피부 마이크로 이식 세대를위한 새로운 세분화 방법 후 조직 특성

이 외과적 발명의 전반적인 목표는 상처 치유 목적으로 동일한 수술에서 즉시 사용할 수 있는 자가 피부 미세 이식편을 생산하는 것입니다. 이 방법은 재생 의학 및 피부 조직 공학 분야에서 만성 상처 치유, 화상 및 외상 후 궤양과 같은 문제에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 의사가 기대 없이 사용하기 매우 쉽고 빠르고 저렴하다는 것입니다.

먼저 생검 펀치를 사용하여 환자의 피부 샘플을 채취합니다. 그런 다음 상피층을 제거하고 버립니다. 각 조직 샘플을 1ml의 식염수와 결합하여 자가 미세 이식편을 생성합니다.

임상 적용을 위해 바이오 복합체를 준비하려면 1ml의 미세 이식 용액을 콜라겐 스폰지에 옮깁니다. 즉시 바이오 복합체를 환자의 부상 부위에 도포합니다. in vitro에서 바이오 복합체의 생존 능력을 테스트합니다.

3일간의 배양 후 0.3%포르말린을 바이오콤플렉스에 직접 붓고 실온에서 10분간 고정합니다. 마이크로톰을 사용하여 5마이크로미터 두께의 절편을 자르고 유리 슬라이드에 직접 장착합니다. 그런 다음 15-20 밀리리터의 자일렌에 절편을 넣어 3분 동안 놓습니다.

다음으로, 슬라이스를 감소하는 등급의 에탄올에 각각 1시간 동안 담그고 탈이온수에 넣어 섹션을 탈파라핀화하고 재수화합니다. 그런 다음 헤마톡실린 1리터당 1g의 1-2밀리리터를 1-2분 동안 사용하여 섹션을 염색합니다. 그리고 물에 옮겨 얼룩을 헹굽니다.

이제 1-2 밀리리터의 1 % Eosin Y와 70 % 에탄올을 물에 희석하고 4-5 분 동안 섹션을 염색합니다. 그런 다음 흐르는 수돗물을 사용하여 슬라이드를 헹굽니다. 자일렌에서 1시간 동안 배양하기 전에 각각 1시간 동안 증가하는 농도의 에탄올에 절편을 담그십시오.

마지막으로, 커버슬립을 추가하기 전에 샘플에 기반 장착 매체를 적용합니다. 그런 다음 광학 현미경으로 100배 배율로 관찰합니다. 피부종을 사용하여 적출에 대한 국가 규칙에 따라 40세에서 55세 사이의 다조직 기증자 4명의 몸통 부위에서 각각 0.6mm, 1mm 또는 0.2mm 두께의 유두, 사체 또는 진피 샘플을 채취합니다.

샘플을 0.9%NaCl에 넣고 안와 셰이커에 5분 동안 올려 조직을 부드럽게 헹굽니다. 5mm 생검 펀치를 사용하여 피부 조직, 사체 및 진피에서 직경이 균일한 샘플을 만들고 모든 조직 샘플의 무게를 측정합니다. 다음으로, 각각 8개, 3개 또는 4개의 균일한 피부 조직 샘플, 죽은 자 또는 진피 샘플을 조직 교란 물질에 삽입하고 분해를 위해 1.5ml의 식염수를 추가합니다.

이 표에 표시된 대로 모든 조직 샘플에 대해 분해를 수행합니다. 온전한 조직 샘플에서 파생된 해당 수의 펀치 생검을 대조군으로 사용합니다. 기계적 분해 후, 미세 그라프트가 포함된 식염수 용액을 흡인하고 각 샘플을 12웰 플레이트의 단일 웰에 개별적으로 배치합니다.

각 샘플에 10% FBS와 항생제가 보충된 RPMI-1640 배지 1ml를 추가합니다. 세포 생존율을 평가하기 위해 각 웰에 MTT 용액 1밀리리터당 0.5밀리그램을 함유한 배지 1밀리리터를 추가하고 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소에서 3시간 동안 배양합니다. 배양 후 MTT 매체를 제거하고 1ml의 DMSO로 교체합니다.

10분 동안 배양한 후 DMSO의 각 샘플을 큐벳으로 옮기고 분광 광도계를 사용하여 570나노미터에서 광학 밀도를 판독합니다. 세포 생존율을 570나노미터에서의 흡광도의 비율과 분해 전에 사용된 조직의 무게 및 그램으로 계산합니다. 다음으로, 단일 기증자의 피부 조직, 죽은 자 및 진피 샘플에서 식염수를 흡인하면 세포 생존율 테스트를 위해 각 샘플을 12웰 플레이트의 웰에 별도로 배치하거나 형태학적 분석을 위해 배양 플라스크에 배치합니다.

12웰 플레이트에 10%FBS 및 항생제가 함유된 RPMI-1640 1ml를 첨가하거나 배양 플라스크에 5ml를 첨가하고 섭씨 37도와 5%이산화탄소에서 각각 24시간 또는 7일 동안 배양합니다. 24시간이 되면 광학 현미경을 사용하여 세포 현탁액의 존재를 평가하여 형태학적 분석을 수행합니다. 7일째에도 반복합니다.

FACS 분석을 통해 CD146, CD34 및 CD45와 같은 중간엽 및 조혈 세포 마커의 진피 샘플을 분석합니다. 분리된 세포에 배지를 첨가한 다음 섭씨 37도에서 3일 동안 배양합니다. 그리고 앞서 설명한 바와 같이 미생물 분석을 수행하여 조직의 무균 상태를 평가합니다.

여기에서 볼 수 있듯이, 콜라겐 지지대에 즉시 적재된 인간 자가 미세 이식편을 다리 병변에 이식했습니다. 그리고 조직 복구와 관련된 완전한 재상피화는 30일 후에 관찰되었습니다. 또한, 임상추적관찰 결과 5개월 후 손상된 부위의 질감과 부드러움이 양호한 것으로 나타났다.

이 표에 나열된 바와 같이, 한 단계로 처리할 수 있는 8회, 4회, 3회 생검의 임계값을 설정하고, 양호한 세포 생존력을 유지하기 위한 최적의 분해 조건을 확인하기 위해 조직을 4개의 다른 시간에 걸쳐 분해했습니다. 이 비디오에서 입증된 기계적 분해는 온전한 조직에 대해 서로 다른 시간에 평가했을 때 모든 피부 샘플, 죽은 피부 및 진피에서 평균 30%의 세포 생존율 값을 유지합니다. 이 이식편은 배양 24시간 또는 7일 후, 시작 시간과 비교하여 배양에서 균질화 시간까지 피부 조직 샘플에서 세포 생존력의 실질적인 변화가 관찰되지 않았음을 보여줍니다.

그러나 배양 시작 시간에 비해 배양에서 24시간 후 죽은 샘플의 생존력 감소가 관찰되었습니다. 그러나 배양에서 7일 후에 세포 생존력이 회복되었습니다. 진피에 대해서도 유사한 결과가 관찰되었습니다.

이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 5분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 피부에서 상피층을 제거해야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 뼈 치유 메커니즘과 같은 다른 질문에 답하기 위해 뼈 조직 분해와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.

개발 후 이 기술은 재생 의학 및 조직 공학 분야의 연구자들이 환자의 조직 치유를 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 이 미세 이식 절차를 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 티슈로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있다는 것을 잊지 말자.

그리고 이 절차를 수행하는 동안 항상 보안경과 같은 예방 조치를 취해야 합니다.