Efficient Mammalian Cell Expression and Single-step Purification of Extracellular Glycoproteins for Crystallization

Daniel L. Kober; Zeynep Yurtsever; Thomas J. Brett

doi:10.3791/53445

효율적인 포유 동물 세포 발현 및 결정화에 대한 세포 외 당 단백질의 단일 단계 정화

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Biology

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Efficient Mammalian Cell Expression and Single-step Purification of Extracellular Glycoproteins for Crystallization

효율적인 포유 동물 세포 발현 및 결정화에 대한 세포 외 당 단백질의 단일 단계 정화

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07:08 min

December 23, 2015

DOI: 10.3791/53445-v

Daniel L. Kober*^1,2,3, Zeynep Yurtsever*^2,3,4,5, Thomas J. Brett^2,3,5,6,7

¹Molecular Microbiology and Microbial Pathogenesis Program,Washington University School of Medicine, ²Department of Internal Medicine,Washington University School of Medicine, ³Drug Discovery Program in Pulmonary and Critical Care Medicine,Washington University School of Medicine, ⁴Biochemistry Program,Washington University School of Medicine, ⁵Center for the Investigation of Membrane Excitability Diseases,Washington University School of Medicine, ⁶Department of Biochemistry and Molecular Biophysics,Washington University School of Medicine, ⁷Department of Cell Biology and Physiology,Washington University School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

이것은 분비된 당화(glycosylated mammalian protein)의 생산 및 X선 결정학 및 기타 생물물리학 연구를 위한 균질한 단백질의 충분한 수율을 가진 후속 1단계 정제를 위한 빠르고 비용 효율적인 프로토콜입니다.

이 포유류 단백질 발현 기술의 전반적인 목표는 구조적, 생물물리학적, 기능적 연구에 적합한 네이티브하게 접힌 단백질을 밀리그램 단위로 생산하는 것입니다. 이 기술의 주요 장점은 분비된 포유류 단백질과 구조 연구에 필요한 순도 농도를 얻기 위한 빠르고 간단한 프로토콜이라는 것입니다. 일반적으로 단백질 수율과 관련된 대부분의 문제는 세포 건강과 생존력에 기인합니다.

세포 생존율을 면밀히 모니터링하고 배지 당 수치를 모니터링함으로써 단백질 수율을 크게 개선하고 세포의 유용성을 연장할 수 있습니다. 세포 밀도를 모니터링하는 것도 매우 중요합니다. transfection 전 언제든지 세포가 밀리리터당 200만 개의 세포를 초과하면 단백질 수율이 크게 감소한다는 것을 발견했습니다.2 93 F 세포의 대규모 배양을 수행하기 위해 2 93 F 배지 1리터에 100 x 글루타민 10ml와 100 x 펜 연쇄상구균 5ml를 보충합니다.

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