Name: 초파리 에서 신경 돌기 Arborization 복잡성의 정량 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 배우세요 초파리에서 SOX5 유전자 조작에 따른 신경 돌기 Arborization 복잡성을 정량 분석하는 방법입니다. 이 기법은 신경 퇴행성 질환 메커니즘 연구에 활용됩니다.

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우리는 윌리엄 A. Eimer 이미징 기술 지원을 감사 하 고 싶습니다. 이 작품 [하 R.E.T], 치료 질병의 기금에 의해 지원 되었다 국립 연구소의 건강 [R01AG014713 및 R01MH60009 R.E.T;에 R03AR063271 및 R15EB019704 앨 러 배 마에], 그리고 국립 과학 재단 [앨 러 배 마에 NSF1455613].

1. 실험 준비
<ol><li>다음 시 약 준비: Dulbecco의 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS); 트라이 톤 X-100. 0.2 %PBST (PBS + 0.2% 트라이 톤 X-100); 32 %paraformaldehyde (PFA), 사용; 하기 전에 4%로 희석 실리콘 고무 베이스와 치료 대리인; antifade 장착 매체 (예를 들어, 연장 금); 그리고 손톱 폴란드어입니다.</li>
	<li>다음 장비 준비: 해 부 현미경, 2 개의 날카로운 집게와가 위 서, 기정, 해 부 접시, 현미경 슬라이드 및 coverslips, confocal 현미경을 만들기 위한 배양 접시 핀의 수에 대 한 고 피지 ImageJ 소프트웨어가 설치 된 컴퓨터.</li>
</ol>2. 애벌레 컬렉션
<ol><li>각각 UAS GFP, ppk 권총 GAL4 또는 W1118 야생 타입 파리, UAS-Sox102F-RNAi 파리 친구. 25 ° c.에 표준 조건에서 문화 파리</li>
	<li>5 ~ 6 일, UAS-Sox102F-RNAi의 세 번째 탈피 애벌레를 수집 / ppk 권총 GAL4, UAS GFP 또는 UAS-GFP와 ppk 권총 GAL4 / + 집게 해 부에 대 한 신중 하 게 제어.</li>
</ol>3입니다. 애벌레의 해 부
참고:이 섹션의 모든 절차 서 현미경으로 운영 한다. 배율을 조사입니다. 최적의 광경 보기를 조정 하려고 합니다. 4 ~ 6 배 확대 것이 좋습니다.
<ol><li>실리콘 엘라 스토 머로 만든 기본 해 부 접시와 조직 문화 배양 접시에 유 충을 놓습니다.</li>
	<li>등 면, 얼굴을 수 있도록 유 충 입 고리를 고정 하 고 유 충의 꼬리를 핀 다음. 장소 가능한 노출 오픈 업 표시 됩니다 중간 중간에 등 쪽 쪽.</li>
	<li>몸에 수 분을 유지 하기 위해 유 충을 PBS의 200 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>Rostral에 꼬리에서 2 개의 tracheas 사이 등 쪽 정중 선 따라가 위로 잘라 만들. 각 유 충 시체의 네 모퉁이에 작은 상처를 확인 하십시오.</li>
	<li>그래서 본문 거짓말 플랫 핀 각 본문의 네 모퉁이에 배치 합니다.</li>
	<li>4%에서 유 충 몸 벽을 수정 PFA 실 온에서 25 분.</li>
	<li>5 분 두 번 더 반복에 대 한 PBST에서 씻어.</li>
	<li>조직에서 핀을 제거 합니다. 조직 전송 유리 슬라이드에 antifade 설치 매체와 함께 커버 하 고 커버 슬립을 탑재. 1 h 동안 건조 공기와 손톱 폴란드어로 가장자리를 밀봉.</li>
</ol>4. 영상 처리
참고: 이미지를 거꾸로 confocal 현미경 시스템을 사용 하 여 찍은. 사용자는 20 X 목표 (권장)를 사용 하 여 샘플을 사진 수 있습니다.
<ol><li>부터 Z-시리즈 이미지를 캡처하십시오. 공초점 현미경 소프트웨어에서 "캡처부터 Z-시리즈" 대화 상자를 엽니다. Z 시리즈 이미지 캡처에 대 한 범위를 결정 합니다.<ol>
<li>"상단 및 하단" 버튼을 클릭 합니다. 위쪽 및 아래쪽 위치와 입력 값을 확인 "아래:" 및 "위쪽:" 상자. 0.5 µ m로 "부터 Z-시리즈 캡처" 대화 상자에서 "단계"를 설정 합니다. 다음부터 Z-시리즈 이미지 "지금 실행" 버튼을 클릭 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>*.Tiff 또는 *.nd2 파일으로 얻은 이미지를 저장 합니다.</li>
	<li>영상 후 4 ° C에서 어두운 홀더에 슬라이드를 저장 합니다.</li>
</ol>5. 모 수석 평가
참고: GFP 단백질 UAS GFP에 공동 overexpressed 이었고 ppk 권총 GAL4 GFP 형광 이미징 분석에 대 한 da 뉴런에 파리. 길이, 분기, 및 세 번째 탈피 애벌레에 da 뉴런의 구조를 측정할 수 있었다. 분석 매개 변수 길이 dendrites (µ m), 면적 (µ m2), 분기, 및 분기 구조 (%)의 총 수를 포함합니다. 그림 1 에서는 자세히 분석 매개 변수를 보여 줍니다.
<ol><li>
모 수석의 길이 참고: dendrites의 길이 추적 플러그인에 표시 된 모든 모 수석의 합계입니다.<ol>
<li>설치 하 고 피지 ImageJ (https://fiji.sc/)20 소프트웨어를 실행 합니다. 다음 분할 이미지 별도 채널, 여러 채널 이미지의 경우. 참고:이 프로토콜에 이미지 GFP의 한 채널에만 있다.</li>
		<li>실행 "이미지 | 스택 | Z 프로젝트"Z 프로젝션;를 새 창 이름 ' Z 프로젝션 '으로 나타납니다. "최대 강도" 투영 유형을 클릭 하 고 시작 조각과 중지 슬라이스 따라 사이의 구성 개별 환경 설정에 따라. "확인"을 클릭 합니다 Z-프로젝션 이미지를 명확 하 게 제시 하는 모 수석 투영 표시 됩니다.</li>
		<li>neurites 추적.<ol>
<li>선택 "플러그인 | 세그먼트화 | 간단한 Neurites 추적 프로그램 "창에는 dendrites 추적. 신경 소마를 찾아서 다음에 모 수석 세포 몸, 그리고이 모 수석의 끝에 또 다른 지점에서 출발 한 시점을 클릭 합니다. 참고: 프로그램 두 점 파란색 선으로 연결 됩니다.</li>
			<li>경로가 분명; 경우 플러그인 창에서 "Y"를 누릅니다 모 수석 경로 표시 이미지에서 선택 된 경로의 끝점까지 추적 됩니다. 같은 플러그인 창;에 "전체 경로"를 클릭 세그먼트가 완료 되 면 (그림 2). 참고: 일부 dendrites 통로 더 작은 세그먼트로 분할 되었다 시작 포인트에서 끝났다. 세그먼트는 추적기에 대 한 전체 경로 제공 하기 위해 결합 했다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>경로 완료 한 후 가지는 새로운 위치로 다시 이동 합니다. 새로운 경로; 건축 될 수 있다 "모든 경로" 창 상자 모든 경로 (그림 3)의 길이 값을 표시 됩니다. 추적 파일을 저장 하 고 그림 2와 같이 미완성된 추적 계속.</li>
		<li>클릭 하 여, 모 수석 길이 데이터를 내보내기 "파일 | 로 수출 *.cvs "'플러그인' 창에서. 다음 모든 경로 길이, 요약 하 고 데이터 분석/스프레드시트 소프트웨어를 데이터를 내보냅니다. (그림 3)입니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
다 신경 세포의 표면적
	<ol>
<li>' 피지 ImageJ' 창에서 프리 핸드 그리기 도구를 선택 합니다. 경로 추적 하 고 끝점을 연결 합니다. '분석' 메뉴에서 선택 "설정된 측정 | 지역입니다. " '분석' 메뉴에서 "측정"을 클릭 합니다. 결과 (그림 4) 선정 지역에 대 한 값으로 새로운 상자에 나타납니다. 데이터 분석 소프트웨어에 그것을 복사 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
총 수의 지점과 다 신경의 분기 구조
	<ol>
<li>"분석"을 열어 분기의 총 수를 계산 그리고 "렌더링 | 분석 Skeletonized 경로 "플러그인 창에서 (그림 5)를 추적 합니다. 참고:는 식 목의 구조 분 지의 레벨의 합계입니다. 경로 셀 바디와 모 수석 팁 사이의 정의 된 그리고 주 버는 dendrites 신경 세포 체에서와 같은 하나의 경로 포함할 수 있습니다. 보조 아 버 등 3 차, 4 급, 그리고 오진법 아 버와 기본에서 있습니다. 모 수석 분기의 구조 분 지의 수준에 따라 구분 됩니다. 예를 들어, 기본 % 분기, 분기의 총 수로 나누어 고 수입니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

Dendrites 표 피를 자극 하는 뉴런의 입력된 영역 하 고 그들의 형태학 정보 접수 및 개별 뉴런에 의해 처리 방법을 결정 합니다. 개발 모 수석 형태 모 수석 조직의 유전자 변조를 반영합니다. 초파리 애벌레 다 신경의 말 초 신 경계는 모 수석 개발 때문에 공부에 대 한 중요 한 모델: 1) 포유류11,12; 기능적 유사성 모 수석 구조11,12;에 따라 2) 4 개의 클래스 구분 그리고 3) 규제 morphogenesis 유전 요인. 이 프로토콜에서 선물이 초파리 다 뉴런의 이미지 분석에 애벌레 준비에서 워크플로. 메서드는 dendrites, 표면적, 분 지의 총 숫자와 분기 구조 길이 세부 사항에, da 뉴런의 dendrites을 분석 하기 위한 4 개의 중요 한 매개 변수를 설...

모 수석 신경의 분기 예상치는 다른 뉴런1,2에서 신경의 감각 및 시 냅 시스 입력을 포함 하는 필드를 커버. Dendrites 시 냅 스 형성의 중요 한 요소 이며, 시 냅 시스 입력의 통합 신경에 전기 자극을 전파에 중요 한 역할. 수지상 arborization (다)는 신경 형성 새로운 수지상 나무와 가지를 새로운 시 냅 스를 만드는 과정 이다. 개발 및 다 지점 밀도 및 그룹화 패턴 등의 형태 다단계 생물학 과정에서 발생 하 고 매우 신경 기능에 상관. 이 프로토콜의 목표 arborization 복잡 한 신경 dendritric의 정량 분석에 대 한 메서드를 제공 하는 초파리.
모 수석의 복잡 시 냅 스 종류, 연결 및 파트너 뉴런에서 입력을 결정합니다. 분기 패턴 및 모 수석의 밀도 수지상 필드3,4에 수렴 하는 신호 처리에서 포함 된다. 모 수석 개발 조정에 대 한 유연성 있습니다. 예를 들어, 발달 단계 somatosensory 신경 및 성숙한 신 경계5모 수석 조직에 영향이 있다 시 냅 스 신호. 신경 연결의 설립 morphogenesis 및 모 수석의 성숙에 의존합니다. 모 수석의 기형 장애 신경 기능으로 연결 됩니다. 연구 다 신경 morphogenesis의 이상은 여러 신경 퇴행 성 질병, Alzheimer의 질병 (광고), 파 킨 슨 병 (PD), 헌팅턴의 질병 (HD), 그리고 루 게 릭 병의 etiologies에 기여할 수 있습니다 / 루 경화 증 (ALS)6,,78. 시 냅 스 변경 감소와 장애 신경 기능7,8의 콘서트에서 광고의 초기 단계에 나타납니다. 그러나, 모 수석 병리학이 신경 퇴행 성 질환 병 인에 기여 하는 방법의 구체적인 애매 남아 있습니다.
모 수석의 개발은 레 귤 레이 터, 단백질9,10, 녹음 방송 요인과 세포 표면 수용 체11,12에 ligands의 Wnt 제품군 등의 복잡 한 네트워크 부호화 하는 유전자에 의해 규제 . 4 클래스 (클래스 I, II III, IV), 클래스 4의 다 신경 가장 복잡 한 분기 패턴을가지고 더 나은 이해 morphogenesis13, 강력한 실험 시스템으로 고용 되어 이루어져 초파리 다 신경 14. 초기 morphogenesis 동안 overexpression 및 RNAi 클래스 IV 다 신경 세포에서 유전자의 입을 분기 패턴 및 모 수석 정리13변경 될. 그것은 신경 돌기 arborization의 정량 분석을 위한 실용적인 방법을 개발 해야 합니다.
우리는 이전을 SOX5의 초파리 ortholog의 입을, Sox102F, 주도 다 신경 및 클래스 IV 다 신경15에서 감소 된 복잡성의 짧은 dendrites 나타났습니다. 여기, 우리는 초파리에서 신경 돌기 arborization 복잡도 (NDAC)에 대 한 정량 분석의 절차를 제시. 이전 설명한 방법론에서 적응이 프로토콜 다 감각 신경의 개발 시험 하는 간단한 방법을 제공 합니다. 그것은 강력한 이미지 라벨 및 세 번째 탈피 애벌레 몸 벽16,17,,1819에 다 신경 보여 줍니다. 그것은 NDAC 및 발달 차이 vivo에서조사 하고자 하는 연구자에 대 한 귀중 한 프로토콜입니다.

<table><tbody><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Gibco Life Sciences</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA)</td><td>전자 현미경 과학</td><td>15714-S</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 염기 및 경화제</td><td>Dow Corning Corportation</td><td>3097366-0516; 3097358-1004</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold Antifade Mountant</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36931</td><td></td></tr><tr><td>손톱 광택제&nbsp;</td><td>CVS</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>Nikon</td><td>SMZ800</td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti-E</td><td></td></tr><tr><td>페트리 디쉬</td><td>팔콘</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>펜치</td><td>Dumont</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>가위&nbsp;</td><td>Roboz 수술 기구 Co</td><td>RS-5611</td><td></td></tr><tr><td>곤충 핀&nbsp;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>RS-6082-25</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드 및 커버 슬립</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-188-52</td><td></td></tr></tbody></table>

초파리 에서 신경 돌기 arborization 복잡성의 정량 분석

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

모 수석 신경의 분기 예측 이며 수지상 형태학 반영 시 냅 스 조직 신경 시스템의 개발. 초파리 애벌레 신경 돌기 arborization (다) 공부 morphogenesis dendrites 신경 및 신경 시스템의 개발에 유전자 기능에 대 한 이상적인 모델입니다. Da 뉴런의 4 개의 클래스가 있습니다. 클래스 IV는 거의 전체 면적 애벌레 몸 벽의 분기 패턴으로 가장 복잡 한입니다. 우리는 이전 클래스 IV 신경 돌기 arborization 복잡도 (NDAC) 4 개의 매개 변수를 사용 하 여 SOX5 의 초파리 ortholog 침묵의 효과 특징: dendrites의 길이, 모 수석 검사의 표면적은 지점과 분기 구조의 총 수입니다. 이 프로토콜의 NDAC 정량 분석, 애벌레 해 부, confocal 현미경 검사 법 및 이미지 분석 절차 ImageJ 소프트웨어를 사용 하 여 구성 된 워크플로 제공 합니다. 다 신경 개발 및 그것의 근본적인 메커니즘에 더 통찰력 신경 기능에 대 한 이해를 개선 하 고 신경의 근본적인 원인에 대 한 단서를 제공 및 neurodevelopmental 장애.

Da 뉴런의 dendrites 했다 공동 overexpressing GFP (UAS GFP, ppk 권총 GAL4) 다 신경 소마에 GFP 형광 이미징 분석에 대 한 수지상 아 버에 표시 됩니다. 다 신경 dendrites의 형태는 거꾸로 confocal 현미경 (그림 2)에 의해 몇 군데.
Da 뉴런의 dendrites 피지 ImageJ 소프트웨어를 사용 하 여 추적 했다. 파일 모 수석 길이 (그림 3) 추정에 사용 되었다. 다 신경 (N = 21) (UAS-Sox102F-RNAi/ppk 권총-GAL4;에서 Sox102F 의 입을 UAS-GFP) 컨트롤에 비해 단순한 구조와 모 수석 및 짧은 분기 길이 수에 있는 뜻깊은 감소를 주도 (N ...

이 프로토콜에서 초파리, 수지상 morphogenesis의 연구를 위해 사용 될 수 있는 신경 돌기 arborization 복잡도 (NDAC)의 정량 분석에 집중 한다.

초파리 에서 신경 돌기 Arborization 복잡성의 정량 분석

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

이 절차의 전반적인 목표는 Drosophila에 있는 신경 발달 도중 수지상 식소화 신경의 복잡성에 SOX5 유전자의 충격을 관찰하는 것입니다. 이 방법은 신경-모덴트라이트의 형태 발생, 그리고 신경계 의 발달에 있는 유전자 기능을 연구하는 것을 도울 수 있습니다, 신경 퇴행성 질병 유전자를 더 잘 이해하기 위하여. 궁극적으로이 기술은 많은 다른 유형의 신경 모들라이트에서 사용할 수있는 모선반 복잡성의 정량적 분석을 제공합니다.돌연변이가 유전자 기능을 이해하는 열쇠를 가지고 있기 때문에이 기술의 의미는 신경 퇴행성 질환의 유전 메커니즘으로 확장됩니다. UAS-Sox102F-RNAi 스트레인 플라이 또는 W118 컨트롤을 갖춘 UAS-GFP;ppk-GAL4의 셋업 크로스. 섭씨 25도에서 표준 조건하에서 날아다니는 문화를 배양합니다.약 5~6일 후에 는 집게를 사용하여 제3의 항성 애벌레를 조심스럽게 수집합니다. 실리콘 엘라스토머 베이스로 만든 해부 접시에 애벌레를 놓고 조직 배양 페트리 접시에 놓습니다. 그런 다음 해부 현미경 아래에 접시를 놓습니다.이제 유충의 꼬리를 고정하여 중간선을 노출합니다. 그런 다음 유충의 등쪽이 위로 올라가면 애벌레 입 후크를 고정하십시오. 이제 요리에 PBS 200 마이크로리터를 추가하여 애벌레를 용액에 담그게 합니다.다음으로, 작은 절개로 애벌레의 꼬리와 입을 잘라냅니다. 그런 다음 외중간선을 따라 두 기관 사이에 있는 애벌레를 잘라서 코덜에서 로스트랄로 이동합니다. 그런 다음 몸의 네 모서리 각각에 핀을 배치하여 몸이 평평하게 놓습니다.이제 실온에서 25 분 동안 4 % PFA로 유충 바디 벽을 수정합니다. 그런 다음 세척당 5분간 PBS로 애벌레를 세 번 씻습니다. 세제 후 핀을 제거하고 조직을 유리 슬라이드로 옮기습니다.그런 다음 티슈를 페이드 마운팅 배지에 담그고 커버 슬립으로 장착합니다. 장착 된 조직이 손톱 광택으로 덮개 슬립에 밀봉하기 전에 한 시간 동안 공기 건조를 허용합니다. 이 슬라이드를 어둠 속에서 섭씨 4도에 저장합니다.20X 목표를 사용하여 공초점 현미경으로 z 시리즈 이미지를 캡처합니다. 먼저, 애벌레 바디 월내의 모든 DA 뉴런을 포함하도록 z 단계의 범위를 설정하고 단계 크기를 반 마이크로미터로 설정한다. 그런 다음 처리를 위해 이미지를 TIF 또는 ND2 파일로 저장합니다.다음으로, DA 뉴런의 원점의 수와 형태를 평가한다. 먼저 길이를 평가합니다. 첫째, 피지 ImageJ에서 필요한 경우 이미지를 별도의 채널로 분할합니다.GFP 채널만 평가해야 합니다. 다음으로 z 프로젝션을 만듭니다. 새 창에서 프로젝션 유형에 대한 최대 강도를 선택하고 시작 및 중지 조각을 선택합니다.그런 다음 확인을 클릭하여 선명한 선단 투영 프로젝션이 있는 z 프로젝션 이미지를 생성합니다. 이제 플러그인 도구를 사용하여 중성염을 추적합니다. 첫째, 관심의 뉴런의 소마로 이동하고 한 원더라이트가 세포 체에서 나오는 곳을 클릭합니다.그런 다음이 수상자의 끝을 클릭합니다. 두 점을 연결하는 파란색 선이 신경의 길이를 실행하면 Y를 눌러 예합니다. 그런 다음 이 선이 중성자의 전체 경로에 맞는 경우 전체 경로를 클릭합니다.선이 경로에 맞지 않으면 이 중성염을 따라 더 많은 점을 클릭하여 경로를 중성기 길이에 맞는 여러 선 세그먼트로 구부립니다. 그런 다음 전체 경로를 클릭하고 다음 중성기의 경로를 표시합니다. 모든 추적 경로를 완료한 후 해석, 측정 경로 옵션을 선택하여 경로를 CSV 파일로 내보냅니다.이 데이터를 사용하여 분석을 위해 경로 길이의 평균 값과 계산합니다. 다음으로, 뉴런의 표면적을 계산합니다. 먼저 피지 ImageJ 창에서 무료 핸드 드로잉 도구를 선택합니다.그런 다음 관심 있는 뉴런의 끝점을 연결합니다. 그런 다음 분석 창에서 측정 옵션을 선택합니다. 결과는 선택한 영역에 대한 값이 있는 새 상자에 나타납니다.이 값을 데이터 분석 소프트웨어에 복사합니다. 마지막으로, 스켈레톤 경로 분석 플러그인을 사용하여 총 지점 수를 계산합니다. DA 뉴런의 모데라이트는 GFP 플로레스시벤스 이미징 분석을 위해 소마와 선점 식에서 GFP를 공동 발현함으로써 표지되었습니다.원점의 형태는 반전된 공초점 현미경을 사용하여 이미지화되었다. DA 뉴런의 수상자는 설명된 대로 추적되었다. 이 파일은 수상자 길이를 추정하는 데 사용되었습니다.제3항애벌레에서 DA 뉴런에서 Sox102F의 침묵은 가지 길이의 약 절반을 가진 총 원더라이트 의 총 수의 현저한 감소로 이어졌으며, 이는 가지의 절반만을 보여주는 것입니다. 논리적으로, 이것은 식목 표면적감소로 이어졌습니다. 이 프로토콜은 DA 감각 뉴런의 개발을 평가하는 빠른 방법을 제공합니다.이 절차를 시도하는 동안, 좋은 범위를 얻기 위해 DA 뉴런의 각 그룹의 이미지의 충분한 수를 가지고해야합니다. 이 절차에 따라, 원회 분석과 같은 다른 방법은 원원지 개발에 대한 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다. 개발 이후, 이 기술은 신경 과학 분야의 연구원들이 모델 시스템을 사용하는 알츠하이머병과 같은 신경 퇴행성 질환으로 추론하는 데 도움이 되었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

많은 최근의 연구는 뇌 pathologies와 관련된 시냅스 단백질에 돌연변이가 확인되었습니다. 기본 교양 피질 뉴런이 돌기 척추의 형태와 운동성에서 이러한 질병 관련 단백질의 영향을 조사 큰 유연성을 제공합니다.

교양 CNS의 뉴런의 돌기 스파인 형태론 분석

의 형태학의 분석 Drosophila</em유전 모자이크 사용하기> 애벌레 주변 감각 신경 세포의 Dendrites 및 Axons

출처: Ting, C., et al., 열과 층의 수지상 형태 분석. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 초파리 뇌를 준비하고, 공초점 현미경으로 GFP 표지 수질 수상돌기의 수평 및 정면 이미지 스택을 캡처하고, 층과 열에 걸쳐 형태를 분석하기 위한 3D 재구성을 생성하는 절차를 보여줍니다.

Drosophila Medulla 층과 기둥에 걸친 수지상 형태 분석

우리는 마우스 모델의 해마에서 수지상 수목화의 시각화 및 정량화를 위한 두 가지 방법, 즉 실시간 이미징과 확장된 피사계 심도 이미징에 대해 설명합니다. 전자의 방법은 정교한 지형 추적과 분기 정도의 정량화를 가능하게 하는 반면, 후자는 수지상 나무를 빠르게 시각화할 수 있습니다.

쥐의 해마 영역의 치아 이랑 (dentate gyrus)에서 수지상 Arborization의 평가

초파리 애벌레 수지상 arborization (다) 신경 세포를 사용하여 신경 세포의 형태 형성의 연구는 면역에 의해 신경 세포와 표피 단백질의 현장 시각화 혜택을 누릴 수 있습니다. 우리는 애벌레 몸 벽에서 근육 조직을 제거하여 다 신경 세포와 주변 표피 세포의 면역 형광 분석을 개선하는 절차를 설명합니다.

제거<em&gt; 초파리</em감각 뉴런과 표피 세포의 면역 형광 분석을위한 애벌레 필렛에서&gt; 근육 조직

여기에 우리가 수와 초파리의 광 수용체의 시냅스 활성 영역의 공간적 분포를 정량화하는 방법을 보여, 유전자 인코딩 된 분자 마커 강조하고, 빛에 장시간 노출 후 자신의 변조.

의 시냅틱 변조 분석<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 장시간 빛에 노출 후 광수

두 이미지 분석 알고리즘, "초파리 NMJ Morphometrics"및 "초파리 NMJ Bouton은 Morphometrics"가 자동 초파리 신경근 접합부 (NMJ)의 구 개 형태 적 특징을 정량화하기 위해 만들어졌다.

높은 처리량 및 다중 파라 메트릭 정량화를위한 ​​두 알고리즘<em&gt; 초파리</em&gt; 신경 근육 접합 형태학

여기, 우리는 열 및 레이어 초파리 수질 신경 세포의 수지상 라우팅을 분석하는 방법을 보여줍니다. 워크 플로우는 추적 기준 열 배열 수지상 아버를 등록하기위한 3 차원 공간에서 수지상 구조를 분석하기위한 이미지 품질과 연산 툴을 개선하기 위해 이중 - 뷰 영상 법을 포함한다.

열 및 레이어에 수지상 형태학 분석

여기서 우리는 Golgi-Cox 프로토콜에 대해 자세히 설명합니다. 이 신뢰할 수있는 조직 얼룩 방법은 최소한의 문제 해결과 함께 해마 및 전체 뇌에 걸쳐 cytoarchitecture의 높은 품질 평가를 허용합니다.

골지 - 콕스 방법을 이용한 고령의 해마 상피 세포의 수지상 돌기 복잡성 평가

여기에서는 Drosophila 애벌레 뇌의 실시간 준비에서 매우 운동성 수지상 필로포디아를 이미지화하기 위해 사용한 방법과 수상돌기의 정량적 평가를 위해 시간 경과 3D 이미징 데이터 세트를 정량화하기 위해 개발한 프로토콜을 설명합니다. 신경 세포 개발에 역학.

초파리 뉴런 개발시 빠른 수지상 분지 역학의 시간 경과 라이브 이미징 및 정량화

배우세요 초파리에서 SOX5 유전자 조작에 따른 신경 돌기 Arborization 복잡성을 정량 분석하는 방법입니다. 이 기법은 신경 퇴행성 질환 메커니즘 연구에 활용됩니다.

초파리 에서 신경 돌기 Arborization 복잡성의 정량 분석

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