생체 외에서 마우스 시뮬레이션된 Microgravity에서 Preantral 모 낭의 성장

시뮬레이션된 미세중력 하에서 마우스 전방모낭의 시험관 내 성장. 전체 절차는 네 부분으로 나눌 수 있습니다. 첫 번째 부분에서는 실체현미경으로 바늘을 사용하여 난소에서 난포를 기계적으로 분리합니다.

두 번째 파트는 각 알긴산 비드의 중간에 피펫으로 넣어 단일 여포를 캡슐화합니다. 3부, 단일 여포를 포함하는 알긴산 비드를 시뮬레이션된 미세중력을 생성하는 회전 배양 시스템의 배양 배지 액적으로 이동합니다. 4부, 알긴산 비드를 집어 올리고 알긴산 리아제가 보충된 배지에서 섭씨 37도에서 30분 동안 배양하여 알긴산 비드에서 난포를 캡슐화합니다.

여포 분리 및 캡슐화. 취급 매체에서 난소를 수집한 다음 난소를 중앙 웰 플레이트에 더 배치합니다. 실체현미경으로 보면 난포는 두 개의 바늘로 난소에서 분리됩니다.

혈관막이 손상되지 않도록 주의하십시오. 중간 방울로 접시를 준비하고 기름으로 덮으십시오. 준비된 접시에 난포를 옮깁니다.

새로운 배지에서 난포를 씻은 다음 배지의 방울로 옮깁니다. 배지 한 방울에는 단일 여포가 포함되어 있습니다. 중앙 배양 접시를 준비하고 캡슐화 용액을 바깥쪽 원에 추가합니다.

영점 8%의 알긴산 용액이 담긴 바이알을 준비합니다. 영점 5마이크로리터의 알긴산 용액을 접시 중앙에 추가합니다. 알긴산 용액의 방울을 접시의 바깥쪽 원에 있는 캡슐화 용액에 추가합니다.

난포를 접시 중앙에 있는 알긴산 용액으로 옮깁니다. 알긴산 용액으로 모낭을 헹굽니다. 용액의 부드러운 표면을 통해 각 알긴산 비드의 중앙으로 여포를 옮깁니다.

각 알긴산 비드에는 하나의 여포가 포함되어 있습니다. 알긴산 비드를 캡슐화 용액으로 헹구어 비드를 응고시킵니다. 알긴산 구슬을 취급 매체가 있는 새 접시로 옮깁니다.

시뮬레이션된 미세중력 처리하에 캡슐화된 여포의 시험관 내 배양. 대조군의 경우 새 접시에 150ml의 배양 배지를 추가하고 기름으로 덮습니다. 3개의 알긴산 비드를 중간 액적에 옮깁니다.

배양을 위해 이산화탄소 인큐베이터에서 접시를 배양합니다. 시뮬레이션된 미세중력 처리를 위해 기름 접시를 준비하고, 포트 캡을 제거하고, 용기가 거의 가득 찰 때까지 열린 포트를 통해 용기에 오일을 추가합니다. 오일에 50 밀리터 배양 배지 1개를 추가합니다.

3개의 알긴산 비드를 중간 액적에 옮깁니다. 열린 포트 캡을 교체합니다. 용기의 기포를 제거해야 합니다.

주사기 포트 캡을 제거합니다. 주사기 포트에 오일이 든 주사기 두 개를 놓습니다. 주사기 포트 아래의 기포를 움직입니다.

거품을 주사기로 당기고 다른 주사기에서 같은 양의 오일을 주입합니다. 용기에 기포가 없는지 확인하십시오. 밸브를 닫고 주사기를 제거한 다음 주사기 포트 캡을 교체합니다.

우리는 이미 알긴산 비드가 있는 4개의 용기를 준비했습니다. 이제 용기를 회전 베이스에 고정할 차례입니다. 중간 방울이 균형 상태가 될 때까지 회전 속도를 조정합니다.

배양을 위해 용기와 염기를 모두 이산화탄소 인큐베이터로 옮깁니다. 문화 매체의 변화. 열린 포트 캡을 제거하고 알긴산 비드와 오일을 새 접시에 모으십시오.

알긴산 비드를 찾아 취급 매체로 접시에 옮깁니다. 이전과 같이 선박 배양 시스템을 다시 구축합니다. 여포 검색.

열린 포트 캡을 제거하고 알긴산 비드와 오일을 새 접시에 모으십시오. 알긴산 비드에서 알긴산 비드와 캡슐화된 여포를 취급 배지에서 배양하여 알긴산 비드와 캡슐화된 여포를 집어 올리고, 섭씨 37도에서 30분 동안 알긴산 리아제를 보충합니다. 결과. 세포 생존율 분석은 정상 중력 조건에서 배양된 단일 여포가 시뮬레이션된 미세중력 조건에서 배양된 여포보다 살아있는 세포가 더 많고 죽은 세포가 적다는 것을 보여주었습니다.

난포 크기는 두 중력 조건 모두에서 크게 증가했습니다. 결론. 우리의 방법은 시뮬레이션된 미세중력 조건에서 난모세포 및 과립층 세포의 체외 발달 과정에 관련된 메커니즘을 연구하기 위한 모델을 제공합니다.