Name: 피부 마이크로 이식 세대를위한 새로운 세분화 방법 후 조직 특성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: 배우세요 피부 마이크로 이식 제작 방법을 통해 재생의학 및 피부 조직 공학에서 상처 치유를 위한 즉시 사용 가능한 자가 이식편을 만드는 기술을 익히세요.

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저자는 유동 세포 계측법 분석을 수행하는 연구에 기여에 대한 감사 박사 페데리카 Zanzottera를 바랍니다.

윤리 문 : 프로토콜의 임상 응용 프로그램이 환자의 피부자가 조직의 사용을 필요로하기 때문에, 시험 관내에서의 특성은 수확, 처리에 국가 규정의 지침에 따라 에밀리아 로마 냐 지역 스킨 은행에서 동종 피부 조직에 임상 적으로 사용되기 전에 수행 된 및 이식을위한 조직 (2013 CNT)를 배포. 임상 응용 프로그램 1. 바이오 복합 건물 주 :이 프로토콜은 임상 Rigeneracons (조직 장애 물질) 및 Rigenera 머신 (티슈 교란 시스템) (도 1A)의 사용에 기초한다. 조직 장애 물질은 약 50 미크론의 컷오프 육각형 블레이드 및 필터링 세포의 세포 외 기질 성분에 의해 제공되는 격자를 사용하여 조직의 작은 조각을 방해 할 인체 조직의 생물 의학적 장애 물질이다. <ol><li> BI를 통해 환자의 skinsamples를 수집opsy 펀치 (도 1b) 및 미세자가 이식 6,7,9을 얻기 위해 각각의 조각에 대한 생리 식염수 1 ㎖를 첨가들을 분해 (또는 단계 2.1 참조). </li><li> 콜라겐 스폰지에 마이크로 이식 1 ㎖를 놓습니다 (그림 1C) toform 바이오 단지 임상 응용 프로그램에 사용할 수 있습니다. </li><li> 배양 5 % CO 2의 가습 분위기에서 37 ℃에서 10 % 태아 소 혈청으로 보충 된 DMEM 배지 6 ㎖의 존재하에 콜라겐 스폰지 마이크로 이식편의 다른 한 용액. </li><li> 배양 3 일 후, RT에서 10 분간 0.3 % 파라 포름 알데히드 바이오 복합체를 고정한다. 샘플에 직접 특정 디스펜서 파라핀을 붓고. 5 ㎛의 두께 마이크로톰으로 슬라이스를 구하여 유리 슬라이드에 직접 넣어. </li><li> 20 ml의 크실렌 (시판 - - m - 크실렌 (40의 혼합 - 65 %), p- 크실렌 (20 %), O - 크실렌 (20 % (15)를 포함하는, 조직 학적 분석을위한 유리는 5㎛ 파라핀 슬라이스 빠져 ) 및 ETH일 벤젠 (6~20%), 3 분마다 톨루엔, 트리메틸 벤젠, 페놀, 티 오펜, 피리딘 및 황화수소)의 흔적. </li><li> 디 paraffinizing 대한 다음 탈 이온수 (1 시간, 1 시간, 80 % 에탄올, 70 % 에탄올을 1 시간 동안 위해 1 시간, 100 % 에탄올, 95 % 에탄올) 에탄올 감소 학년 슬라이스 (100 % ~ 70 %)을 담가 및 섹션을 돌리는. </li><li> 1 1g / L Ematoxylin 2 ㎖ - - 1 섹션을 얼룩 2 분이어서 모든 Ematoxylin 흑자를 제거하기 위해 물에 헹군다. </li><li> 에탄올 70 % 혼합 농도의 1 %에 에오신 Y 알코올 용액을 5 분간 물에 희석 - 4 섹션을 얼룩. </li><li> 각 슬라이드 섹션 에오신 Y 2 ㎖ 및 실행 수돗물에서 헹구어 - 1을 사용합니다. </li><li> 에탄올의 성적을 증가 섹션을 빠져 기반 장착 mediumand 100X 배율 (그림 1D)에서 빛을 현미경으로 관찰과 함께 1 시간에 대한 크실렌의 통로, 커버 슬립 후, 마지막으로하고 (단계 1.6 참조). </li> &lt;/ OL&gt; 2. 컬렉션, 세분화 및 조직의 생체 외 분석에서 <ol><li> 피부 분절을 사용하여, 각각 0.6 mm, 1mm 또는 4 개의 다기관 및 / 또는 다중의 트렁크 영역에서 두께 2mm 독립적 피부 조직 유두 디 epidermized 진피 (DED) 또는 망상 진피 (진피) 걸릴 수확, 처리 및 이식을위한 조직을 배포에 국가 규칙 (CNT 2013) 다음 40~55년 범위에서 조직 기증자. <ol><li> 부드럽게 5 분 동안 궤도 통에 접시에 이르렀 0.9 % NaCl 용액에서의 모든 샘플을 씻어. </li><li> 5 mm 생검 펀치를 사용하여, 피부 조직, 진피와 DED 직경이 균일하며, 세분화 전에 모든 조직 표본 무게 샘플을 생성한다. </li><li> 세분화에 대한 생리 식염수 1.5 ml를 첨가 조직 장애 물질의 피부 조직, DED 또는 각각 진피의 팔, 서너 균일 한 샘플을 삽입합니다. </li><li> 다른 수행모든 조직 시료 세분화시기는 표 1에 나타내었다. </li><li> 컨트롤과 같은 손상 조직 샘플에서 파생 된 펀치 생검의 상대방 번호를 사용합니다. </li><li> 기계적 세분화 후 별도로 12 웰 플레이트의 한 웰에 각 샘플을 마이크로 이식 장소를 포함하는 식염수 대기음. 그대로 제어 펀치 생검에 대해 동일한 프로토콜을 수행합니다. </li><li> 각 샘플로 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 항생제가 보충 된 RPMI 1640 배지 1 ㎖를 추가한다. </li><li> 즉시 세포 생존 능력을 평가한다. 각 웰 (각각 피부 조직, DED 또는 진피 여덟 서너 균일 한 샘플의 동시 세분화하여 얻어진) 마이크로 - 그래프트를 포함하는 0.5 밀리그램 / MTT의 ㎖ (3- [함유 배지 1 ㎖를 추가 4,5 디메틸 티아 졸 -2- 일] -2,5- 디 페닐 브로마이드) 용액 및 CO 2 / 5 % 공기의 분위기에서 37 ℃에서 3 시간 동안 배양한다. 그대로 제어를위한 동일한 프로토콜을 수행생검 펀치. </li><li> 배양 후, 배지 모두 함유 MTT를 제거하고 10 분 동안 각 샘플 1 ml의 디메틸 설폭 사이드 (DMSO)에 추가한다. </li><li> 큐벳에 각 샘플 및 DMSO를 전송하고 분광 광도계를 사용하여 570 nm에서 광학 밀도 (OD)에서 참조하십시오. 570 nm에서의 흡광도의 비율 세분화 전에 사용 조직 g (GR)에서의 중량으로 세포 생존율을 계산한다. 그대로 제어 펀치 생검에 대해 동일한 프로토콜을 수행합니다. </li></ol></li><li> 기계적 세분화 한 후 피부 조직을 단일 공여체 DED 진피 샘플로부터 유래 된 마이크로 그래프트 함유 식염수 대기음. <ol><li> 12 웰 플레이트의 단일 잘 또는 각각 세포 생존 능력 테스트 및 형태 학적 분석을위한 문화 플라스크에 개별적으로 각각의 샘플을 놓습니다. </li><li> 5 % CO 2 / AI 분위기 하에서 37 ℃에서 1 ㎖ (12 웰 플레이트) 또는 5 ㎖ 1640 배지는 10 % FBS로 보충 된 RPMI로 (배양 플라스크) 항생제를 추가 배양 마이크로 이식편24 시간 7 일 연구. </li><li> 24 시간 또는 칠일 (반복 2.1.8-2.1.10 단계) 후 세포 생존 능력을 평가합니다. </li><li> 24 시간 및 플라스크에 문화의 7 일 후 광학 현미경으로 세포 현탁액의 존재를 평가하는 형태 학적 분석을 수행합니다. </li><li> FACS 분석 (6)에 의해 CD146, CD34 및 CD45 항원을 포함하는 중간 엽 및 조혈 세포 마커에 양성을 위해 진피의 샘플을 분석 할 수 있습니다. </li><li> 층류 후드 시드에서 완전히 분해되지 각각 조직 샘플의 상대 작은 조각 (피부 조직 각각 DED 또는 진피 여덟 서너 균일 한 샘플의 동시 세분화시켜 얻음) 각 마이크로 그래프트 (&gt; 크기가 50 마이크론 5 % 양 혈액 배지 100 μl를 포함 컬럼비아 한천 플레이트에 세분화 과정) 후. </li><li> 사흘 동안 37 ℃에서 플레이트를 인큐베이션하고 멸균을 평가하기 위해 컬럼비아 한천 플레이트상에서 미생물 학적 분석을 수행 (11). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regen. 17, 763-771 (2009).</li>
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</ol>

저자 안토니오 그라는 생산과 Rigenera 시스템을 판매하고 인간의 뇌파 Srl의 과학 감독이다. 저자 레티 지아 Trovato는 인간의 뇌파 Srl의 과학 부문의 협력자입니다

이 예비 연구. 이미 마이크로 이식 임플란트 (9)의 효과 (10)를 최적화하는 다른 임상 적 적용에보고 된이 프로토콜에 의해 얻어진 마이크로 이식은 콜라겐 스폰지와 결합 될 수 있다는 것을 보여 주었다 특히, 본 연구는 생체의 용량을보고 -complexes, 임상 응용 프로그램에서 30 일 후에 다리 병변의 상처 치유를 보조하기 위해, 마이크로 이식 및 콜라겐 스폰지로 구성. 또한, 체외 결과는 즉시 기계 세분화 후 24 시간과 문화의 7 일 후 모두 상당한 세포 생존 능력을 유지, 세 가지 다른 피부 조직을 해리하는이 프로토콜의 효과에 대한 증거를 제공합니다. 균질화 이런 종류의 후 세포 생존 능력의 유지 보수는 광범위한 조작을 방지 단 하나의 단계 멸균자가 미세 이식에서 얻을 수 있습니다. 이 증거는 일치한다다른 최근의 서류와 함께하는 체외에서이 프로...

지난 몇 년 동안, 몇몇 새로운 방법은 급성 및 만성 피부 병변 원스텝 치료를 제공하기 위해 수술 중자가 세포 현탁액을 수득 생명 공학 분야에서 개발되어왔다. 또한, 외상, 당뇨병, 감염증 및 기타 원인으로 인한 급성하지만 주로 만성 상처 관리 도전 남아있다. 만성 상처 의료 시스템 전 세계적으로 1 막대한 재정 부담의 원인이 심각한 글로벌 건강 문제가 될 것을 장착 증거가있다. 피부 병변의 치료 성공률을 높이기 위해 (셀룰러 인핸스 포함) 광범위한 조작이없는 무균 상태의 유지는 즉시의 손상된 영역에 도포 될 수있다 세포 현탁액을 생성하기 위해 필수적인 환자함으로써 이러한 세포 공장으로 클린 룸에서 더 이상 처리를 피하는. 성작은 피부 생검, 연삭, 원심 분리 등의 분리 방법 (예를 들어, 효소 또는 기계)로부터 arting 자주 성장 배지에서 배양 될 수있는 세포 현탁액을 얻기 위해 사용된다. 이들 모든 방법은 일반적으로 셀 구조를 강조하고, 세포 생존율의 감소를 초래 실행 시간이 필요하다. 또 다른 중요한 양태는 손상된 부분을 복구하는, 예를 들어, 임상의에 의해 사용될 준비자가 세포 현탁액을 수득한다. 또한, 잘자가 ​​조직 이식은 결국 유도와 전도 2, 3의 원리에 의해받는 사이트에서 살아 남기 위해 전송 절차를 살아남을 것으로 설정됩니다. 이상적인 이식 조직은 쉽게 사용할 수 있으며 낮은 항원과 공여부의 이환율 (4)이 있어야합니다. 이 증거에 기초하여, 본 연구의 목적은 제 적합자가 생체 복합체를 만드는 것이었다조직 복구에 임상 응용 프로그램입니다. 이를 위해,이 프로토콜에 의해 세분화 된 피부 조직으로부터 개시자가 미세 이식을 구하는 새로운 방법을 설명한다. 사례 발표도 여기에 콜라겐 스폰지와 함께이 프로토콜에 의해 얻은자가 미세 이식의 임상 응용 프로그램으로 설명한다. 이 방법은 이미 사람 조직 (5)의 기계적인 세분화 효율적인 것으로보고되고있어 이식 및 피부 조직 6,7의 재생뿐만 아니라 구강 악안면 외과 8-10에 결합 조직의 재생 치료를 위해 임상 적으로 사용되어왔다 . 또한,이 연구의 목적은 초이 프로토콜에 의하여 자신의 세분화 후에 피부 조직의 생물학적 특성이었다. 이 목적을 위해 피부 조직의 다른 동종 샘플은 다른 여러 기관의 트렁크 지역에서 유래및 / 또는 다중 조직 기증자는 에밀리아 로마 냐 지역 스킨 은행에서 이식을위한 조직 (CNT 2013) 수확, 처리에 국립 규칙을 다음과 분산 처리 하였다. CASE 프리젠 테이션 : 자동차 사고로 인한 복합 외상을 보여주는 35 세 여자 환자는 앙 코나 병원의 중환자 실에 입원했다. 환자 인해 열린 상처와 외부 고정 안정화 복합 골절로 다리에 감염을 보였다. 두 급진적 인 변연 절제술을 수행하고 상처 음압 치료 (VAC 치료) 후 깨끗한되었고, 골막 건강 나타 났을 때, 우리는 회복 두 달 후에 프로토콜을 적용 하였다. 이 시스템을 세분화 한 후, 얻어진 마이크로 이식이어서 환부 복구에 미치는 효과를 조사하기 위해 주입 된 콜라겐 스폰지 바이오 복합체를 만들기 위해 사용되었다.

<table><tbody><tr><td>Rigenera 기계</td><td>인간 뇌파</td><td>79210R</td><td></td></tr><tr><td>Rigeneracons</td><td>인간 뇌파</td><td>79450S</td><td></td></tr><tr><td>MTT</td><td>Roche Diagnostic GmbH</td><td>11465007001</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 매체</td><td>PBI International</td><td>733-2292</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 매체</td><td>PBI International</td><td>F 0415</td><td></td></tr><tr><td>항생제</td><td>생물학 산업 PBI</td><td>03-038-1 &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FACS 분석을 위한 항체</td> CD146-P의 <td>경우 eBiosciences</td><td>코드 12-1469; CD34-APC의 경우 코드 17-0349&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>컬럼비아 한천</td><td>BioMerieux Company</td><td>43041</td><td></td></tr><tr><td>Condress&reg;</td><td>Abiogen Pharma</td><td></td><td>콜라겐 스폰지는 바이오 복합체</td></tr><tr><td>DMSO&nbsp에 사용됩니다.</td><td>Bioniche Pharma USA LLC, Lake Forest, IL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl 솔루션</td><td>Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylene&nbsp;</td><td>카를로 에르바</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

피부 마이크로 이식 세대를위한 새로운 세분화 방법 후 조직 특성

Tissue Characterization after a New Disaggregation Method for Skin Micro-Grafts Generation

몇 가지의 새로운 방법은 급성 및 만성 피부 병변 한 단계 치료를 제공하기 위해 수술 중자가 세포 현탁액을 수득 생명 공학 분야에서 개발되어왔다. 또한, 외상, 당뇨병, 감염증 및 기타 원인으로 인한 만성하지만 급성 상처 관리 도전 남아있다. 이 연구에서 우리는 하나 환자의 피부 조직과 임상 응용 프로그램에서자가 마이크로 이식을 만들 수있는 새로운 방법을 설명합니다. 또한, 피부, 디 epidermized 진피 (DED) 및 다기관 및 / 또는 다중 조직 공여자로부터 유래 된 진피의 피부 조직의 시험 관내 생물학적 특성화 또한 수행 하였다. 모든 조직은 우리가 가능한 마이크로 이식편을 수득 할 수 있도록, 새로운 프로토콜 세분화 하였다. 특히,이 혁신적인 프로토콜 피부 환부에 도포 될 준비자가 이식 및 마이크로 콜라겐 스폰지로 이루어지는 바이오 복합체를 만들 수 있음을보고 하였다. clini다리 병변자가 생체 복합체 학적 애플리케이션은 재 epitalization 처리 및 병변의 부드러움 모두 향상을 보여주는보고되었다. 또한, 우리의 체외 모델은이 시스템을 기계적 세분화 한 후 세포 생존 능력은 문화의 최대 7 일의 시간 동안 유지되는 것으로 나타났다. 또한 세분화로부터 얻은 세포의 풀이 높은 재생 잠재력, 조직 재생 및 복구 과정에서 중요한 역할을 발휘하는 중간 엽 줄기 세포를 포함한 여러 세포 유형으로 구성되어, 유동 세포 계측법 분석으로 관찰 하였다. 마지막으로, 우리는 한천 요리를 배양 할 때이 절차는 마이크로 이식의 불임을 유지 체외에서 보여 주었다. 요약하면, 우리는 의사가 가능한 멸균 일반적인 생물학적 scaffo으로 단독으로 또는 조합하여 적용 할 수있는 마이크로 - 도관을 사용하여 하나의 준비 단계에서 획득하는 새로운 재생 방식은 유망한 수단이 될 수 있다는 결론LDS.

이 예비 연구에서, 제 목표 사용할 준비 바이오 복합체를 제조하는 콜라겐과 같은 생물학적 지원과 함께 인간자가 미세 이식의 능력을 조사 하였다. 이러한 바이오 복합체는 환자에 이식했다 자동차 사고 (도 2A)에 의한 다리 병변 30 일 (도 2b) 후 조직 복구와 관련된 완전한 재 상피화 관찰되었다. 또한, 임상 후속 임상 응용에 평행. 5개월 (도 2C) 후에 손상된 영역 좋은 감촉과 유연성을 보여 관내 연구는 또한 피부 조직으로 다른 피부 조직의 세포 생존율을 평가하기 위해 수행했다 , DED 및 진피 전에이 시스템에 의해 세분화 한 후. 특히, 각각의 조직 유형의 계정에 서로 다른 두께를 가지고, 여덟 임계피부 조직, 진피 DED위한 단일 단계로 처리 될 수있는 네...

새로운 프로토콜에있어서 인간의 조직들을 분해하고, 콜라겐 스폰지와 함께, 피부 병변의 치료에 사용할 준비 인간 생체 복합체를 야기 미세자가 이식편을 만들 설명. 또한,이 시스템은 기계적 세분화 한 후 다른 시간에 마이크로 이식편의 세포 생존율을 유지.

Several new methods have been developed in the field of biotechnology to obtain autologous cellular suspensions during surgery, in order to provide one ...

본 외과적 발명의 전반적인 목표는 상처 치유 목적으로 동일한 수술 과정에서 즉시 사용할 수 있는 자가 피부 미세 이식편을 제작하는 것입니다. 이 방법은 만성 상처 치유, 화상 및 외상 후 궤양과 같은 재생 의학 및 피부 조직 공학 분야의 핵심 질문들에 대한 해답을 제시하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 전문적인 기술이 없는 의사도 매우 쉽게 사용할 수 있으며, 신속하고 경제적이라는 점입니다.먼저, 생검 펀치를 사용하여 환자로부터 피부 샘플을 채취합니다. 그 다음 상피층을 제거하여 폐기합니다. 각 조직 샘플을 1 milliliter의 식염수와 혼합하여 자가 미세 이식편을 생성합니다.임상 적용을 위한 바이오컴플렉스를 준비하려면, 마이크로그라프트 용액 1 milliliter를 콜라겐 스펀지에 옮깁니다. 즉시 바이오컴플렉스를 환자의 손상 부위에 도포하십시오. in vitro 실험을 통해 바이오컴플렉스의 생존력을 테스트합니다.3일간 배양한 후, 0.3% formalin을 바이오컴플렉스 위에 직접 붓고 상온에서 10분 동안 고정합니다. 마이크로톰을 사용하여 5 micrometers 두께로 절편을 자르고 유리 슬라이드에 직접 부착합니다. 그런 다음 절편을 15 내지 20 milliliters의 xylene에 3분 동안 담급니다.다음으로, 절편의 파라핀을 제거하고 재수화하기 위해 농도가 점차 낮아지는 에탄올 용액에 각각 1시간씩 침전시킨 후 탈이온수에 넣습니다. 그런 다음 1 g/L hematoxylin 1~2 mL를 사용하여 1~2분 동안 절편을 염색합니다. 이후 물로 옮겨 염색약을 씻어냅니다.이제 1% Eosin Y와 70% ethanol 1~2 mL를 물로 희석하여 섹션을 4~5분 동안 염색합니다. 그 후 흐르는 수돗물로 슬라이드를 헹굽니다. 섹션을 농도가 점차 높아지는 ethanol에 각각 1시간씩 담근 후, xylene에서 1시간 동안 배양합니다.마지막으로, 커버글라스를 덮기 전 샘플에 염기성 마운팅 매질을 도포합니다. 그런 다음 광학 현미경을 사용하여 100배 배율로 관찰합니다. 채취에 관한 국가 규정에 따라, 40세에서 55세 사이의 다조직 기증자 4명의 몸통 부위에서 더마톰(dermatome)을 사용하여 각각 0.6 mm, 1 mm 또는 0.2 mm 두께의 유두층, 각질층 또는 진피 샘플을 채취합니다.샘플을 0.9% NaCl에 넣고 오비탈 셰이커(orbital shaker)에서 5분 동안 흔들어 조직을 부드럽게 세척합니다. 5mm 생검 펀치(biopsy punch)를 사용하여 표피와 진피 피부 조직으로부터 직경이 균일한 샘플을 채취하고 모든 조직 표본의 무게를 측정합니다. 다음으로, 표피 또는 진피 피부 조직의 균일한 샘플을 각각 8개, 3개 또는 4개씩 조직 파쇄기(tissue disruptor)에 넣고, 분쇄를 위해 식염수 1.5 mL를 첨가합니다.이 표에 표시된 대로 모든 조직 샘플에 대해 분리 공정을 수행하십시오. 대조군으로는 온전한 조직 샘플에서 유래한 해당 수의 펀치 생검 조직을 사용하십시오. 기계적 분리 후, 마이크로그라프트가 포함된 생리식염수를 흡입하여 각 샘플을 12-웰 플레이트의 개별 웰에 각각 넣으십시오.각 샘플에 10% FBS와 항생제가 보충된 RPMI-1640 배지 1 milliliter를 첨가합니다. 세포 생존율을 평가하기 위해, 각 웰에 0.5 milligrams per milliliter의 MTT 용액이 포함된 배지 1 milliliter를 첨가하고, 37-degree Celsius 및 5%carbon dioxide 조건에서 3시간 동안 배양합니다. 배양 후, MTT 배지를 제거하고 1 milliliter의 DMSO로 교체합니다.10분 동안 배양한 후, DMSO에 담긴 각 시료를 큐벳으로 옮기고 분광광도계를 사용하여 570 nm에서 광학 밀도를 측정하십시오. 570 nm에서의 흡광도와 세포 분산 전 사용된 조직의 무게(g)의 비율로 세포 생존율을 계산하십시오. 다음으로, 단일 공여자로부터 얻은 표피 및 진피 조직 시료에서 식염수를 흡입하여 제거한 후, 세포 생존율 테스트를 위해서는 12-웰 플레이트의 각 웰에, 형태학적 분석을 위해서는 배양 플라스크에 각 시료를 개별적으로 배치하십시오.12-well 플레이트에는 10% FBS와 항생제가 포함된 RPMI-1640 1 milliliter를, 배양 플라스크에는 5 milliliters를 추가하고 각각 37-degree Celsius 및 5% carbon dioxide 조건에서 24시간 또는 7일 동안 배양합니다. 24시간 후에 광학 현미경을 사용하여 세포 현탁액의 존재 여부를 평가함으로써 형태학적 분석을 수행합니다. 7일째에 이 과정을 반복합니다.FACS 분석을 통해 CD146, CD34 및 CD45와 같은 중간엽 및 조혈 세포 마커를 사용하여 진피 샘플을 분석합니다. 분리된 세포에 배지를 추가한 다음 37°C에서 3일 동안 배양합니다. 그리고 앞서 설명한 대로 미생물 분석을 수행하여 조직의 무균 상태를 평가합니다.여기에 표시된 바와 같이, 콜라겐 지지체에 즉시 적재한 인간 자가 미세 이식편을 다리 병변에 이식하였습니다. 그 결과 30일 후 조직 재생과 동반된 완전한 재상피화가 관찰되었습니다. 또한, 5개월 후의 임상 추적 관찰 결과 손상 부위의 질감과 부드러움이 양호한 것으로 나타났습니다.이 표에 나열된 바와 같이, 한 단계로 처리할 수 있는 생검 조직의 임계값을 8개, 4개 및 3개로 설정하였으며, 양호한 세포 생존율을 유지하기 위한 최적의 해리 조건을 확인하기 위해 네 가지 서로 다른 시간 동안 조직을 해리하였습니다. 본 영상에서 시연된 기계적 해리법은 온전한 조직과 비교하여 다양한 시간대에서 평가했을 때, 표피와 진피를 포함한 모든 피부 샘플에서 평균 30%의 세포 생존율을 유지하는 것으로 나타났습니다. 이 그래프는 배양 후 24시간 또는 7일이 지난 시점에서, 배양 중 균질화 시점의 피부 조직 샘플 세포 생존율이 시작 시점과 비교하여 실질적인 변화가 관찰되지 않았음을 보여줍니다.하지만, 배양 시작 시점과 비교했을 때 배양 24시간 후 사멸 샘플의 생존율이 감소한 것이 관찰되었습니다. 그러나 배양 7일 후에는 세포 생존율이 회복되었습니다. 진피에서도 유사한 결과가 관찰되었습니다.이 기술을 숙달하고 적절하게 수행한다면 5분 내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때 피부에서 상피층을 제거하는 것이 중요하다는 점을 기억하십시오. 이 절차 이후에는 골 치유 메커니즘과 같은 다른 질문에 답하기 위해 골 조직 분해와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.이 기술은 개발 이후 재생 의학과 조직 공학 분야의 연구자들이 환자의 조직 치유 과정을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 이 미세 이식 절차를 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 조직을 다루는 작업은 매우 위험할 수 있다는 점을 잊지 마십시오.본 절차를 수행하는 동안에는 항상 보안경 착용과 같은 안전 주의 사항을 준수해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

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조직 Microcolumns 수확 용

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코드 혈액 파생에서 3D 피부 Organoid의 생성 유도 만능 줄기 세포

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동종 유전자 이식편으로 재구성된 화상 상처의 뮤린 모델

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생체 내에서 인간 면역 반응을 조작하기 위한 이종이식 피부 모델

배우세요 피부 마이크로 이식 제작 방법을 통해 재생의학 및 피부 조직 공학에서 상처 치유를 위한 즉시 사용 가능한 자가 이식편을 만드는 기술을 익히세요.

피부 마이크로 이식 세대를위한 새로운 세분화 방법 후 조직 특성

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