합성 아 밀 로이드 베타 단백질의 Intracerebroventricular 주입에 의해 쥐 동물 모델에서 Alzheimer의 질병의 귀중 한 모방의 설립

이 방법은 알츠하이머병과 같은 신경퇴행성 질환 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 이점은 알루미늄 트리클로라이드 및 재조합 인간 변형 성장 인자 베타 1과 결합된 A-베타 25-35의 뇌실 주입 intracereoventricular 주사에 의해 쥐 동물 모델에서 알츠하이머병을 모방한다는 것입니다. 또한 높은 동물 생존율, 높은 모델 성공률 및 높은 복제율을 가진 빠르고 비교적 간단한 실험 프로토콜을 제공하여 더 경제적인 것으로 나타났습니다.

이 기술의 의미는 AD에 대한 약물의 효능을 스크리닝하는 데까지 확장되는데, 그 이유는 이 동물 모델이 AD 환자의 상태에 가까운 기억 장애 및 신경 교란을 가지고 있기 때문입니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 기술자인 Cheng Jianjun이 맡을 것입니다. 마취된 쥐의 경우 수술용 가위로 머리 꼭지점의 털을 자르는 것으로 시작하고 요오드로 소독합니다.

다음으로, 수술용 비스토리와 가위로 정중 세로 종골을 따라 머리 피부를 절개합니다. 피하 조직과 근막을 분리하고 두개골 칼바륨에 0.3% 과산화수소를 닦고 마커 펜으로 브레그마를 표시합니다. 다음으로, RHTGF 베타 1을 주입하고 나사 1개를 고정하기 위한 전방 시상핵, A-베타 25-35 및 AICI3를 주입하기 위한 외심실 또는 LV 영역, 마지막으로 두 번째 나사 고정 장소의 세 지점을 표시합니다.

유연한 뼈 드릴로 두개골에 표시된 세 지점에 직경 1mm의 구멍 3개를 부드럽게 뚫습니다. 출혈을 멈추고 멸균 마른 면으로 두개골 표면을 반복적으로 청소하십시오. 다음으로 마이크로 주입 펌프에 연결된 바늘을 4.2mm 깊이의 뇌에 삽입하고 1 마이크로 리터의 RHTGF 베타 1을 광고 영역에 부드럽게 주입합니다.

주입 후 2분 후에 microinjection을 유지하십시오. 그런 다음 천천히 당겨 빼냅니다. 작은 드라이버로 이전에 표시된 지점에 지정된 두 개의 나사를 두개골에 고정합니다.

나사 배치 후 75% 알코올 침지로 24시간 동안 소독한 후 먼저 더미 캐뉼라를 가이드 캐뉼라에 삽입하여 캐뉼라 이식 시스템을 조립합니다. 그런 다음 쥐의 정위 장치에 있는 캐뉼러 홀더를 사용하여 두개골 구멍을 통해 LV 영역으로 4.6mm의 스테인리스 스틸 튜브 가이드 캐뉼러를 뇌에 삽입합니다. 다음으로, 의치 기반 재료와 의치 기반 물을 1ml당 1.5g의 비율로 혼합합니다.

가이드 캐뉼러 플라스틱 받침대를 덮을 페이스트와 가이드 캐뉼라를 고정하기 위한 두 개의 나사를 넣습니다. 피부 감염을 방지하기 위해 절개 부위 전체를 덮습니다. 다음날 더미 캐뉼러를 뽑아내고 내부 캐뉼라를 가이드 캐뉼라에 삽입합니다.

내부 캐뉼러를 고정하기 위해 고정 나사를 조입니다. 미세 주입 펌프를 내부 캐뉼러에 연결하는 폴리에틸렌 파이프를 설정하고 사출 속도를 분당 1마이크로리터로 조절합니다. 주입을 완료한 후에 LV.Wait에 A-beta 25-35를 Microinject하고, 온화하게 내부 캐뉼러를 당겨

그런 다음 더미 캐뉼러를 가이드 캐뉼라에 다시 삽입합니다. 수술 후 15일째에 수술용 가위와 집게로 의치 기재 고체를 제거하고 요오드로 상처를 소독하여 캐뉼라 이식 시스템을 분해합니다. 마지막으로 두개골 구멍을 뼈 시멘트로 채우고 간단한 단속 봉합 방법으로 피부를 봉합합니다.

검은색 식용 색소로 수영장 물을 검게 만드는 것으로 시작하십시오. 수심은 31.5cm, 온도는 섭씨 23도 ±1도로 유지합니다. 그런 다음 수면 아래에 1.5cm의 원형 투명 플렉시글라스 플랫폼을 설정합니다.

다음으로, 풀을 설명적인 데이터 수집을 위해 가상의 선으로 4개의 동일한 사분면으로 나눕니다. 물 미로의 첫 번째 사분면 또는 Q 1에 숨겨진 플랫폼을 배치합니다. 마지막으로, 컴퓨터 기반 그래픽 분석 소프트웨어에 연결된 물 미로 위의 비디오 카메라를 통해 쥐의 수영 행동을 캡처합니다.

이러한 결과는 가짜로 운영된 쥐 그룹은 항상 자유롭게 수영한 반면, 합성된 A-베타 처리 그룹 쥐는 항상 Morris 물 미로에서 적응형 수영으로 수영장 주변을 수영했음을 나타냅니다. 기억 장애 모델 쥐를 검사하는 4일 동안 모든 쥐는 숨겨진 플랫폼을 찾는 시간이 점진적으로 줄어들었습니다. 또한, 숨겨진 플랫폼을 찾기 위한 복합 A-베타 처리 그룹의 대기 시간은 가짜 조작 그룹보다 훨씬 길었으며, 이는 복합 A-베타가 쥐의 기억 재학습 장애를 높일 수 있음을 보여줍니다.

1일 기억 유지 시험에서 A-베타 치료를 받은 복합 그룹은 가짜 수술을 받은 그룹에 비해 수영 시간, 수영 거리, 횡단 횟수가 60초 이내로 줄었습니다. 마지막으로, 병리학적 변화 외에도 합성 A-베타 투여군의 뉴런 수치는 가짜 수술군에 비해 해마와 대뇌피질에서 현저히 감소했습니다. 이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 20-30분 안에 완료할 수 있습니다.

이 절차를 시도하는 동안 유도된 캐뉼라가 뇌 나사에서 떨어지지 않도록 하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 모방된 AD 모델이 성공적이었는지 여부와 같은 추가 질문에 답하기 위해 미로 테스트와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 신경과학 분야의 연구자들이 생체 내에서 신경퇴행성 질환을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 쥐에서 삼염화알루미늄 및 재조합 인간 형질전환 성장 인자 베타 1과 결합된 A-베타 25-35의 뇌실 내 주입을 통해 성공적인 모방 AD 동물 모델을 설정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 폴리메틸메타크릴레이트로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으므로 이 절차를 수행하는 동안 항상 마스크와 장갑을 착용하는 등의 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.