올바른 조직에게 멀티 조직 블록마다 자리

이 절차의 전반적인 목표는 다중 조직 파라핀 블록에서 조직 식별을 돕는 도구를 구성하는 것입니다. 이는 먼저 HistoGel과 조직 표시 염료를 결합하여 밝은 색상의 젤 플러그를 형성함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 표준 조직 처리 및 포매 기술에 따라 유색 HistoGel 플러그를 처리하고 내장하는 것입니다.

다음으로, 생검 펀치를 사용하여 작은 실린더를 제거합니다. 이들은 시편 방향 태그 또는 스폿입니다. 마지막 단계는 반점의 위치와 각 샘플이 쉽게 참조할 수 있도록 주의 깊게 문서화된 다중 조직 블록에 반점을 삽입하는 것입니다.

궁극적으로, 이 지점은 조직 마이크로어레이 및 다중 조직 블록에서 표본 방향 및 식별을 위한 명확한 시각적 단서를 제공합니다. 봉합사 또는 비대칭 코어와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 스폿이 조직을 변경하지 않고 최적의 분석을 위해 샘플을 유연하게 배열할 수 있다는 것입니다. 이 방법에 대한 아이디어는 비용을 절감하고 분석을 단순화하기 위해 여러 동물의 조직 표본을 단일 파라핀 블록으로 결합해 달라는 연구자의 요청을 받았을 때 처음 떠올랐습니다: 반점을 준비하기 위해 15ml 원뿔형 튜브에 있는 1ml의 조직 표시 염료에 50mg의 생화학 등급 BSA를 추가하는 것으로 시작합니다.

혼합물이 완전히 용해될 때까지 최소 1분 동안 혼합물을 소용돌이치십시오. 다음으로 9ml의 하이드록시에틸 아로스 가공 젤을 15ml 원뿔형 튜브에 넣고 전자레인지에서 30% 전력으로 가열합니다. 젤이 완전히 녹을 때까지 10초 단위로 열을 가합니다.

이제 용융된 가공 젤과 염료 BSA 용액을 단일 15ml 원뿔형 튜브에 결합하고 피펫으로 완전히 혼합합니다. 그런 다음 용액을 와류로 만들고 몇 시간 동안 냉장고에 옮겨 굳힙니다. 굳어지면 좁은 주걱으로 부드럽게 풀어 젤의 고체 팽창 물을 제거합니다.

플러그를 5mm 두께로 자릅니다. 둥근 끝을 사용하지 마십시오. 3-6 개의 섹션을 조직학 카세트로 옮기고 70 % 에탄올에 담그고, 2-4 시간마다 70 % 에탄올 용액을 교체하고, 플러그가 완전히 탈수 될 때까지 24 시간 동안 최소 3 번 교체하십시오.

그들은 마킹 염료의 일부를 에탄올 용액에 침출시킬 것입니다. 처음에 새 에탄올을 변경하면 과도한 염료의 일부를 씻어내는 데 도움이 되어 색이 침출될 가능성이 적은 더 깨끗한 플러그를 만들 수 있습니다. 다음으로, 카세트를 80 % 에탄올로 옮긴 다음 각 수조에서 1 시간 동안 95 % 에탄올로 옮깁니다.

염료는 젤 플러그에서 누출될 수 있으며, 이는 다른 조직과 자동 조직 처리기의 액체 시약에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 수동 탈수를 적극 권장합니다. 그러나 자동화된 처리도 똑같이 효과적입니다.

100% 에탄올을 각각 한 시간씩 세 번 세척하여 탈수를 완료합니다. 각 수조에서 1시간 동안 atic hydrocarbon 또는 xylenes에 세 번 담가 샘플을 세척합니다. 이제 1 시간 욕조 3 개로 섹션에 침투하십시오.

용융 파라핀에. 평소와 같이 처리된 섹션을 삽입하고 블록이 실온에 있을 때 피부 펀치 바늘을 사용하여 스폿 코어를 만듭니다. 하나의 블록으로 22mm 코어 또는 1.5mm 코어 이상을 만들 수 있습니다.

함께 삽입될 모든 개별 조직 조각의 원하는 위치와 정체성, 그리고 지점의 위치를 나타내는 다이어그램을 만드는 것으로 시작합니다. 손에 싣고 다닐 수 있도록 사본을 준비한다. 표본 방향 태그를 성공적으로 사용하려면 모든 생물 표본, 위치 및 지점에 대한 상대적인 위치를 정확하게 자세히 설명하는 명확하고 따라하기 쉬운 생체 표본 지도가 필요합니다.

조직 조각을 처리한 후 임베딩 스테이션에 배치합니다. 조직 배향 다이어그램에 따르면 올바른 배향은 절대적으로 중요합니다. 또한 스폿 코어가 블록에 내장될 모든 조직 조각보다 더 높아야 합니다.

조직 배열을 완료한 후 반점을 삽입합니다. 파라핀이 굳어서 쓰러지지 않을 때까지 집게로 각 지점을 똑바로 잡습니다. 1-2분 정도면 충분합니다.

수동 TMA 키트의 경우 TMA 몰드에 녹은 파라핀을 채웁니다. 금형이 냉각되면 어레이 여백에 비슷한 방식으로 반점을 부착합니다. 이제 반점으로 섹션을 절단하고 염색하십시오.

표준 접근 방식을 사용하여 여기에서 5미크론 단면이 만들어집니다. 슬라이드에 섹션을 넣으려면 섭씨 40도의 수조에 띄운 다음 양전하를 띤 유리 슬라이드로 옮깁니다. 슬라이드에 부착한 후에는 섭씨 60도에서 최소 20분 동안 건조시킵니다.

이제 슬라이드를 수동으로 또는 자동 염색 시스템에서 염색할 수 있습니다. 일상적인 h 및 d 염색의 경우, 특수 염색 또는 면역 조직성 화학 반점이 밝은 색의 원형으로 나타났습니다. 파라핀 블록과 모든 파라핀 섹션에서.

스팟은 다른 개인 및 치료 그룹의 유사한 조직을 포함하는 다중 조직 블록에서 쉽게 방향을 잡고 조직을 식별할 수 있도록 했습니다. 조직에서 사용될 때, microarray 반점은 각 중핵이 귀중한 조직 표본을 위해 이용되는 것을 허용하고 반점은 조직 microarray 중핵에 인접하여 쉽게 골라낼 수 있었습니다. 이 절차를 시도하는 동안 생체 표본과 블록의 지점에 대한 정확하고 명확한 문서화가 성공적인 사용에 매우 중요하다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.

이 비디오를 시청한 후에는 다중 조직 파라핀 블록에서 조직 식별 보조 도구로 표본 방향 태그를 쉽게 만들고 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.