Rapid <em>In Situ</em> Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Ibrahim M. Shokry; John J. Callanan; John Sousa; Rui Tao

doi:10.3791/53165

JoVE Journal
Neuroscience

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Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

빠른 현장에서 하이브리드

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08:49 min

September 23, 2015

DOI: 10.3791/53165-v

Ibrahim M. Shokry¹, John J. Callanan¹, John Sousa², Rui Tao²

¹Ross University School of Veterinary Medicine, ²Charles E. Schmidt College of Medicine,Florida Atlantic University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

이 프로토콜은 파라포름알데히드 접두사가 붙은 뇌에 이상적인 빠르고 단순화된 현장 혼성화 방법을 설명하므로 신선한 냉동 조직을 사용하는 동안 장기간의 복잡한 단계의 필요성을 줄입니다. 이 방법은 쥐에서 세로토닌 5-HT_2A 수용체 유전자 htr2a의 식별을 사용하여 검증되었습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 파라폼 알데히드 접두사가 있는 뇌 조직에서 C에서 빠른 2 혼성화를 수행하는 것입니다. 이는 먼저 뇌 조직 절편을 탈수하고 전처리 1, 2, 3 시약으로 절편을 처리함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 단면을 1차 올리고뉴클레오티드 프로브와 하이브리드화한 다음 두 번째, 세 번째 및 네 번째 프로브로 하이브리드화하는 것입니다.

다음으로, 표적 RNA를 검출하기 위해 빠른 빨간색 기질을 추가합니다. 마지막 단계는 Image J 소프트웨어를 사용하여 mRNA 신호 수준을 정량화하는 것입니다. 궁극적으로 RNA 유전자 발현의 변화는 실험군과 대조군을 비교하여 얻을 수 있습니다.

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