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DOI: 10.3791/51276-v
Marijn Schouten*1, Giulia M. R. De Luca*2, Diana K. Alatriste González1, Babette E. de Jong2, Wendy Timmermans1, Hui Xiong1, Harm Krugers1, Erik M. M. Manders2, Carlos P. Fitzsimons1
1Center for Neuroscience, Swammerdam Institute for Life Sciences,University of Amsterdam, 2Van Leeuwenhoek Centre for Advanced Microscopy, Section Molecular Cytology, Swammerdam Institute for Life Sciences,University of Amsterdam
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article describes a protocol for imaging dendritic spines from hippocampal neurons using Structured Illumination Microscopy (SIM). This super-resolution technique allows for detailed visualization of individual dendritic spines, surpassing the limitations of conventional microscopy.
이 문서는 구조적 조명 현미경 (SIM)을 사용하여 체외에서 해마 신경 세포에서 이미지 돌기 쪽을 작동 프로토콜을 설명합니다. SIM을 사용하여 초 고해상도 현미경 개선 된 세부 사항과 함께 개별 돌기 쪽의 영상을 허용, 크게 세 가지 차원 공간에서 빛의 회절 한계를 넘어 이미지 해상도를 제공합니다.
이 절차의 전반적인 목표는 수지상 가시를 초고해상도로 이미지화하는 것입니다. 이것은 먼저 쥐의 1차 해마를 준비하여 수행되며, 두 번째 단계는 GFP 형질 주입 및 염색을 통해 수지상 가시를 시각화하는 것입니다. 다음으로, GFP 표지된 수지상 가시의 획득은 SIM 현미경을 사용하여 초고해상도로 수행됩니다.
마지막 단계는 후속 이미지 분석을 위해 원시 이미지 데이터를 3D로 재구성하는 것입니다. 궁극적으로, 초고해상도로 이미지화된 1차 해마 뉴런을 발현하는 GFP는 수지상 척추 형태학의 미묘한 변화를 보여주는 데 사용됩니다. 기존 컨포칼 현미경 검사와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 수지상 척추 형태를 더 자세히 연구할 수 있다는 것입니다.
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