13T13:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: 학습하세요 초파리 비행 성능을 정확하고 빠르게 측정하는 고효율 스크리닝 방법을 Drosophila를 이용하여. 이 기술은 돌연변이 및 노화, 신경퇴행성 질환을 식별하는 데 도움을 줍니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 건강의 국립 연구소에 의해 지원되었다 F32 NS078958 (DTB) 및 R01 AG033620 (BG)을 부여합니다.

1. 비행 검사자 조립 <ol><li> 링에 탑승 보안 실린더 체인 클램프를 사용하여 1 대. (접시의 무게를위한 실린더 아래 3cm 정도 둡니다.) (참고 : 우리가 사용하는 항공 실린더는 13.5 cm의 직경 90 ㎝ 길이입니다.) </li><li> 비행 실린더 아래에 미네랄 오일의 얇은 층으로 접시의 무게를 삽입합니다. </li><li> 링에 대한 보안 깔때기 링 클램프와 발톱 클램프를 사용하여 2 대. 깔때기의 바닥 비행 실린더의 윗부분과 같이되도록 깔때기의 높이를 조정합니다. (주 : 깔때기의 선단 직경이 바이알을 통해 떨어지지 않도록 드롭 튜브에 넣고, 튜브의 외경보다 작아야한다.) </li><li> 깔때기의 상단에 드롭 튜브를 삽입하고 발톱 클램프를 사용하여 고정합니다. (참고 : 우리는 25cm 길이의 드롭 튜브를 사용하여 떨어지는 비행 함유 균일 한 힘으로 모든 파리의 일관된 배출 허용이 높이에서 튜브를 드롭 튜브의 내부 직경이 sligh해야한다..바이알 자유롭게 떨어질 수 있도록 병의 외경보다 큰 TLY.) </li><li> 적절한 크기로 폴리 아크릴 시트 (들)을 잘라. (주 : 삽입 시트를 제거 돕기 위해, 폭은 단기 실린더의 내주보다 약간 작아야한다.) </li><li> 시트에 엉 키게 함정의 얇은 층을 적용합니다. 사용하기 전에 1 시간 동안 앉아 수 있습니다. (참고 : 시트의 상단과 하단 삽입 / 제거를 위해 시트를 파악하기 위해 코팅 (약 3cm)에 충분한 공간을 둡니다.) </li><li> 비행 실린더의 폴리 아크릴 아미드 시트를 삽입합니다. </li><li> 소나무지지 브래킷을 사용하여 카메라 트랙을 조립한다. (참고 : 트랙의 바닥이 렌즈를 차단하지 않고 카메라를 지원할 수 있도록 그림 1B를 참조하십시오.). </li><li> 스토퍼를 추가하고 제자리에 나사. (참고 : 장소 카메라가 파노라마 모드에서 전체 플라스틱 시트를 볼 수 있도록 위치에 스토퍼를.) </li></ol> 2. 실험을 실행 <ol> &lt;리&gt; 테스트 할 파리의 병을 수집합니다. 최상의 결과를 위해, 더 이상의 20 파리 / 유리 병을 사용합니다. </li><li> 부드럽게 유리 병의 바닥에 파리를 살짝 뺀 다음 드롭 튜브에 넣고 유리 병을 놓습니다. (참고 :이 좁은 깔때기 구멍을 돌 때까지 유리 병 드롭 튜브를 아래로 떨어지는 병이 깔때기를 돌 때, 파리가 비행 실린더에 분사된다..) </li><li> 빈 유리 병을 제거하는 드롭 튜브를 들어 올립니다. (참고 : 동일한 테스트 그룹의 파리의 여러 병이 하나의 폴리 아크릴 아미드 시트에 정량 할 수있는 우리는 최대 200 파리 (20 파리 각 10 병)가 한 장에 테스트하고 쉽게 이미지가 될 수 있다는 것을 찾을 수 있습니다.. </li><li> 플라스틱 시트를 제거하고 평평한 흰색 표면에 놓습니다. (주 : 벤치 탑은 어두운 색의 경우 흰색 포스터 보드를 사용할 수있다.) </li><li> 플라스틱 시트 위에 카메라 트랙을 조립합니다. 카메라의 시야에있는 시트의 상하 양쪽을받는 시트 위에서 충분히 높아야한다. </li><li> 일을 따라 카메라를 밀어E 트랙 파노라마 이미지를 얻기 위해 &quot;캡처&quot;버튼을 누른 상태. </li><li> 기름에 착륙 비행의 수는 각 시험에 대해 수동으로 계산 될 수있다. </li><li> 반복은 주어진 실험의 모든 조건을 2.2-2.7 단계를 반복합니다. 파리는 각 시험 사이의 시트에서 제거 할 수 있습니다. 대안 적으로, 여러 장의 각 시험 삼아 새로운 시트로 사용될 수있다. </li></ol> 3. 데이터 수집 <ol><li> ImageJ에 소프트웨어를 사용하여 열려있는 이미지 파일. </li><li> 이미지 자르기 만 착지 면적을 포함하는 데 필요한 경우. (이 엉 키게 함정에 코팅 된 영역입니다.) </li><li> 8 비트 그레이 스케일 이미지를 변환합니다. </li><li> 흰색 배경을 필터링 &quot;임계 값&quot;을 만듭니다. (이미지 → → 임계 값을 조정합니다.) </li><li> &quot;입자를 분석&quot;메뉴를 사용하여 각 비행을 식별하는 매개 변수를 설정합니다. 입자를 식별하는 데 사용되는 매개 변수를 정의 (입자 분석 → 분석). 우리는 설정으로, 우리는 발견이를 사용하여5-90 픽셀 2, 0.4 ~ 1.0의 원형의 영역을 정확하게 모든 샘플을 식별합니다. </li><li> 각 입자에 대한 좌표의 생성 된 목록을 사용하여 각 비행의 위치를​​ 측정한다. 픽셀 X 좌표 착지 높이를 계산하기 위해 센티미터로 전환시킬 수있다. </li><li> (Microsoft Excel과 같은) 스프레드 시트로 테이블을 가져옵니다. </li></ol>

<ol><li>Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Am%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of behavior.</a> Sci. Am. 229, 24-37 (1973).</li>
<li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor%2C+learning%2C+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J. Vis. Exp. , e2504(2011).</li>
<li>de Vries, S. E., Clandinin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetic+Stimulation+of+Escape+Behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , e50192(2013).</li>
<li>Mundiyanapurath, S., Certel, S., Kravitz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+aggression+in+Drosophila+%28fruit+flies%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Studying aggression in Drosophila (fruit flies).</a> J. Vis. Exp. , e155(2007).</li>
<li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+assay+Drosophila+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J. Vis. Exp. , e3795(2012).</li>
<li>Shiraiwa, T., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proboscis+extension+response+%28PER%29+assay+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Proboscis extension response (PER) assay in Drosophila.</a> J. Vis. Exp. , e193(2007).</li>
<li>Lloyd, T. E., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flightless+flies%3A+Drosophila+models+of+neuromuscular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Flightless flies: Drosophila models of neuromuscular disease.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1184, e1-e20 (2010).</li>
<li>Atkinson, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+separation+of+two+behavioral+phenotypes+by+a+mutation+affecting+the+promoters+of+a+Ca-activated+K+channel%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular separation of two behavioral phenotypes by a mutation affecting the promoters of a Ca-activated K channel.</a> J. Neurosci. 20, 2988-2993 (2000).</li>
<li>Atkinson, N. S., Robertson, G. A., Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+component+of+calcium-activated+potassium+channels+encoded+by+the+Drosophila+slo+locus%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A component of calcium-activated potassium channels encoded by the Drosophila slo locus.</a> Science. 253, 551-555 (1991).</li>
<li>Elkins, T., Ganetzky, B., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+mutation+that+eliminates+a+calcium-dependent+potassium+current%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A Drosophila mutation that eliminates a calcium-dependent potassium current.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 8415-8419 (1986).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp. Gerontol. 40, 386-395 (2005).</li>
<li>Fry, S. N., Rohrseitz, N., Straw, A. D., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+control+of+flight+speed+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual control of flight speed in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 212, 1120-1130 (2009).</li>
<li>Mronz, M., Lehmann, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+free-flight+response+of+Drosophila+to+motion+of+the+visual+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The free-flight response of Drosophila to motion of the visual environment.</a> J. Exp. Biol. 211, 2026-2045 (2008).</li>
</ol>

저자는 공개 할 관심의 충돌이 없습니다.

여기에 기술 된 방법을 사용하여, 우리는 가능한 빠르게 이전보다 더 큰 효율성을 제공 초파리 돌연변이 다수의 비행 성능을 평가할 수 있었다. 우리의 실험을 위해, 우리는 일상적으로 남성과 여성을 분리하고 날개에 손상을 줄 수 침략을 제한하는 낮은 밀도 (20 명 미만 파리 / 유리 병)에 그들을 올립니다. 또 다른 중요한 고려 사항은 유전 적 배경의 차이로 인해 비행 성능의 차이를 적절하게 제어하는​​ 것입니다. 우리는 또한 이전에 시험 비행에 이산화탄소 마취에서 회복하기 위해 비행 24 시간의 최소 수 있도록하는 데 도움이 찾을 수 있습니다. 또한, 파리는 잠재적 특성에 큰 영향을 미치지 않으면 서 더 빠르게 복구 할 수 추운 온도 (11 ° C)에 노출 마취 할 수있다. 이 프로토콜의 속도 제한 단계는 시험의 플라스틱 시트에서 파리를 제거하고 있습니다. 효율을 높일 수있는 한 방법은 다수의 O를 사용하는 것이다동시에 F 시트, 옆으로 그 사용으로 시트를 설...

초파리는 오랜 동작 하나의 유전 적 기초를 연구하는 데 사용되었으며, 연구자 동작 2-6의 각종 유형을 분석 할 수있는 여러 가지 방법을 고안했다. 파리는 신경 근육 질환 (7)의 유용한 모델을 제공하는 유용하고있다. 전위의 행동을 연구하는 데 사용되는 일반적인 분석은 비행 성능입니다. 원래 비행 시험기 비행 결함이있는 돌연변이 체를 식별하기위한 비행 능력 (1)의 정량적 평가에 유용하지만, 높은 처리량 화면에 대한 응용 프로그램을 제한하는 몇 가지 단점이 있습니다 : 오일 코팅 실린더의 사용은 지저분하고 복잡와 같은 특정 기능을 가변 힘으로 튜브에 실린더와 파리의 도입의 길이는 양적 정확성을 감소하고, 그것이 테스터의 라이브 파리를 복구하는 것은 어렵다. 이러한 한계를 극복하기 위해, 우리는 개선의 번호를 포함하는 비행 시험기를 수정했습니다. 우리는 &quot;드롭 TU 추가우리는 쉽게 정리 및 개별 파리의 복구를 위해 수있는 접착제로 코팅 된 이동식 아크릴 시트를 사용하여 실험과 사용자 간의 가변성을 제거하기 위해 파리를 소개하는 &quot;수.. 우리는 양적 정확성과 신뢰성을 개선하기 위해 비행 튜브의 길이를 증가하고있다. 마지막으로 우리는 디지털 카메라와 파리의 방문 높이를 계산하는 이미징 소프트웨어를 사용합니다. 우리는 이러한 개선은 비행 성능에 결함이 대규모 유전 화면을 수행에 관심있는 모든 실험실에 유용 할 것으로 판단된다.

<table><tbody><tr><td>퍼티 나이프</td><td>Home Depot</td><td>630147</td><td><a href="http://www.homedepot.com">www.homedepot.com</a></td></tr><tr><td>Pine back band moulding (2x)</td><td>Home Depot</td><td></td> <td>156469<a href="http://www.homedepot.com">www.homedepot.com</a></td></tr><tr><td>Furring Strip Board</td><td>Home Depot</td><td>164704</td><td><a href="http://www.homedepot.com"> www.homedepot.com</a></td></tr><tr><td>탱글트랩 곤충 트랩 코팅</td><td>BioControl 네트워크</td><td>268941</td><td><a href="http://www.biconet.com">www.biconet.com</a></td></tr><tr><td>노트북 컴퓨터&nbsp;</td><td>사과</td><td></td><td><a href="http://www.apple.com/mac/">www.apple.com/mac/</a></td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP26291</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>흰색 포스터 보드</td><td>스테이플</td><td>247403</td><td><a href="http://www.staples.com">www.staples.com</a></td></tr><tr><td>폴리스티렌 계량 접시</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>S67091A</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td>National Institutes of Health</td><td></td><td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a></td></tr><tr><td>디지털 카메라</td><td>Sony</td><td>DSC-TX7</td><td><a href="http://www.store.sony.com">www.store.sony.com</a> </td></tr><tr><td>파인</td><td>사이언스 도구</td><td></td><td><a href="http://www.finescience.com">www.finescience.com</a></td></tr><tr><td>폴리카보네이트 실린더 (드롭 튜브)</td><td>McMaster-Carr</td><td>8585K62</td><td><a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td></tr><tr><td>비행 실린더 (아크릴)</td><td>McMaster-Carr</td><td>8486K943</td><td><a href="http:// www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td></tr><tr><td>폴리카보네이트 시트</td><td>McMaster-Carr</td><td>85585K25</td><td><a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com</a></td></tr><tr><td>링 스탠드 (2x)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S47808</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>링 지원</td><td>Fisher Scientific</td><td>S47791</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>세 갈래 확장 클램프 (x2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-769-7Q</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>Funnel</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-3</td><td><a href="http://www.fishersci.com">www.fishersci.com</a></td></tr><tr><td>체인 클램프 (2x)</td><td>VWR</td><td>21573-275</td><td><a href="http://www.vwr.com">www.vwr.com</a></td></tr><tr><td>유리 바이알</td><td>VWR</td><td>66020-198</td><td><a href="http://www.vwr.com/">www.vwr.com</a></td></tr></tbody></table>

비행 성능의 정확하고 빠른 측정을위한 개선 된 방법에<em&gt; 초파리</em

An Improved Method for Accurate and Rapid Measurement of Flight Performance in Drosophila

초파리의 비행 등의 행동 분석을위한 유용한 모델 시스템으로 입증되었습니다. 초기 비행 시험기 관련 낙하는에 날아 오일 코팅 실린더를 졸업, 착륙 높이 실린더의 벽과 접촉 충분한 추진력을 제작하기 전에 지금까지 파리 가을 방법을 평가하여 비행 성능의 측정 기준을 제공했다. 여기에서 우리는 네 개의 주요 개선 비행 시험기의 업데이트 된 버전을 설명합니다. 첫째, 우리는 파리가 사용자들 사이 변동성을 제거 시험과 비슷한 속도로 비행 실린더를 입력 할 수 있도록 &quot;드롭 튜브&quot;를 추가했다. 둘째, 우리는 엉 키게 트랩, 라이브 곤충을 포착하기 위해 설계된 접착제 코팅 이동식 플라스틱 시트에 오일 코팅을 대체했다. 셋째, 우리는 비행 능력을보다 정확하게 식별 할 수 있도록 더 긴 실린더를 사용합니다. 넷째 우리는 비행 성능의 점수를 자동화하는 디지털 카메라와 이미징 소프트웨어를 사용합니다. 이러한 개선은 랩을 허용ID, 비행 행동의 양적 평가, 대규모 데이터 세트와 대규모 유전 화면에 유용합니다.

<html> 그림 1A는 업데이트 된 비행 시험기 어셈블리의 개략도를 보여줍니다. 그림 1B 트랙 디자인은 카메라의 시야를 차단하지 않고 파노라마 이미지를 촬영 할 수 있습니다 보여줍니다. 대표 결과 결함 8-10 알려진 비행이 굼벵이 돌연변이 체의 비행 성능, 야생 형 캔톤-S는 파리에 비교 그림 2에 나타내었다. 제어는 지속적으로 개인 간의 약간의 확산 및 73 ± 2.0 cm의 평균 방문 높이, 실린더의 상단에 착륙 비행. 반면, 굼벵이 파리는 44 ± 4.1 cm의 평균을 훨씬 더 다양한 착륙 확산, 그리고 매우 낮은 토지를 표시합니다. 모든 파리는 3 일 이전을 실온 (23 ℃)에 올렸다. s/ftp_upload/51223/51223fig1.jpg...

여기에서 우리는 높은 처리량 검사를 가능하게 초파리의 비행 성능의 신속하고 정확한 측정하는 방법을 설명합니다.

Drosophila has proven to be a useful model system for analysis of behavior, including flight. The initial flight tester involved dropping flies into an ...

이 절차의 전반적인 목표는 Drosophila의 비행 성능을 신속하고 정확하게 측정하는 것입니다. 이는 먼저 파리를 비행 실린더(flight cylinder) 안으로 떨어뜨려 수행합니다. 이 절차의 두 번째 단계는 디지털 카메라로 착륙 표면을 촬영하는 것입니다.마지막 단계는 이미징 소프트웨어를 사용하여 각 초파리의 착륙 높이를 측정함으로써 데이터를 분석하는 것입니다. 궁극적으로, 이 절차는 비행 능력을 저하시키는 돌연변이와 노화 또는 신경퇴행과 같은 상태를 식별하고 비행 성능을 정량화하는 데 도움이 됩니다. 기존의 비행 테스트 장치와 같은 방법들에 비해 이 기술이 갖는 주요 장점은, 비행 능력을 저하시키는 돌연변이 및 기타 상태에 대한 고처리량 스크리닝에 더 적합하다는 점입니다.우리는 기존의 비행 테스트 장치를 사용하여 수많은 유전자형을 테스트하는 데 얼마나 많은 시간이 소요되는지 깨달았을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 얻었습니다. 체인 클램프를 사용하여 비행 실린더를 링 스탠드에 고정하십시오. 웨이 디시(way dish)를 놓기 위해 실린더 아래에 약 3cm의 공간을 남겨두십시오.웨이 디쉬(way dish)에 미네랄 오일을 얇게 도포한 후 플라이트 실린더(flight cylinder) 아래에 밀어 넣습니다. 깔때기를 두 번째 링 스탠드에 고정합니다. 깔때기의 바닥면이 플라이트 실린더의 상단과 일치하도록 깔때기의 높이를 조절합니다.깔때기의 가장 좁은 부분은 초파리 병보다 좁아야 합니다. 드롭 튜브의 직경은 초파리 병보다 약간 더 넓어야 병이 자유롭게 떨어질 수 있습니다. 드롭 튜브를 깔때기 상단에 삽입하고 클로 램프를 사용하여 고정하십시오.다음으로 폴리아크릴아마이드 시트에서 비행 실린더의 길이와 같고 너비는 비행 실린더의 내부 둘레보다 약간 작은 직사각형 조각을 자릅니다. 시트의 상단과 하단에 시트를 잡을 수 있는 충분한 여백을 남겨두고 tangle trap 접착제를 얇게 도포합니다. 시트 위의 접착제가 1시간 동안 건조되면, 접착면이 안쪽으로 향하게 하여 시트를 비행 실린더 안으로 밀어 넣습니다.다음으로, 소나무 지지 브래킷을 사용하여 카메라 트랙을 조립하십시오. 트랙 하단이 렌즈를 가리지 않으면서 카메라를 지지할 수 있는지 확인하십시오. 그런 다음 카메라가 플라스틱 시트를 보는 시야를 방해하지 않는 위치에 스토퍼를 나사로 고정하십시오.바이알당 20마리 이하의 초파리를 수집하십시오. 초파리가 바이알 바닥으로 내려가도록 가볍게 두드립니다. 바이알의 마개를 뽑고 드롭 튜브에 삽입하십시오.바이알을 놓습니다. 바이알이 좁아지는 깔때기의 벽면에 닿으면, 파리들이 비행 실린더 안으로 배출됩니다. 드롭 튜브를 들어 올려 빈 바이알을 제거하고, 필요한 경우 더 많은 파리를 투입합니다.10개의 바이알에서 옮겨진 최대 200마리의 초파리를 단일 폴리아크릴아마이드 시트 위에서 손쉽게 테스트하고 이미징할 수 있습니다. 이제 플라스틱 시트를 제거하여 평평한 흰색 표면 위에 놓으십시오. 벤치탑 색상이 어두운 경우에는 흰색 포스터 보드를 사용할 수 있습니다. 플라스틱 시트 위에 카메라 트랙을 조립하십시오.카메라는 시트의 상단과 하단이 모두 시야에 들어올 수 있도록 시트보다 충분히 높게 위치해야 합니다. 캡처 버튼을 누른 상태에서 카메라를 트랙을 따라 슬라이드하여 파노라마 이미지를 획득하십시오. 비행 챔버 아래 접시의 오일에 착지한 파리의 수는 수동으로 측정할 수 있습니다.각 실험 회차 사이에 파리들을 시트에서 제거한 후 시트를 재사용할 수 있습니다. Image J 소프트웨어에서 이미지 파일을 열고, 필요한 경우 착륙 표면 영역과 entangle trap이 코팅된 영역만 포함되도록 이미지를 크롭하십시오.이미지를 8비트 그레이스케일로 변환하고 임계값을 설정합니다. 이는 흰색 배경을 제거하기 위함입니다. 각 초파리를 식별할 수 있도록 파라미터를 설정하십시오.입자 분석(analyze particles) 메뉴를 사용하여 파라미터를 정의합니다. 이는 시연 장치를 사용하여 입자를 식별하는 데 사용됩니다. 면적을 5~90 pixels squared로, 원형도(circularity)를 0.4~1.0으로 설정하면 모든 샘플을 정확하게 식별할 수 있습니다.이제 각 입자에 대해 생성된 좌표 목록을 사용하여 각 초파리의 위치를 측정하십시오. 픽셀 단위의 X 좌표는 센티미터로 변환할 수 있습니다. 착륙 높이를 계산하려면 표를 스프레드시트로 가져와 분석을 진행하십시오.비행 결함이 있는 것으로 알려진 slow poke 돌연변이 초파리의 비행 성능을 야생형 canton s 초파리와 비교하였습니다. 모든 초파리는 3일 된 개체로 실온에서 사육되었습니다. 대조군 초파리들은 일관되게 실린더 상단 부근에 착륙한 반면, slow poke 돌연변이들의 착륙 범위는 훨씬 더 넓게 나타났습니다.73cm인 야생형(cantons)의 평균 착지 높이는 44cm인 slow poke 돌연변이보다 유의미하게 더 높았습니다. 이 절차 이후에 조직학적 분석과 같은 추가 방법을 사용하여 비행 근육, 운동 뉴런 또는 신경근 접합부의 구조적 무결성에 관한 추가적인 질문에 답할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후, 여러분은 oph에서 비행 성능을 신속하게 평가하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

an-improved-method-for-accurate-rapid-measurement-flight-performance

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

에서 복잡한 운전하는 동작의...

성인 Drosophila Melanogaster의 로코의 고해상도 비디오 추적

Drosophila melanogaster은 한 세기 이상에서 많은 중요한 생물 학적 과정의 분자 및 세포 기초를 이해하기 위해 사용되었습니다 유전자와 behaviorally 다루기 쉬운 모델 시스템이다. Drosophila 잘 플라이 행동의 유전적 기초에 대한 통찰력을 얻기 위해 악용되었습니다.

분석의 방법 Drosophila 행동

이 비디오는 운동 활동을 추적하는 데 사용되는 초파리 활동 모니터(DAM) 시스템에 대해 설명합니다. 연구원들은 DAM에서 수집한 활동 데이터를 사용하여 초파리의 일주기 리듬을 연구합니다. 주요 프로토콜 클립은 장치에 파리를 로드하고 일주기 실험을 위한 활동 데이터를 기록하는 방법을 보여줍니다.

초파리 Activity Monitor (DAM): 파리의 운동 활동을 측정하는 방법

초파리 melanogaster의는 자발적인 운동 활성 등의 행동에 영향을 미치는 유전 적 또는 환경 적 조작을 공부에 유용하다. 여기에서 우리는 적외선 빔과 자발적인 운동 활성을 정량화하는 데이터 분석 소프트웨어와 함께 모니터를 활용하는 프로토콜을 설명합니다.

의 자발적인 운동 활성의 결정<em&gt; 초파리</em

무료로 제공하고 저렴 소프트웨어 프로그램의 웹캠과 조합하여, 초파리 melanogaster의 기관차 패턴은 속도, 거리, 다양한 모터 활동의 시간의 차이를 검출하기 위해 분석 될 수있다.

발작과 같은 활동을 분석하고 운동을위한 저가의 방법<em&gt; 초파리</em

대사 질환은 인간에서 가장 흔한 질병 중 하나들이다. 유 전적으로 다루기 쉬운 모델 생물 D. melanogaster의 대사를 조절하는 신규 한 유전자를 확인하는데 사용될 수있다. 이 논문은 자신의 CO 2 생산을 측정하여 파리의 신진 대사 속도를 연구 할 수있는 비교적 간단한 방법을 설명합니다.

대사율의 측정에<em&gt; 초파리</em&gt; Respirometry를 사용하여

이 보고서는 TriKinetics Drosophila Activity Monitor를 사용하여 초파리 유충 활동을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 장치는 적외선 빔을 사용하여 최대 16 마리의 개별 동물의 움직임을 감지합니다. 데이터를 분석하여 분석 챔버 내 동물의 비율 및 위치를 포함한 모션 매개변수를 나타낼 수 있습니다.

에서 애벌레 활동의 측정<em&gt; 초파리</em&gt; 활동 모니터

이 단계별 프로토콜 파리의 수백을 접대 하 고 전기 모터에 의해 그들의 행동을 동기화 하는 자동화 된 멀티 실린더 시스템을 사용 하 여 초파리 부정적인 geotaxis 동작을 분석 합니다. 동기화 시 디지털 기록 및 자체 디자인된 RflyDetection 소프트웨어를 사용 하 여 분석 된 비행 부정적인 geotaxis 동작 분석입니다.

Neurodegeneration의 초파리 모델에서 성인 등반 동작을 분석 하기 위한 자동화 된 신속한 반복 부정적인 Geotaxis 분석 결과

여기 우리는 자동으로 시간과 공간에 신속 하 고 정확한 온도 변화를 생성 하는 프로그래밍 가능 온도 제어 경기장을 사용 하 여 온도 변화에 초파리 의 운동 성능을 결정 하는 프로토콜을 제시.

시간과 공간에서 온도 변화에 대 한 응답에서 초파리 의 성능을 결정 하는 자동화 된 방법

Drosophila에 있는 알콜 감도를 측정하는 현재 방법은 파리의 단을 시험하기 위하여 디자인됩니다. 우리는 단일 파리의 큰 숫자에 알코올 감산 도성을 평가하기위한 간단한, 저렴한 비용, 높은 처리량 분석을 제시한다. 이 방법은 특수 공구를 필요로하지 않으며 일반적인 재료를 사용하여 모든 실험실에서 수행 할 수 있습니다.

개별 초파리 멜라노가스터의 알코올 침전 시간을 측정하기위한 높은 처리량 방법

현재 프로토콜은 속도, 거리 등의 매개변수를 계산하기 위해 고화질 비디오 녹화를 기반으로 각 프레임의 픽셀을 분할하는 플러그인과 호환되는 오픈 소스 소프트웨어 피지를 사용하여 손으로 만든 경기장에서 파리의 움직임을 추적 및 분석하여 초파리 의 운동 활동을 평가합니다.

초파리에서 운동 활동을 분석하는 간단한 기술

학습하세요 초파리 비행 성능을 정확하고 빠르게 측정하는 고효율 스크리닝 방법을 Drosophila를 이용하여. 이 기술은 돌연변이 및 노화, 신경퇴행성 질환을 식별하는 데 도움을 줍니다.

비행 성능의 정확하고 빠른 측정을위한 개선 된 방법에

더 많은 동영상 탐색