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LC-MS Isotopically 두 안정을 사용 하 여 Sphingomyelin에 대 한 양적 및 질적 방법 Sphingomyelin 종 ...
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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Quantitative and Qualitative Method for Sphingomyelin by LC-MS Using Two Stable Isotopically Labeled Sphingomyelin Species

LC-MS Isotopically 두 안정을 사용 하 여 Sphingomyelin에 대 한 양적 및 질적 방법 Sphingomyelin 종 분류

Full Text
10,319 Views
08:53 min
May 7, 2018

DOI: 10.3791/57293-v

Kotaro Hama1, Yuko Fujiwara1, Kazuaki Yokoyama1

1Faculty of Pharmaceutical Sciences,Teikyo University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol outlines a method for quantifying and qualifying sphingomyelin species using multiple reaction monitoring and MS/MS/MS techniques. It aims to provide insights into lipid biology through precise analysis of sphingomyelin in biological samples.

Key Study Components

Area of Science

  • Lipid biology
  • Mass spectrometry
  • Biological sample analysis

Background

  • Sphingomyelins are important lipids in cellular membranes.
  • Understanding their structure and quantity is crucial for lipid research.
  • This method enhances the characterization of sphingomyelin species.
  • It addresses key questions in lipid biology.

Purpose of Study

  • To analyze the amount and structure of sphingomyelin species.
  • To improve understanding of lipid biology.
  • To provide a reliable method for lipid characterization in biological samples.

Methods Used

  • Cell culture and harvesting from HeLa cells.
  • Use of ice-cold PBS for rinsing and harvesting cells.
  • Centrifugation to isolate cell pellets.
  • Extraction of sphingomyelin using methanol.

Main Results

  • Successful characterization of various sphingomyelin species.
  • Demonstrated the effectiveness of the chromatography mass spectrometry system.
  • Provided a detailed protocol for lipid analysis.
  • Contributed to the understanding of lipid biology.

Conclusions

  • This method allows for precise analysis of sphingomyelin species.
  • It can be applied to various biological samples.
  • Enhances the understanding of lipid roles in biological systems.

Frequently Asked Questions

What is sphingomyelin?
Sphingomyelin is a type of sphingolipid found in cell membranes, playing a crucial role in cellular signaling and structure.
Why is it important to analyze sphingomyelin?
Analyzing sphingomyelin helps in understanding its role in lipid biology and its implications in various diseases.
What techniques are used in this protocol?
The protocol uses multiple reaction monitoring and MS/MS/MS for analyzing sphingomyelin species.
What are the advantages of this method?
This method allows for detailed characterization of sphingomyelin species in biological samples, enhancing lipid research.
Can this method be applied to other lipids?
While this protocol focuses on sphingomyelin, similar techniques can be adapted for analyzing other lipid species.

여기, 우리가 현재 계량 하 여 여러 반응 모니터링을 사용 하 여 각 sphingomyelin 종 자격 프로토콜 및 MS/MS/MS 모드, 각각.

이 절차의 전반적인 목표는 생물학적 샘플에서 각 Sphingomyelin 종의 양과 구조를 정확하게 분석하는 것입니다. 이 방법은 지질 생물학 및 지질과 관련된 지질 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 크로마토그래피 질량 분석 시스템으로 생물학적 샘플에서 다양한 Sphingomyelin 종을 특성화할 수 있다는 것입니다. 먼저 HeLa 세포가 들어 있는 10cm 조직 배양 접시에서 배양 배지를 제거하고 6ml의 얼음처럼 차가운 PBS로 세포를 두 번 헹굽니다.

그런 다음 10cm 조직 배양 접시에 얼음처럼 차가운 PBS 1ml를 넣고 세포 스크레이퍼를 사용하여 세포를 수확합니다. 접시 표면에서 세포를 제거한 후 세포를 2밀리리터의 실리콘 플라스틱 튜브로 옮깁니다. 원심분리 후 상층액을 제거하고 각 세포 펠렛에 1밀리리터의 메탄올을 첨가합니다.

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생화학 문제 135 Sphingomyelin 액체 착 색 인쇄기-분무 이온화 탠덤 질량 분석 안정적인 isotopically 레이블된 종 MS/MS/MS 모드 보정 곡선 N-acyl moiety

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