Highly Efficient Ligation of Small RNA Molecules for MicroRNA Quantitation by High-Throughput Sequencing

Jerome E. Lee; Rui Yi

doi:10.3791/52095

높은 처리량 시퀀싱에 의한 마이크로 RNA 정량을위한 작은 RNA 분자의 고효율 내고

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Biology

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Highly Efficient Ligation of Small RNA Molecules for MicroRNA Quantitation by High-Throughput Sequencing

높은 처리량 시퀀싱에 의한 마이크로 RNA 정량을위한 작은 RNA 분자의 고효율 내고

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14:15 min

November 18, 2014

DOI: 10.3791/52095-v

Jerome E. Lee¹, Rui Yi^1,2

¹Molecular, Cellular, and Developmental Biology,University of Colorado, Boulder, ²Linda Crnic Institute for Down Syndrome,University of Colorado, Denver

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

MicroRNA(miRNA)는 널리 보존된 조절 분자 부류입니다. 여기에서는 두 가지 강력한 ligation 단계와 high-throughput sequencing에 의존하는 miRNA 클로닝 방법에 대해 설명합니다. 당사의 방법은 miRNA의 정확한 게놈 전체 정량을 가능하게 합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 고처리량 염기서열분석을 위해 microRNA를 편향되지 않게 준비하는 것입니다. 이는 먼저 마이크로 RNA의 3 프라임 말단에 대한 결찰에 적합한 DNA 올리고뉴클레오티드를 준비하거나 구매함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 3 프라임 DNA 올리고뉴클레오티드를 마이크로 RNA의 3 프라임 말단에 접합하는 것입니다.

다음으로, 결찰 산물을 겔 정제하고 5 프라임 RNA 올리고뉴클레오티드 링커를 마이크로 RNA의 5 프라임 말단에 결찰합니다. 마지막 단계는 하이브리드 분자를 CDNA로 전환한 다음 중합효소 연쇄 반응에 의해 CDNA를 증폭하는 것입니다. 궁극적으로, 마이크로 RNA 클로닝과 고처리량 염기서열분석은 개별 뉴클레오티드 분해능에서 정량적 방식으로 microRNA의 전사체 폭넓은 프로파일을 보여주는 데 사용됩니다.

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