Name: 올바른 조직에게 멀티 조직 블록마다 자리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: 학습하세요 다중 조직 파라핀 블록에서 조직 식별을 위한 SpOT 제작 방법을. HistoGel과 염료를 사용하여 저비용으로 시각적 마커를 만들고, 조직학 연구의 정확성을 높이는 실용적인 기술입니다.

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저자는 원고의 중요한 검토를 제공하기 위해 박사 브렌트 해리스에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 연구는 NIH / NCI 부여 P30-CA051008에 의해 부분적으로 지원되는 롬바르디 종합 암 센터의 조직 병리학 및 조직의 공유 자원에서 수행되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 국립 암 연구소 또는 국립 보건원의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

SPOT 1. 건설 <ol><li> 1 분 또는 완전히 용해 될 때까지 15 ML 원뿔 튜브 또는 2 mL의 미세 원심 분리 튜브와 소용돌이에 1 ml의 조직 마킹 염료에 소 혈청 알부민 (BSA)의 50 mg을 추가합니다. 참고 :이 프로토콜의 경우, 생화학 학년 BSA를 사용합니다. 다른 등급 및 순도가 테스트되지 않은 반면, 등급은 순도가 스폿의 성공에 큰 영향을 미치지 않을 것으로 예상된다. </li><li> 젤이 완전히 용해 될 때까지 10 초 단위로 30 %의 전력에서 전자 레인지에 15 ML 원뿔 튜브에 열 9 ml의 히드 록시 에틸 아가로 오스 처리 젤. </li><li> 하나의 15 ML 원뿔 튜브에 용융 처리 젤 염료 BSA 솔루션을 결합하고 피펫으로 잘 혼합. 솔루션을 소용돌이. </li><li> 몇 시간 동안 또는 고체 때까지 냉장고에 원뿔 튜브를 놓습니다. </li><li> 부드럽게 원뿔 튜브에서 컬러 젤 플러그를 해제 길고 얇은 금속 주걱 또는 프로브를 사용합니다. </li><li> CU에 메스 또는 면도날을 사용하여겔은 5mm 두께의 부분으로 횡 플러그 t. 둥근 끝을 제거하고 폐기물 (그림 2A)로 처리. </li><li> 조직학 카세트의 평면 겔 플러그 부분을 놓고 1 시간 동안 70 % 에탄올을 잡아야합니다. 24 시간 동안 적어도 3 변경 사항을 70 % 에탄올 용액마다 2-4 시간을 변경합니다. </li><li> (1 시간마다 (예를 들면, 지방족 탄화수소 용액 3X를 비운 후 맑은 70 % 에탄올, 80 % 에탄올, 95 % 에탄올, 100 % 에탄올 (3X 변화) : 수동 에탄올 시리즈 (1 시간마다 통해 겔 부분을 처리 크실렌 대용품))이 프로토콜에서 사용 된, 크실렌은 수동으로 또는 조직에 processer)도 가능하며, 1 시간마다)을 위해 용융 파라핀 (3X로 침투. 주 : 100 % 에탄올 중의 전체 탈수 이전에, 염료는 자동 조직 프로세서에서 다른 조직이나 시약 액에 영향을 미칠 수있는 겔 플러그로부터 누출된다. 이러한 수동 재수가 좋습니다으로, 그러나 자동 처리 EQU입니다동맹 효과적인. </li><li> 방법론 (그림 2B)를 포함 표준 파라핀을 사용하여 임베드 여러 처리 젤 섹션. 블록 냉각 및 경화 후, 실온으로 올 수 있도록합니다. </li><li> 블록 (그림 2C) 소진 될 때까지 포함 된 젤 섹션에서 자리 코어를 제거하기 원하는 크기의 피부 펀치 바늘을 사용합니다. 하나의 블록은 20 × 2mm 2 코어를 제공 할 수 있습니다. 시원한 지역에서 코어를 저장합니다. 이 프로토콜에 피부 펀치를 사용하여이 그림을 참조하십시오, 1.5 MM (그림의 1D 및 2D) 또는 2mm (그림의 1B, 1C 및 2C). </li></ol> 2. 동양 비 배열 블록에 지점을 사용하여 <ol><li> 원하는 위치와 함께 내장 될 수있는 개별 조직편 모두의 아이덴티티 및 스폿의 위치를​​ 나타내는 조직 배향도를 만든다. 참고 : 조직의 방향도이 페이지를 포함하는지도 설명입니다식별자와 스팟의 위치에 표시된 모든 조직 조각의 A. 물리적 위치. 그것은 전자적으로 생성 할 수 있습니다 또는 손으로 그린​​ 수 있습니다. 이 그림은 가장 최종 제품을 사용하여 기술자 및 연구원에 맞는 어떤 방법을 사용하여 작성해야합니다. 샘플을 쉽게 현미경 분석에서 식별 할 수 있도록이지도는 연구자에 대한 지침을 제공합니다. 이 프로토콜에 사용 된지도는 손으로 그린​​되었다. 이는 조직의 각 부분과 스폿 그려진 실제 조직 블록 슬라이드와 같은 위치에있는 레이블이 조직 블록과 유리 현미경 슬라이드를 나타낸다. </li><li> 제대로 수익률을 자랑하는 처리 단계에 걸쳐 식별 유지 보장 정상적으로 조직편을 처리한다. 70 % 에탄올, 80 % 에탄올, 95 % 에탄올, 100 % 에탄올 (X3 변경), 지방족 탄화수소 류 (크실렌 대체) (X3 변화), 및 용융 된 조직 침윤 파라핀에서 :이 프로토콜의 경우, 1 시간 각각에 대한 조직을 처리 60 ° C (X3 변경). 참고 :LL 조직은 표준 조직학 실험실 절차에 따라 처리해야한다. 이는 각각의 실험 방법, 조직의 크기 및 종류에 가변적 일 수 있지만, 이것은 배향 수단으로 자리를 사용하는 능력에 영향을 미치지 않을 것이다. </li><li> 조직의 방향도에 따라 할당 된 올바른 위치에 삽입 역에 조직 조각을 정렬합니다. 모든 블록에 자리하고 조직 조각을 준비하는 방법에 대한 기술자를 안내하는 기준으로 조직 방향 다이어그램을 사용합니다. 참고로 도면에 그려진 매립 기술자가 정확히 동일한 구성에 매립 스테이션 조직편을 매립 역 옆 방향 손으로 그린​​ 맵을두고 배치 된이 프로토콜. 이것은 모든 조직 조각이 최종 제품에서 올바르게 식별으로 유지. 이는 다중 조직 블록 성공적인 사용에 절대적으로 중요하다. </li><li> 모든 조직 조각이 블록에 포함되는 것보다 그 자리 코어 키가 있는지 확인. </li><li> 표준 삽입 방법을 사용하여 조직의 방향도에 따라 적절한 위치에 다음 조직 조각과 끝 (가로)에 지점을 포함시킵니다. 필요에 따라 파라핀이 자리 (들) (1-2 분) 이상 떨어지지 않을 정도로 응고 될 때까지, 집게로 똑바로 자리 (들)을 누르고 있습니다. </li><li> 표준 방법을 사용하여 그 자리에 절과 얼룩 파라핀 섹션. <ol><li> 섹션은 양전하를 띤 유리 슬라이드에 40 ℃의 물을 욕조에 떠 및 부착 할 수 있도록 허용 (충전되지 않은 슬라이드는 테스트되지 않았습니다). 적어도 20 분 동안 60 ° C에서 건조 오븐에서 슬라이드를 건조. </li><li> 다음의 시약을 통해 자동 염색기에서 슬라이드를 놓고 처리 : 크실렌 (크실렌 1-5 분, 자일 렌이, 3-2 분마다), 100 % 에탄올 (2 분), 95 % 에탄올 (약 1 분) 80 % 에탄올 (30 초), 70 % 에탄올 (30 초), 실행 수돗물 (2 분), 헤 마톡 실린 (1.5 분), 실행 수돗물 (3 분), 산 알코올 (1 분), 실행 수돗물 (2 분 ), BLuing 시약 (1 분), 흐르는 물 (2 분), 80 % 에탄올 (30 초), 에오신 (1 분), 흐르는 물 (10 초), 80 % 에탄올 (1 분), 100 % 에탄올 (3 변경 2 분마다), 자일 렌 (3 변경, 각각 30 초). </li><li> 매체를 장착 장착 커버 글라스와 슬라이드를 커버. 참고 :이 프로토콜에서, histotechnician 5 μm의 섹션에서 마이크로톰에 파라핀 블록을 절단. 우리는 자동 염색기를 사용이 프로토콜의 경우, 그러나 동일한 결과를 수동 염색을 통해 얻어 질 수있다. </li></ol></li></ol> TMAs 3. SPOT (수동 TMA 키트) <ol><li> 2.1에 설명하고 현장의 원하는 위치 (들)을 할당 등의 조직 방향 다이어그램을 작성합니다. </li><li> 삽입 역에서 녹은 파라핀와 TMA 금형을 입력합니다. 몰드가 냉각 될 때, 조직 배향 그림에 표시된 원하는 위치에서 TMA 몰드의 마진 단부에 스폿 (S)을 포함. 필요에 따라, 파라핀 하 때까지 똑바로 집게로 자리 (들)을 보유의 그 자리 (들) (1-2 분) 이상 떨어지지 않을 정도로 응고. </li><li> 제조업체의 지시에와 배열 마진 (그림 2D)의 자리 (들)의 위치와 관련하여 따라 TMA 코어를 조립, 표준 단면 및 염색 프로토콜을 따릅니다. 참고 :이 프로토콜에 사용되는 단면과 염색 방법을 볼 단계 2.6를 참조하십시오. </li></ol>

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저자가 공개하는 게 없다.

관광 명​​소의 성공적인 준비와 활용은 몇 가지 기술적 인 단계에주의 준수해야합니다. 히드 록시 에틸 아가로 오스의 녹는 천천히 낮은 열에서 수행해야합니다. 고온에서 빠르게 녹는 최적의 결과 미만의 아가로 오스의 일부 고장이 발생할 수 있습니다. 처리 조각으로 염료 함유 플러그를 절단 할 때, 각 부분의 두께가 4.5 mm 이상이고, 7 mm를 초과하지 않는 것을 보장한다. 그들은 두께가 균일하지 5mm만큼 둥근 끝은 폐기물로 제거됩니다. 5mm 미만의 조각 인접 조직 재료의 피로에 앞서 절편에 의해 배출되는 위험이 짧은 스팟의 생성한다. 그 자리는 블록의 전체를 통해 존재하는 보장하기 위해, 조각 적어도 4.5-5 mm해야합니다. 왁스의 적절한 침투를 보장하기 위해, 그러나, 조각 7 mm를 초과하지 않아야합니다. 왁스 침투 용 염료 편 탈수 할 때, 염료는 로우에 조각이 약간 침출 것에탄올의 R 농도. 최종 제품에 영향을주지 않습니다 침출, 반점은 여전히​​ 강렬하게 염색하고 명확하게 볼 수 있습니다. 침출 비록 다른 조직...

하나의 파라핀 블록에서 여러 개인에서 조직 샘플을 포함 할 수있는 능력은, 치료와 개인 사이에 쉽게 나란히 비교를 가능하게 슬라이드 사이의 변동성을 제거하고 절편과 표본을 염색의 비용과 작업 부하를 줄일 수 있습니다. 이러한 다중 조직 블록은 전형적으로 비 - 어레이 레이아웃 여러 개인의 조직을 포함하는 조직 마이크로 어레이를 하나 (TMA) 또는 파라핀 블록으로 제조된다. 샘플 정체성 유지는 여러 조직 분석의 성공에 매우 중요하다. 연구자들은 분석의 효율을 향상 슬라이드 사이의 변화를 줄이기 유용한 조직 자원을 절약하고, 시간과 실험 1의 비용을 줄이기 위해 자신의 개발 이후 TMAs 사용하고있다. TMAs의 올바른 방향 조직 코어 2-4 코어 기의 비대칭 배열 3,5- (예 contro 간의 공백, 행 또는 열을 포함하여 다양한 방법을 사용하여 달성 될 수있다치료 대 L), &quot;비콘&quot;코어 6, TMA 매트릭스 3 외부에 지정된 방향 코어. 이러한 방법 TMAs 잘 작동하지만, 대부분의 조직 코어가 시간이 지남에 소진 될 때 식별자가 혼동 될 수 있으므로 간격 및 공백 가치 TMA 코어 공간과 TMAs을 소비한다. 그들은 식별자로 균​​일 한 마이크로 어레이 코어 단단히 주문 패턴의 이상에 의존하기 때문에 또한 이러한 방법은 배열 형식없이 여러 조직 블록에서 사용하기에 적합하지 않다. 대부분의 비 배열 멀티 조직 블록이 수차의 랜드 마크로서 밖으로 서 만드는 구조적 배열 그리드를 표시하지 않습니다, 정의, 비 균일 한 조직을 수용해야합니다. TMA, 가장 큰 단점 중 하나를 사용하는 많은 장점이 있지만, 항상 크게 불균일 한 조직을 반영하지 않고 코어의 작은 크기이다. 비 배열 다중 조직 블록 t 많이 제공그는 TMA의 장점,하지만 더 큰 조직 샘플, 또는 동물 연구에서 전체 기관을 포함한다. 하나의 코어를 사용하여 조직 마이크로 어레이는 관심의 단백질을 기반으로 전체 조직 섹션과 일치를 변화하고 많은 사람들이 증가 일치 7-11 여러 코어를 필요로한다. 때문에 복잡성과 일부 바이오 마커 표현형의 이질적인 특성으로 TMAs는 여전히 불충분 할 수있는 코어도 많은 수의 (&gt; 10)을 사용하여 분석 8 마이크로 어레이 이외의 방법이 필요할 수 있습니다. 또한, TMA 건설은 기술적으로 까다로운 시간이 소요, 그리고 조직 Arrayer에 대한 초기 비용 및 투자 또는 액세스가 필요합니다. 비 배열 된 다중 조직 블록은 상당히 적은 시간과 노력으로 어떤 기본 실험실하여 이루어진 어레이 허용하거나 비용을 절감하고 분석을 단순화하기위한 수단으로 이상 조직을 요구하는 연구를 위해 유효한 대안이 될 수있다. 비 배열 멀티 조직 블록 마찬가지로 신뢰할가 필요하거나ientation 마커 샘플 ID를 추적하는, 그러나, 이들 마커의 개발이 제한되어왔다. 조직의 방향을 설명하는 문헌의 대부분은 잉크 (12) 조직을 문신 개별 조직 조각을 삽입에 대한 올바른 생리 학적 방향에 초점을 맞추고, 사전 처리 (13)에 한천 - 젤라틴의 조직을 미리 포함하고, 노치 (14) 또는 봉합사 (15)과 특정 조직을 표시 . 기능하지만, 이러한 방법은 그들의 한계에 다 조직 블록 마커로 적합하지 않습니다. 봉합 신속 통해 구분되며, 각 섹션에 표시되지 않을 수 있습니다. 처리 및 매립시 올바른 방향으로 조직을 유지 할 수 있습니다 한천, 젤라틴을 사용하여 기술을 사전 포함하지만, 파라핀 블록과 슬라이드에서 여러 샘플을 구별 할 수있는 시각적를 제공하지 않습니다. 조직에 노치 또는 염료 분석을 복잡하게하거나 중요한 형태 학적 정보를 폐색 수 있습니다. 또한, 조직의 정체성비 배열 다중 조직 블록 비대칭 배열로 조직 조각 매립 통해 유지하지만, 이것은 3 이상의 조직편 필요하고 조직 분석을위한 최적 배열에 대한 허용하지 않을 수있다. 표본 방향 태그 (SPOT)은 명확하게 멀티 조직 블록 조직을 식별 할 수있는 쉽고 저렴한 방법으로 개발하고 기존의 방향 방법에 비해 많은 혜택을 제공하고있다. 그 자리는 하이드 록시 에틸 아가로 오스 처리 젤 및 조직 마킹 염료, 구성 및 파라핀 (그림 2C) 침투 작은, 다채로운, 핵심입니다. 그 자리 코어는 멀티 조직 파라핀 블록에서 하나의 조직에 옆에 끝에 임베디드 블록에서 모든 섹션에 밝은 색깔의 점으로 나타납니다 - 명확 블록 및 섹션의 올바른 방향을 나타내는, (그림 1A D) 쉽게 조직을 식별합니다.

<table><tbody><tr><td>히스토겔 검체 처리 젤</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td><a href="http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html" target="_blank">http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html</a></td></tr><tr><td>조직 마킹 염료</td><td>삼각형 Biomedical Sciences, Inc. </td><td>TMD-5</td><td>모든 조직 표시 염료로 충분할 가능성이 높습니다.</td></tr><tr><td>Arraymold Kit A 2mm(60코어)</td><td>Arraymold</td><td>20015A</td><td>모든 수동 조직 어레이어가 유사하게 작동합니다.</td></tr></tbody></table>

올바른 조직에게 멀티 조직 블록마다 자리

SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

다중 조직 파라핀 블록 효율성 실험 균일 성 및 감소 된 비용과 시간과 높은 처리량 분석을 제공한다. 조직 마이크로 어레이는 다중 조직 파라핀 블록의 대부분을 구성하지만, 점점 연구자 기획 및 장비에 상당한 투자없이 조직 마이크로 어레이의 많은 장점을 제공 할 수있는 다수의 개인들로부터 더 큰 조직을 포함하는 비 - 배열 된 블록을 사용한다. 어떤 다중 조직 분석의 중요한 구성 요소는 각각의 조직을 식별하는 데 사용되는 배향 법이다. 방법은 적절한 방향 및 다중 조직 블록 조직의 식별을 유지하기 위해 존재하지만, 대부분은 배열 내의 유용한 공간을 소모 할 수 있고, 비 배열 블록에 적합하지 않은 및 / 또는 표준 조직학 실험실에서 제조하기가 어렵다. 표본 방향 태그 (스팟) 명확하게 파라핀 블록과 모든 조직 섹션 FO에서 볼 수있는 간단하고 저렴한 비용으로 방향 도구입니다배열 및 비 배열 레이아웃으로 R 신뢰성 시험편 식별. 그 자리는 조직에 대한 직접 수정을 필요로하지 않는 비 배열 블록에 대한 기존의 방향 방법에 비해 이점을 제공하고 조직 조각의 배치의 유연성을 허용한다.

그 자리는 모두 파라핀 섹션 라운드, 파라핀 블록에 밝은 색깔의 점 (그림 1A 및 2D)으로 표시하고 H &amp; E 또는 IHC 염색 과정을 통해 유리 슬라이드에 남아 있습니다 (그림의 1B - 1D 및 2D를). 이 명백한 시각적 보조 모두 각각의 조직 조각을 식별 histotechnician 및 연구원과 histotechnician으로 통신을 단순화는 현미경에서 슬라이드에서 데이터를 수집 연구원에 조직 조각의 배열을 나타 내기 위해서 (때문에)이 시각적으로 사용할 수 있습니다. 조직 배향도 연구원에 제공 슬라이드 포함하고 현미경 분석시 혼란 없을 것이다 있도록 상세히 설명한다.도 2a는 고화 컬러 아가 로스 겔 플러그를 절편의 결과를 보여준다.도 2b는 매립의 결과를 나타낸다 절편을 아가 로스 겔 플러그파라핀...

시편 오리엔테이션 태그 (SPOT)의 목적은 다중 조직 파라핀 블록에서 개별 조직 식별에 도움이되도록 배향 수단으로서 기능하는 것이다. 이러한 프로토콜은 일반적인 저가의 조직 학적 물질에서 쉽게 구성 및 파라핀 블록 및 섹션에서 신뢰할 수있는 시각적 마커 역할을하는 방법을 보여줍니다.

Multi-tissue paraffin blocks provide high throughput analysis with increased efficiency, experimental uniformity, and reduced time and cost. Tissue ...

이 절차의 전반적인 목표는 다중 조직 파라핀 블록에서 조직 식별을 돕는 도구를 제작하는 것입니다. 먼저 HistoGel을 조직 표지 염료와 혼합하여 밝은 색상의 겔 플러그를 형성함으로써 이를 수행합니다. 두 번째 단계는 표준 조직 처리 및 포매 기술에 따라 색상이 입혀진 HistoGel 플러그를 처리하고 포매하는 것입니다.다음으로, 생검 펀치를 사용하여 작은 원통형 조직을 제거합니다. 이것들이 검체 방향 태그 또는 스팟(spot)이 됩니다. 마지막 단계는 스팟을 다중 조직 블록에 매립하는 것이며, 이후 참조가 용이하도록 스팟의 위치와 각 샘플을 세밀하게 기록합니다.최종적으로, 이 스폿(spot)은 조직 마이크로어레이 및 다중 조직 블록에서 시료의 방향과 식별을 위한 명확한 시각적 단서를 제공합니다. 봉합사나 비대칭 코어와 같은 기존 방법보다 이 기술이 갖는 주요 장점은, 스폿이 조직을 변형시키지 않으며 최적의 분석을 위해 샘플 배열을 유연하게 조정할 수 있다는 점입니다. 본 연구진은 비용을 절감하고 분석을 단순화하기 위해 여러 동물의 조직 시료를 하나의 파라핀 블록으로 통합해 달라는 연구자들의 요청을 받았을 때 처음으로 이 방법에 대한 아이디어를 얻었습니다. 스폿을 준비하려면 15 mL 원심 분리 튜브에 조직 마킹 염료 1 mL와 생화학 등급 BSA 50 mg을 첨가하는 것으로 시작합니다.혼합물을 완전히 용해될 때까지 최소 1분 동안 볼텍싱합니다. 다음으로 15 mL 원심분리관에 hydroxyethyl aros 처리 젤 9 mL를 넣고 마이크로파 가열 장치에서 30% 출력으로 가열합니다. 젤이 완전히 녹을 때까지 10초 간격으로 짧게 가열합니다.이제 녹인 처리용 겔과 BSA 염색 용액을 하나의 15 milliliter 원추형 튜브에 합치고 피펫으로 충분히 혼합합니다. 그런 다음 용액을 볼텍싱하고 냉장고에 넣어 몇 시간 동안 굳힙니다. 완전히 굳으면 좁은 스패튤라로 조심스럽게 떼어내어 굳은 겔을 꺼냅니다.플러그를 5mm 두께의 단면으로 절단합니다. 둥근 끝부분은 사용하지 마십시오. 3~6개의 단면을 조직 카세트에 옮겨 70% Ethanol에 침지시키고, 2~4시간마다 70% ethanol 용액을 교체하며, 플러그가 완전히 탈수될 때까지 24시간 동안 최소 3회 이상 교체하십시오.마킹 염료의 일부가 에탄올 용액으로 용출될 것입니다. 처음에 신선한 에탄올로 교체하여 씻어내면 과잉 염료의 일부를 제거할 수 있어, 색상 용출 가능성이 적은 더 깨끗한 플러그를 얻는 데 도움이 됩니다. 다음으로, 카세트를 80% ethanol로 옮긴 후, 다시 95% ethanol로 옮겨 각각의 수조에서 1시간 동안 처리합니다.염색약이 겔 플러그에서 유출되어 다른 조직이나 자동 조직 처리기의 액체 시약에 영향을 줄 수 있습니다. 따라서 수동 탈수를 강력히 권장합니다. 하지만 자동 처리 방식 또한 동일하게 효과적입니다.100% ethanol로 1시간씩 3회 세척하여 탈수를 완료합니다. 시료를 방향족 탄화수소 또는 자일렌에 1시간씩 3회 침전시켜 투명화합니다. 이제 1시간씩 3회 침전시켜 절편을 침투시킵니다.용융 파라핀에서 진행합니다. 처리된 절편을 평소와 같이 임베딩하고, 블록이 상온이 되면 더말 펀치 니들을 사용하여 스팟 코어를 만듭니다. 블록 하나로 2 mm 코어를 22개 만들거나, 1.5 mm 코어의 경우 그보다 더 많이 만들 수 있습니다.함께 임베딩할 모든 개별 조직 조각의 원하는 위치와 정체, 그리고 스팟(spot)의 위치를 표시하는 도표를 작성하는 것으로 시작하십시오. 보관용 사본을 준비하십시오. 검체 방향 태그를 성공적으로 사용하려면 모든 생체 시료의 위치와 스팟에 대한 상대적 위치가 정확하게 상세히 기록되어 있으며, 명확하고 따라 하기 쉬운 생체 시료 맵이 필요합니다.조직 조각들의 처리가 완료되면, 이를 임베딩 스테이션에 배치하십시오. 조직 방향 도표에 따라 정확한 방향으로 배치하는 것이 매우 중요합니다. 또한, 스팟 코어의 높이가 블록에 임베딩될 모든 조직 조각들보다 높아야 합니다.조직 배치가 완료되면 스폿을 매몰합니다. 파라핀이 응고될 때까지 각 스폿이 쓰러지지 않도록 핀셋으로 똑바로 세워 잡으십시오. 1~2분 정도면 충분합니다.수동 TMA 키트의 경우, TMA 몰드에 녹인 파라핀을 채웁니다. 몰드가 식는 동안, 어레이 가장자리에 유사한 방식으로 스팟들을 부착합니다. 이제 스팟이 포함된 절편을 제작하고 염색합니다.표준적인 방법으로, 여기서 5 µm 두께의 절편을 제작합니다. 절편을 슬라이드에 부착하기 위해 40 °C 온수조에 띄운 후, 양전하 처리된 유리 슬라이드로 옮깁니다. 슬라이드에 부착되면 60 °C에서 최소 20분 동안 건조합니다.이제 슬라이드를 수동으로 또는 자동 염색 시스템을 통해 염색할 수 있습니다. 일반적인 h 및 d 염색, 특수 염색 또는 면역조직화학 염색의 경우, 파라핀 블록과 모든 파라핀 절편에서 밝은 색의 원형 점들이 나타났습니다.유사하게 보이는 서로 다른 개체 및 처리군의 조직들이 포함된 다중 조직 블록 내에서 용이한 방향 설정과 조직 식별을 위해 스폿(spot)을 활용했습니다. 조직 마이크로어레이(microarray)에서 스폿을 사용하면 모든 코어를 가치 있는 조직 샘플로 활용할 수 있으며, 조직 마이크로어레이 코어에 인접한 스폿을 쉽게 구별해낼 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때, 바이오스펙시먼(biospecimen)과 블록 내 스폿에 대한 정확하고 명확한 기록을 남기는 것이 성공적인 활용을 위해 매우 중요하다는 점을 기억해야 합니다.이 영상을 시청한 후, 여러분은 다중 조직 파라핀 블록에서 조직 식별 보조 도구로 표본 방향 태그를 쉽고 효과적으로 제작하고 사용하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

조직 microarrays 티슈 다수의 동시 접속 정보를 얻을 수있는 효율적인 방법을 허용합니다. 조직의 대표적인 부분은 하나의 파라핀 블록으로 조립됩니다. 블록의 섹션은 단백질 발현 패턴 immunohistochemistry 및 분석을 위해 사용됩니다. 디지털 스캔 데이터의 유통을 위해 해당 이미지를 생성합니다.

인간 단백질 아틀라스 이내 조직 Microarrays, Immunohistochemistry의 염색법과 디지털 제작

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우리는 세포로 구성된 거시 구조 수준에서 기관의 변화에 대한 연구를 용이하게하는 3 차원 (3D) 조직학 볼륨 재구성을위한 이미지 등록 접근 방식을 제시합니다. 이 접근법을 사용하여 야생형과 Igfbp7-null 유선의 3차원 변화를 연구했습니다.

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학습하세요 다중 조직 파라핀 블록에서 조직 식별을 위한 SpOT 제작 방법을. HistoGel과 염료를 사용하여 저비용으로 시각적 마커를 만들고, 조직학 연구의 정확성을 높이는 실용적인 기술입니다.

올바른 조직에게 멀티 조직 블록마다 자리

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