Name: Immunocytochemistry 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 의해 경작된 한 세포에 단백질 표정 수준 결정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: 배우세요 파라핀에 포매된 세포 블록을 이용한 면역세포화학 분석법으로 증식 마커를 평가하는 방법을. HeLa 세포 배양에서 세포 형태를 보존하며 단백질 발현 수준을 정확하게 측정할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품에서 국립 암 센터, 한국 (1510121) 및 국가 연구 재단, 한국 (아니 K. 수소를 연구 보조금에 의해 지원 되었다. NRF-2015R1A2A2A04007432).

연구 프로토콜은 기관 검토 위원회의 국립 암 센터, 한국 (NCCNCS-12-630)에 의해 승인 되었다.
1. 샘플 준비 (30 분)
<ol><li>HeLa 세포 (CCL 2, ATCC)의 문화에 대 한 100 m m 문화 접시에 10 mL 전체 DMEM 매체 (10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 펜-strep)를 사용 합니다. 혈 청에 굶주린 HeLa 세포를 준비 하려면 품 어 소 태아 혈 청 하지 않고 DMEM에 confluent HeLa 세포 48 시간에 대 한 이전 연구11에 설명 된 대로.</li>
	<li>세포를 분리 하려면 2 mL 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)와 함께 그들을 씻어 하 고 100 m m 문화 접시 당 0.25 %EDTA 트립 신 2 mL를 추가 합니다. 그런 다음 37 ° c.에 CO2 배양 기에서 2-3 분 동안 품 어</li>
	<li>트립 신, 비활성화 문화 접시에 완전 한 DMEM 매체의 5 mL을 추가 하 고 15 mL 튜브를 분리 된 세포를 전송. 그런 다음에 펠 릿을 형성 하기 위하여 10 분에 대 한 300 x g에서 셀 원심.</li>
	<li>상쾌한, 제거 하 고 10 분에 대 한 300 x g에서 원심 분리 하 여 두 번 2 mL 차가운 PBS 가진 펠 릿을 세척.</li>
	<li>상쾌한의 제거 후, 셀 펠 릿을 95% 에탄올의 1 mL을 추가 하 고 vortexing에 의해 셀 펠 릿 에탄올과 혼합 합니다. 셀 블록 준비까지 얼음에 고정된 셀을 계속.</li>
</ol>2. 셀 블록 준비 (1 시간 30 분)
<ol><li>냉동된 플라즈마의 준비에 대 한 aliquots, 건강 한 기증자 혈액에서 EDTA 플라즈마를 수집 하 고 표면에 뜨는 플라즈마를 수집 하는 13000 x g에서 원심 분리기는 10 분에 대 한 약 200-400 수 µ L 각에 microfuge 관. 사용까지-80 ° C에서 aliquots를 저장 합니다. 냉동된 플라즈마 aliquots 준비가 되 면, 그들을 검색 하 고 5 분 동안 37 ° C에 외피에 의해 플라즈마를 녹여.</li>
	<li>10 분 동안 700 x g에 고정 된 세포를 원심 다음 삭제는 상쾌한.</li>
	<li>플라즈마, thromboplastin, 2 방울 및 0.025 M 염화 칼슘 2 방울 2 방울 (약 200 µ L) 셀 펠 릿 믹스. 그런 다음 pipetting으로 그들을 믹스.</li>
	<li>그림 2A와 같이 10 분 동안 실내 온도에 셀 응고를 형성 하기 위하여 혼합물을 허용 한다. 그런 다음 세척 PBS와 셀 응고 두 번 붓는 피 펫으로 PBS를 제거 하 여. 대표적인 화이트 셀 응고는 그림 2B에 표시 됩니다.</li>
	<li>포 르 말린와 필터 종이 축 축 하 게을 미리 moistened 필터 종이 셀 응고를 포장. 그런 다음 그림 2C와 같이 조직 카세트에는 pincette와 응고 혼합물을 놓습니다.</li>
	<li>포 르 말린 고정을 위한 4 ° C에서 하룻밤 버퍼링 된 포 르 말린 (10% 포 르 말린 PBS에) 50 mL를 포함 하는 유리 항아리에 조직 카세트 장소.</li>
</ol>3. 조직 처리 및 파라핀 포함 (하룻밤)
<ol><li>포함 하는 포 르 말린 고정 셀 응고 조직 카세트 로드 조직 프로세서에서 앞에서 설명한11하룻밤. 조직 처리 물 제거 및 파라핀 포함 이전에 고정 된 세포의 조절입니다. 조직 처리 없이 연구를 위한 조직 표 1에 표시 된 것 처럼 절차를 처리를 수행 합니다.</li>
	<li>(그림 2D) 온수 포함 역, 및 60 분 후, 검사는 녹은 파라핀 금속 금형에 거기에 설정.</li>
	<li>조직 카세트에서 형성된 된 셀 응고 하 고 금속 금형 내에서 녹은 파라핀에.</li>
	<li>장소는 셀을 포함 하는 금속 금형에 뚜껑 없이 새로운 조직 카세트 녹은 파라핀 중간 응고와 조직 카세트에 그리고 금속 금형에 더 많은 녹은 파라핀을 부 어. 그런 다음 30-60 초에 대 한 차가운 접시에 공고히 파라핀 하자.</li>
	<li>금속 금형에서 조직 카세트를 분리 합니다. 그런 다음 파라핀 셀 블록은 immunocytochemistry에 대 한 준비. 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 포함 된 셀 응고 그림 2E에서 화살표로 표시 됩니다.</li>
</ol>4. Immunocytochemistry (1 시간)에 대 한 슬라이드의 준비
<ol><li>파라핀 셀 블록에 셀 응고에 대 한 영역을 확인 하 고는 톰을 사용 하 여 3-4 µ m의 두께와 조각으로 셀 블록을 잘라. 그림 2 층에서 보는 바와 같이 실 란 코팅 된 유리 슬라이드에 파라핀 섹션을 넣어.</li>
	<li>슬라이드에 고착 하는 섹션을 30 분 동안 37 ° C 오븐에 섹션 슬라이드를 놓습니다.</li>
</ol>5. 셀 블록 (6 h) Immunocytochemistry
참고: immunocytochemical 셀 블록 섹션에 얼룩, 다양 한 키트 사용할 수 있습니다 ( 재료의 표참조). 이러한 키트는 다양 한 감도 특이성 그들의 수정에 따라 있다.
<ol><li>크 실 렌 드 paraffinize 4 분의 50 mL에 섹션을 품 어.</li>
	<li>100% 에탄올 탈수에 대 일 분에 두 번 95% 에탄올, 및 2 분 80% 에탄올에 슬라이드를 품 어. 그런 다음, 실행 10 분 동안 물에 에탄올을 제거 합니다.</li>
	<li>항 원 복구에 대 한 병 포함 40 mL 트리 스-EDTA 검색 버퍼, pH 9.0, 슬라이드를 놓고 30 분 동안 솥에 삶아.</li>
	<li>실행 물, 아래 슬라이드를 세척 하 고 95% 에탄올 4 ° c.에서 10 분 동안에 그들을 품 어 다음, 슬라이드에 세포 얼룩 지역 Pap 펜 쉽게 식별을 표시 합니다.</li>
	<li>Tris 버퍼 식 염 수 0.2%를 포함 하는 슬라이드 워시 트윈 20 (TBS-T), 그리고 과산화 수소 블록에서 품 어 ( 재료의 표참조) 모든 나머지 과산화 효소 활동을 제거 하려면 15 분 동안 실내 온도에. 그런 다음 2 분에 대 한 세 번 TBS T에 슬라이드를 씻어.</li>
	<li>1 차적인 항 체 단백질 블록에서을 diluting 하 여 희석된 항 체 솔루션을 준비 ( 재료의 표참조). 예를 들어 기본 항 체 수 CKAP2 희석 배율을 사용, 그리고 기-67 항 체 1: 500. 다음, 1 시간에 대 한 항 체 희석된 솔루션의 100 µ L에서 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>5 시간 2 분을 위한 TBS T에서 세척, 후 어둠 속에서 실 온에서 15 분 동안 키트에 기본 항 체 증강에 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>4 시간 2 분을 위한 TBS T에서 세척 후 HRP 폴리머 (이차 항 체 양 고추냉이 과산화 효소와 함께 표시)의 2 방울을 추가 하 고 30 분 동안 실내 온도에 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>5 시간 2 분을 위한 TBS T에서 세척, 후 추가 diaminobenzidine (DAB) 솔루션의 100 µ L ( 재료의 표참조), 그리고 3 분에 대 한 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>씻은 후 TBS T에 두 번, 되며 솔루션 (100 µ L 되며의와 600 µ L의 증류수의 혼합물), 100 µ L을 추가 하 고 1 분에 대 한 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>TBS-T에서 슬라이드를 한 번 세척 후 2 분에 대 한 95% 에탄올에 잠복기, 95% 에탄올에 담그고 한 번, 그리고 두 번 100% 에탄올에 담그고 탈수. 그런 다음 5 분 동안 유리 항아리 자일 렌 40 mL에에서 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>슬라이드는 크 실 렌에서 건조, 각 coverslips를 탑재 합니다.</li>
	<li>가벼운 현미경 검사 법을 사용 하 여 얼룩 패턴을 관찰 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Bhattacharyya, D., Hammond, A. T., Glick, B. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20419424">High-quality immunofluorescence of cultured cells.</a> Methods Mol Biol. 619, 403-410 (2010).</li>
<li>Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://jcs.biologists.org/content/120/10/1703">Fluorescence microscopy - Avoiding the pit falls.</a> J Cell Sci. 120, 1703-1705 (2007).</li>
<li>Odell, I. D., Cook, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23299451">Immunofluorescence Techniques.</a> J Invest Dermatol. 133, e4(2013).</li>
<li>Kulkarni, M. B., Desai, S. B., Ajit, D., Chinoy, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+the+thromboplastin-plasma+cell-block+technique+for+fine-needle+aspiration+and+serous+effusions%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">The utility of the thromboplastin-plasma cell-block technique for fine-needle aspiration and serous effusions.</a> Diagn Cytopathol. 37 (2), 86-90 (2009).</li>
<li>Shivakumarswamy, U., Arakeri, S. U., Karigowdar, M. H., Yelikar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+utility+of+the+cell+block+method+versus+the+conventional+smear+study+in+pleural+fluid+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cytol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic utility of the cell block method versus the conventional smear study in pleural fluid cytology.</a> J Cytol. 29 (1), 11-15 (2012).</li>
<li>Nathan, N. A., Narayan, E., Smith, M. M., Horn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+block+cytology%3A+Improved+preparation+and+its+efficacy+in+diagnostic+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cell block cytology: Improved preparation and its efficacy in diagnostic cytology.</a> Am J Clin Pathol. 114 (4), 599-606 (2000).</li>
<li>Keyhani-Rofagha, S., Vesey-Shecket, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+value%2C+feasibility%2C+and+validity+of+preparing+cell+blocks+from+fluid-based+gynecologic+cytology+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Diagnostic value, feasibility, and validity of preparing cell blocks from fluid-based gynecologic cytology specimens.</a> Cancer. 96, 204-209 (2002).</li>
<li>Young, N. A., Naryshkin, S., Katz, S. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8390929">Diagnostic value of electron microscopy on paraffin-embedded cytologic material.</a> Diagn Cytopathol. 9, 282-290 (1993).</li>
<li>Jin, Y., Murakumo, Y., Ueno, K., Hashimoto, M., Watanabe, T., Shimoyama, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mouse+cytoskeleton-associated+protein%2C+CKAP2%2C+with+microtubule-stabilizing+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Identification of a mouse cytoskeleton-associated protein, CKAP2, with microtubule-stabilizing properties.</a> Cancer Sci. 95 (10), 815-821 (2004).</li>
<li>Hong, K. U., Choi, Y. -B., Lee, J. -H., Kim, H. -J., Kwon, H. -R., Seong, Y. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+phosphorylation+of+tumor+associated+microtubule+associated+protein+%28TMAP%29%2Fcytoskeleton+associated+protein+2+%28CKAP2%29+at+Thr-596+during+early+phases+of+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mole+Med%22%5BJournal%5D)">Transient phosphorylation of tumor associated microtubule associated protein (TMAP)/cytoskeleton associated protein 2 (CKAP2) at Thr-596 during early phases of mitosis.</a> Exp Mole Med. 40, 377-386 (2008).</li>
<li>Sim, S. H., Bae, C. D., Kwon, Y., Hwang, H. -L., Poojan, S., Hong, H. -I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CKAP2+%28cytoskeleton-associated+protein2%29+is+a+new+prognostic+marker+in+HER2-negative+luminal+type+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">CKAP2 (cytoskeleton-associated protein2) is a new prognostic marker in HER2-negative luminal type breast cancer.</a> PLoS ONE. 12 (8), e0182107(2017).</li>
<li>Inwald, E. C., Klinkhammer-Schalke, M., Hofstadter, F., Zeman, F., Koller, M., Gerstenhauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ki-67+is+a+prognostic+parameter+in+breast+cancer+patients%3A+results+of+a+large+population-based+cohort+of+a+cancer+registry%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">Ki-67 is a prognostic parameter in breast cancer patients: results of a large population-based cohort of a cancer registry.</a> Breast Cancer Res Treat. 139 (2), 539-552 (2013).</li>
<li>Katikireddy, K. R., O'Sullivan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+and+immunofluorescence+procedures+for+protein+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical and immunofluorescence procedures for protein analysis.</a> Methods Mol Biol. 784, 155-167 (2011).</li>
<li>Beutner, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescent+staining%3A+The+fluorescent+antibody+method%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Mol+Biol+Rev%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescent staining: The fluorescent antibody method.</a> Microbiol Mol Biol Rev. 25 (1), 49-76 (1961).</li>
</ol>

모든 저자는 관심 없음 충돌 선언 하 고 있다.

Immunofluorescent 고정된 경작된 한 세포에 얼룩 현재 형태학 정보1을 유지 하면서 단백질 표정 수준 셀에서의 결정에 대 한 선택의 방법입니다. 그러나, immunocytochemistry 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 우수한 대안을 수 있습니다. 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록와 immunocytochemistry의 준비에 대 한 자세한 절차는이 프로토콜에서 설명 되었습니다 그리고 우리 immunocytochemistry 셀 연구에의 응용을 촉진할 수 있다 바랍니다.
Immunocytochemistry immunofluorescent 얼룩 위에 몇 가지 장점이 있습니다. 하지만 갓 배양된 세포, 필요 immunofluorescent 일반적으로 셀에 대 한 얼룩 파라핀 셀 블록 몇 년13실 온에서 보관 하실 수 있습니다. 또한, immunocytochemistry 셀 블록에 일상적인 immunohistochemistry 인간의 조직4에 사용 된 동일한 항 체를 채용 하 여 세포내 식 패턴을 탐색할 수 있습니다. 또한, 그것은 단백질 수준 또는 posttranslational 수정 미리 다양 한 약물 또는 다양 한 문화 조건11세포 배양 하 여 변화를 탐색할 수 있습니다.
Immunocytochemical 얼룩의 장점, 달리 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록의 준비 시간이 걸립니다 그리고 비용이 많이 드는14. 또한, 대부분 연구소가이 기법에서 경험이 부족 하 고 이러한 상황에서 기술적 오류는 일반적. 가장 일반적인 오류는 세포 형태학의 가난한 보존과 가난한 또는 불규칙 한 immunocytochemical 파라핀 셀 블록 섹션에 얼룩. 이들과 대부분의 다른 최고의 셀 조건 셀 블록을 만들고 충분 한 솔루션을 사용 하 여 셀 혈전을 형성 하 여 피할 수 있습니다.
현재 프로토콜의 데모, 셀 블록 HeLa 세포에 대 한 준비 하 고 두 확산 마커, CKAP2 및 이전에 보고 된11기-67에 대 한 수행 했다 immunocytochemical 얼룩. Immunocytochemistry, 세포가 외피와 소 태아 혈 청 하지 않고 미디어에 의해 조작 및 혈 청 기아의 효과 관찰 될 수 있었다. 많은 슬라이드만 슬라이드 당 4-5 µ m 두께 셀 블록 섹션을 사용 하 여 셀 블록에서 준비 될 수 있다 때문에 항 체의 많은 수에 대 한 이러한 준비 파라핀 포함 된 셀 블록을 사용할 수 있습니다. 따라서, 두 개의 서로 다른 조건에 해당 하는 식이 패턴은 여러 다른 항 체와 평가할 수 있습니다. immunostaining CKAP2에 대 한 패턴 및 조직 이미 되어 암에 기-67 보고9,10,,1112, 그리고 얼룩 결과 immunocytochemical 계산 될 수 쉽게, 때문에 얼룩 패턴 immunohistochemistry에서 그들과 아주 유사 했다.
끝으로, immunocytochemical 파라핀 셀 블록에 얼룩 immunofluorescent 얼룩;에 훌륭한 대안이 될 수 있습니다. 또한, 그것은 사용할 수 있습니다 쉽고 안정적으로 식 형태학 정보를 유지 하면서 셀 라인에서 프로 파일링에 대 한 기초 연구에.

대부분 실험실에서 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록 하지 일반적으로 사용 됩니다. 오히려, 배양된 세포를 고정, 파라핀 포함 되지 셀 subcellular 지 방화 연구에서 채택 된다. 그 배양된 세포를 고정, 형광 chromogen 대신 사용 되었습니다. 따라서, immunofluorescent 얼룩 현재 셀 문화1을 채용 하는 연구에서 단백질 식 레벨의 결정에 대 한 선택의 방법입니다. 그러나 슬라이드, immunofluorescent 얼룩이 지기에 대 한 준비는, 비행기 현미경2아래 표시 된 아주 다른 이미지를 표시할 수 있습니다 immunofluorescent 현미경 검사 법에만 관찰할 수 있습니다. 또한, immunofluorescent 얼룩에 대 한 슬라이드의 보존 밝은 빛 으로부터 보호를 요구 하 고 형광 신호 약한 이미징 형광 신호3의 손실로 인해 반복 노출 되. 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 immunocytochemistry의 결과 매우 비슷합니다 immunohistochemistry 파라핀 끼워 넣어진 조직4에서 그리고 그들은 쉽게 임상 정보로 번역 될 수 있다. 따라서, immunocytochemistry는 우수한 대안을 수 있습니다. 그러나, 셀 블록 준비 되지 않았습니다 인기 기초 연구 실험실에서. 이 프로토콜에서 다음, 셀 블록 준비 및 immunocytochemical 얼룩 제공 됩니다 셀-문화 연구의 분야에서이 방법의 사용을 촉진.
셀 블록 준비 및 immunocytochemistry는 독특한 방법, 하지 그리고 그들은 이미 기본 연구4,5임상 진단에서 적용 된. 다양 한 셀 블록 준비 방법 되었습니다 보고4,, 비용 효율적인, 간단 하 고 쉽게 적응할 수 있는6 thromboplastin 플라즈마 방법이입니다. 따라서,이 문서, thromboplastin 플라즈마 방법4,,56,7,에 소개 된 프로토콜8 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록의 준비에 사용 됩니다.
현재 연구에서 두 확산 마커를 사용 하는 immunocytochemistry 메서드 및 thromboplastin 플라즈마 셀 블록의 준비에 대 한 자세한 절차 시연 했다. 한 표시는 골격 관련 단백질 2 (CKAP2), 최근에는 mitotic 마커9,,1011;으로 보고 되었습니다. 다른 하나는 가장 유명한 확산 마커12기-67. 대표적인 구조는 그림 1에 표시 됩니다.

<table><tbody><tr><td>HeLa 세포</td><td>ATCC</td><td>HeLa (ATCC&nbsp; CCL-2)</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>RM-9106-S1</td><td></td></tr><tr><td>파라핀</td><td>라이카</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>크실렌</td><td>피셔 SCientific</td><td>1330-20-7,100-41-4</td><td></td></tr><tr><td>에테놀</td><td>GD Chem</td><td>DJ16016</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Agilent</td><td>10118581</td><td></td></tr><tr><td>DAB Quanto Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>TA-125-QHDX, QHCX 170405</td><td></td></tr><tr><td>Ultravision LP 검출 키트</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PBQ141209, LPB141209, LPH141210</td><td>면역세포 화학용 키트; 단백질 블록 포함</td></tr><tr><td>TintoRetriever 압력솥</td><td>Bio SB Corporation</td><td>BSB 7008</td><td></td></tr><tr><td>Tris-buffered saline</td><td>iNtRON Biotechnology</td><td>IBS-BT008</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>USB 법인</td><td>115106</td><td></td></tr><tr><td>Thromboplastin</td><td>Neoplastin Cl Plus</td><td>NC0591432</td><td></td></tr><tr><td>Tris-EDTA retrival Buffer</td><td>Dignostic Biosystem</td><td>E625-A</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Fetal&nbsp; 소 혈청 (FBS)</td><td>Hyclone Laboratories Inc</td><td>SH30910.03</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Hyclone Laboratories Inc</td><td>SH30243.01</td><td></td></tr><tr><td>항생제-항진균제, 100X</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Ultra vision peroxide block H2O2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>02Q141212</td><td></td></tr><tr><td>장착 매체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>363313</td><td></td></tr><tr><td>Pap-Pen</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>여과지</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>1001-0155</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21115-100ml</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>PAA Laboratories</td><td>H21-002</td><td></td></tr><tr><td>포르말린</td><td>대중</td><td>50-00-0</td><td></td></tr><tr><td>15ml 튜브</td><td>SPL Life Sciences</td><td>50015</td><td></td></tr><tr><td>조직 처리 카세트</td><td>Simport</td><td>M492-5</td><td></td></tr><tr><td>100mm 배양 접시</td><td>BD Biosciences</td><td>08-772E</td><td></td></tr><tr><td>유리 슬라이드</td><td>무토 순수 화학 물질</td><td>140712</td><td></td></tr><tr><td>커버 유리</td><td>Marienfeld</td><td>2262817</td><td></td></tr><tr><td>유리 Zar</td><td>Hyunil Lab-Mate</td><td>HIP-1027</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Class II 층류 후드</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1300 시리즈 A2</td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>시리즈 A2</td><td></td></tr><tr><td>티슈 프로세서</td><td>Leica BioSystem</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>마이크로톰</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>HM340E</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Olympus</td><td>CX-21</td><td></td></tr><tr><td>파라핀 임베딩 스테이션</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>EC 350-1, EC 350-2</td><td></td></tr><tr><td>조직 단면 배스(원형)</td><td>CellPath</td><td>HCP-JAW-0100-00AEU</td><td></td></tr><tr><td>흄 후드</td><td>Hanyang Scientific Equipment Co., Ltd.</td><td>FH-150</td><td></td></tr></tbody></table> 시리즈

immunocytochemistry 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 의해 경작된 한 세포에 단백질 표정 수준 결정

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

Immunofluorescent 얼룩 때 현재 단백질 표정 수준 결정에 대 한 선택의 방법 세포 배양 시스템에 형태학 정보도 필요 하다. Immunocytochemical 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록, 여기 제시에 얼룩의 프로토콜 파라핀 포함 된 고정된 셀에 immunofluorescent 얼룩에 우수한 대안 이다. 이 프로토콜에서 HeLa 세포에서 파라핀 셀 블록 thromboplastin 플라즈마 메서드를 사용 하 여 준비 하 고 immunocytochemistry 두 확산 마커, CKAP2 및 기-67의 평가 위해 수행 되었다. 핵 및 HeLa 세포의 세포질 형태학 셀 블록 슬라이드에서 잘 보존 했다. 같은 시간에는 immunocytochemistry에서 CKAP2와 기-67 얼룩 패턴 immunohistochemical 파라핀 암 조직에 얼룩에 아주 유사 했다. 혈 청 무료 조건 HeLa 세포의 사전 부 화를 포함 하 여 수정된 세포-배양 조건, 효과 아키텍처 정보를 유지 하면서 평가 수 있습니다. 결론적으로, 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 immunocytochemistry immunofluorescent 얼룩에 우수한 대안 이다.

파라핀 끼워 넣어진 셀 블록 (그림 3AB)에서 되며 후 오신 스테인드 슬라이드, 세포의 세포질과 핵의 대부분은 그대로, 형태 보존은 현재 프로토콜 (우수 제안 그림 3A)입니다. Immunocytochemical 얼룩에 긍정적인 CKAP2 얼룩이 관찰 되었다 압축된 chromatin, mitotic 스핀 들 및 세포질 (그림 4)에서 이전에 보고 된10. 기-67 얼룩 예상된 (그림 4)로 세포 핵에서 관찰 되었다. 만 셀 CKAP2 압축된 chromatin에서 얼룩 mitotic 세포 했다 ( 그림 4AB화살표 참조). 많은 CKAP2 양성 세포는 완전 한 매체 (그림 4A)에서 부 화 후 준비 된 했다 높은 mitotic HeLa 세포에 표시 했다. 비교에서는, 혈 청에 굶주린 HeLa 세포 (그림 4B)에서 몇 CKAP2-긍정적인 세포 있었습니다. 높은 mitotic는 HeLa 세포의 대부분이 기-67 긍정적인 (그림 4C). 반면, 혈 청에 굶주린 HeLa 세포에서 기 67 양성 율 50% (그림 4D)로 높은 유지. 이러한 결과 매우 그는 이전 보고서11, CKAP2은 보다 안정적인 확산 마커 암 세포에서 보다 기-67의 비교.
제대로 준비 된 셀 블록, 핵, 세포질에서 분리 하 고이 또한, 릴리스할, 불 쌍 한 형태 론 적. 냉장고에 고정된 셀의 하룻밤 보다 더 이상 보육 같은 가난한 결과 발생할 수 있습니다. 또 다른 중요 한 문제는 셀은 우수한 형태에도 불구 하 고 immunocytochemistry에 의해 잘 스테인드 하지. 이 문제는 셀 응고 작을 때 더 자주 발생 합니다. 일반적으로, 착 색 강도 그림 3B;에서 같이 일반 하지만 셀 응고 크면, 불규칙 한 얼룩의 더 적은 기회. 따라서,이 프로토콜에 우리는 큰 셀 응고를 형성 하기 위하여 플라즈마, thromboplastin, 및 염화 칼슘의 볼륨 증가.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57369/57369fig1.jpg"> 그림 1: 셀 블록 준비 계획. <a href="/files/ftp_upload/57369/57369fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57369/57369fig2.jpg"> 그림 2: 파라핀 셀 블록 준비의 그림. (A) thromboplastin 플라즈마 튜브에서 셀 병. (B) TP 셀 응고 PBS 세척 후. (C) 셀 moistened 필터 종이에 응고. (D) 조직을 포함 한 녹은 왁 스로 역. 금속 몰드 (화살표)에 녹은 왁 스 응고에 대 한 보유 하고있다. (E) 파라핀 포함 셀 응고 (화살표) 파라핀 또는 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 포함 된. (F) 얇은 파라핀 코팅된 슬라이드의 중간 부분에 섹션. <a href="/files/ftp_upload/57369/57369fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57369/57369fig3.jpg"> 그림 3: 셀 블록 준비 및 확인 되며 오신 및 immunostaining 품질. (A) 되며-및-오신-스테인드 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록 섹션에 HeLa 세포의 이미지. (B) 불규칙 착 색 기-67의 저조한에 immunocytochemistry에 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록 섹션 준비. 스케일 바는 (A) 100 및 (B) 200 μ m. <a href="/files/ftp_upload/57369/57369fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57369/57369fig4.jpg"> 그림 4: Immunocytochemical 헬러 셀 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 얼룩. (A) CKAP2 높은 mitotic 조건 하에서 얼룩. (B) CKAP2 혈 청 공 복 상태에서 얼룩. (C) 기-67 높은 mitotic 조건 하에서 얼룩. (D) 기-67 혈 청 공 복 상태에서 얼룩. 100 μ m 스케일 바 표시 됩니다. 화살촉 표시 CKAP2-긍정적인 세포. <a href="/files/ftp_upload/57369/57369fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>절차</td>
			<td>단계</td>
			<td>솔루션</td>
			<td>시간/온도</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="4">탈수</td>
			<td>1</td>
			<td>70% 알코올</td>
			<td>15 분/실시간</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>80% 알코올</td>
			<td>15 분/실시간</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>95% 알콜</td>
			<td>15 분/실시간</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>100% 알코올</td>
			<td>15 분/실시간</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="4">지우기</td>
			<td>1</td>
			<td>크 실 렌</td>
			<td>60 분/4 ° C</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>크 실 렌</td>
			<td>10 분/실시간</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>크 실 렌</td>
			<td>10 분/실시간</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>크 실 렌</td>
			<td>10 분/실시간</td>
		</tr>
<tr>
<td>* RT, 실내 온도</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>표 1입니다. 조직 처리 절차입니다.

현재, 고정된 셀에 immunofluorescent 얼룩 때 단백질 식 레벨의 결정에 대 한 선택의 방법 형태학 정보도 필요 하다. 여기에 소개이 프로토콜 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 immunocytochemistry의 다른 방법을 제공 합니다.

Immunocytochemistry 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 의해 경작된 한 세포에 단백질 표정 수준 결정

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

이 절차의 전반적인 목표는 트롬보플라스틴-혈장 세포 블록 포매 조직 덩어리의 면역세포화학적 및 조직학적 분석을 통해 관심 있는 증식 마커의 발현을 분석하는 것입니다. 이 방법은 조직에 의한 세포 차단의 임상 병리학에 대한 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 파라핀 포매 세포 블록의 면역세포화학 분석을 위한 이 대체 방법의 주요 장점은 절차의 기술적 단순성입니다.HeLa 세포 배양 접시 100mm가 포화 수준에 도달하면 상등액을 FBS가 없는 10mL의 HeLa 세포 배양 배지로 교체하고 접시를 세포 배양 인큐베이터로 되돌립니다. 48시간 후, PBS 2밀리리터로 세포를 세척한 다음 0.25% EDTA와 트립신 2밀리리터에서 섭씨 37도에서 2-3분 동안 배양하고 5% 이산화탄소를 배양합니다. 세포가 분리되면 5ml의 완전한 배지로 반응을 중지하고 세포 용액을 15ml 원추형 튜브로 옮깁니다.원심분리를 통해 세포를 모은 후 세척당 2ml의 차가운 PBS로 2회 세척합니다. 두 번째 세척 후 상등액을 1ml의 95% 에탄올로 교체하고 볼텍싱으로 펠릿을 혼합합니다. 그런 다음 고정된 세포를 얼음 위에 놓습니다.파라핀 세포 블록을 준비하기 위해 건강한 기증자의 혈액에서 EDTA 혈장을 채취한 후 샘플을 원심분리하고 200-400마이크로리터의 상농 혈장 부분 표본을 개별 마이크로분리 튜브로 옮깁니다. 다음으로 약 200마이크로리터의 혈장, 약 200마이크로리터의 트롬보플라스틴, 약 200마이크로리터의 025몰 염화칼슘을 고정된 HeLa 세포에 추가합니다. 혼합물이 실온에서 10분 동안 세포 응고를 형성하도록 한 다음 1ml의 PBS로 혈전을 두 번 세척하여 두 번째 세척 후 포르말린에 적신 여과지의 개별 조각에 혈전을 완전히 제거합니다.혈전을 여과지로 감싸고 핀 세트를 사용하여 포르말린에 적신 다른 4 장의 종이 중앙에 있는 개별 조직 카세트에 천을 놓습니다. 그런 다음 조직 카세트를 50ml의 완충 포르말린이 들어 있는 유리병에 넣고 섭씨 4도에서 하룻밤 동안 포르말린을 고정합니다. 다음날 아침, 카세트를 조직 처리기에 넣어 밤새 수분을 제거하고 세포를 조절합니다.처리 절차가 끝나기 최소 1시간 전에 가열된 임베딩 스테이션을 켜서 파라핀을 녹입니다. 포매 스테이션과 응고가 준비되면 금속 주형에 용융된 파라핀이 있는지 확인하고 형성된 세포 응고를 파라핀으로 옮깁니다. 뚜껑이 없는 새 조직 카세트를 금속 주형에 넣고 더 많은 용융 파라핀으로 카세트를 덮습니다.파라핀을 냉각판에서 30-60초 동안 굳히십시오. 그런 다음 금속 주형에서 조직 카세트를 분리합니다. 면역세포화학 분석을 위한 절편을 준비하려면 하나의 파라핀 세포 블록에서 세포 응고를 찾고 마이크로톰을 사용하여 블록을 3-4마이크로미터 두께의 조각으로 자릅니다.파라핀 절편을 식염수로 코팅된 유리 슬라이드에 놓고 슬라이드를 섭씨 37도의 오븐에 30분 동안 넣습니다. 섹션이 슬라이드에 부착되면 4분 동안 15ml의 자일렌으로 슬라이드를 파라핀화한 다음 순차적인 2분 하강 에탄올 배양으로 섹션을 탈수합니다. 80% 에탄올 배양 후 흐르는 물에 절편을 10분 동안 헹구고 40ml의 트리스-EDTA 회수 버퍼가 들어 있는 병에 슬라이드를 30분 동안 끓입니다.배양이 끝나면 항원 회수 슬라이드를 흐르는 물에 씻은 다음 섭씨 4도에서 95% 에탄올로 10분 동안 배양합니다. 공기 건조 후 소수성 펜을 사용하여 각 슬라이드의 세포 염색 영역을 둘러쌉니다. TBS-T에서 슬라이드를 세척한 후 과산화수소 블록에서 실온에서 15분 동안 배양하여 잔류 과산화효소 활성을 제거합니다.TBS-T에서 2분씩 슬라이드를 세 번 세척한 다음 관심 있는 면역세포화학 염색 키트의 1차 항체 혼합물 100마이크로리터로 섹션을 1시간 동안 세척한 다음 2분 동안 TBS-T를 5회 세척합니다. 마지막 세척 후, 어두운 곳에서 실온에서 15분 동안 키트의 1차 항체 강화제의 슬라이드를 배양합니다. 배양이 끝나면 TBS-T로 섹션을 4회 세척하고 실온에서 30분 배양을 위해 마지막 세척 후 양고추냉이 과산화효소로 표시된 약 200마이크로리터의 2차 항체를 추가합니다.강화된 부분을 새 TBS-T로 5회 세척한 다음 섹션당 100마이크로리터의 디아미노벤지딘 용액을 3분 동안 추가합니다. TBS-T에서 슬라이드를 두 번 세척하고 1분 동안 100마이크로리터의 헤마톡실린 용액으로 섹션에 라벨을 붙입니다. 그런 다음 TBS-T에서 슬라이드를 한 번 더 세척하고 슬라이드를 95% 에탄올에서 2분 동안 배양한 다음 신선한 95% 에탄올에 한 번 담그고 100% 에탄올에 두 번 담그십시오.유리병에 40ml의 자일렌이 함유된 에탄올 탈수 부분을 5분 동안 배양하고 슬라이드를 자연 건조시킵니다. 그런 다음 각 슬라이드에 커버 슬립을 장착하고 광학 현미경으로 샘플을 관찰합니다. 방금 시연된 바와 같이 파라핀 포매 조직의 헤마톡실린 및 에오신 염색은 대부분 촉각 핵과 세포질에서 밝혀지며, 이는 이 방법에 의한 세포 샘플의 우수한 형태학적 보존을 시사합니다.그러나 제대로 준비되지 않은 세포 블록은 샘플이 적절하게 염색되더라도 형태가 불량하고 불규칙한 표지를 나타냅니다. 세포골격 관련 단백질 2는 일반적으로 응축된 염색질, 유사분열 방추체 및 세포질 내에서 관찰됩니다. 응축된 염색질에서 두 가지 염색된 세포골격 관련 단백질이 있는 세포만이 유사분열 세포인 반면, 혈청이 결핍된 HeLa 세포 배양 집단 내에서 세포골격 관련 단백질 두 개의 양성 세포는 거의 발견되지 않습니다.대부분의 고도의 유사분열 HeLa 세포는 Ki-67 양성이며 세포핵에서 Ki-67 염색이 관찰됩니다. 혈청이 결핍된 HeLa 세포의 약 절반만이 이 증식 마커를 발현합니다. 이 기술을 한 번 숙달하면 제대로 수행하면 6시간 안에 완료할 수 있습니다.이 절차를 시도하는 동안 좋은 응고를 만들기 위해 세포를 적절한 밀도로 희석하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 고정 세포의 유세포 분석과 같은 다른 방법을 수행하여 동기화 중 세포 주기 단계에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 배양된 세포의 형태학적 정보를 보존하면서 세포주에서 발현 프로파일링을 탐구하기 위해 간 병리학 분야의 미래를 위한 길을 열었습니다.이 동영상을 시청한 후에는 면역세포화학을 수행하는 방법과 배양된 세포에서 혈장 트롬보플라스틴 블록을 준비하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 자일렌과 같은 위험한 시약으로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 장갑과 실험복을 착용하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

determination-protein-expression-level-cultured-cells

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

여기 수량 immunofluorescence, 이미지 분석, 이질의 통계 측정을 사용하여 종양이 자료 histological 섹션에 분자 이질을 계량하는 방법을 설명합니다. 방법은 임상 biomarker 개발 및 분석에 사용하기위한 것입니다.

양적 Immunofluorescence를 사용하여 종양의 단백질 표현의 이질 매핑

이 비디오는 단순 포진 바이러스-1 감염에서 감염된 세포 단백질 0, ICP0 이동을 모니터링하는 방법을 보여줍니다. Post-de novo synthesis, ICP0는 핵으로 전위되었다가 나중에 감염이 진행되는 동안 세포질로 이동합니다. 면역형광 현미경 검사는 단백질의 세포 내 국소화를 밝히고 분석하여 감염 단계 전반에 걸친 단백질의 이동에 대한 통찰력을 제공합니다.

감염된 세포의 바이러스 단백질 국소화를 위한 면역형광 기술

여기에서는 단백질의 형광 강도를 적절한 내부 표준물질의 농도로 정규화하여 중심체에서 단백질의 수준 변화를 측정하기 위해 새로운 정량적 형광 분석법이 개발되었습니다.

정량 면역 형광 분석은 중심체에서 단백질 수준의 변화를 측정하기 위해

Immunohistochemistry는 조직 내 단백질 국소화 및 발현을 평가하기 위한 강력한 실험실 기술입니다. 현재의 반자동 정량 분석 방법은 주관성을 도입하고 종종 재현성 없는 결과를 생성합니다. 여기에서는 다중 스펙트럼 이미징을 사용하여 multiplexed immunohistochemistry 및 단백질 발현 및 공동 국소화의 객관적인 정량화를 위한 방법을 설명합니다.

멀티 플렉스 면역 조직 화학적 염색 및 멀티 스펙트럼 영상을 사용하여 단백질 발현 및 공동 현지화의 정량

속됨 부정맥은 종종 하나 이상의 이온 채널의 표면에 전달 변경 돌연변이에 의해 야기된다. 여기서는 TSA-201 세포에서 발현 된 재조합 이온 채널의 상대적 총 세포 표면 단백질 발현의 정량 분석을 제공하기 위해 유세포 적응.

유동 세포 계측법을 사용하여 재조합 이온 채널의 상대 셀 표면 및 전체 식의 결정

포 르 말린 조정의 파라핀 끼워 넣어진 조직 샘플 (FFPE)에 관심사의 단백질을 측정 하는 수단으로 이미지 분석와 결합 하 여 면역 형광 조직학 유효성을 양적 immunoblotting 사용 하 여를 설명 합니다. 우리의 결과 일상적인 생 검 견본에 있는 바이오 마커 단백질의 상대적 수량을 ascertaining에 대 한 면역 형광 조직학의 유틸리티를 보여 줍니다.

면역 형광 측정 바이오 마커 단백질 일상적인 조직 샘플에 대 한 유효성을 검사 하는 표준으로 세포의 양적 Immunoblotting

Neurospheres 3D 문화로 성장 glioma 생물학을 공부 하는 강력한 도구를 구성 합니다. 여기 선물이 immunohistochemistry 파라핀 포함 통해 glioma neurospheres의 3 차원 구조를 유지 하면서 수행 하는 프로토콜. 이 메서드는 stemness 등 신경 분화 glioma neurosphere 속성의 특성을 수 있습니다.

Immunohistochemistry 파라핀 임베디드 3D Glioma Neurosphere 문화에 의해 Glioma 바이오 마커의 평가

여기에 제시된 것은 면역 조직 화학을위한 포르말린 고정, 파라핀 내장 세포 펠릿 제어를 생성하기위한 프로토콜입니다.

포르말린 고정, 파라핀 포매 세포 펠릿 면역조직화학 대조군을 위한 표준화된 공정

이 프로토콜은 초파리의 눈 / 더듬이 가상적인 디스크 (EAD에게)에서 형광 표시, 유 전적으로 정의 클론 종양을 생성하는 방법을 보여줍니다. 그것은 세 번째 령 유충과 방법을 시각화하고 유전자 발현 변화와 종양 침입을 정량화를 처리하는 방법에서 EAD 뇌를 해부하는 방법에 대해 설명합니다.

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

Multiparameter fluorescence immunohistochemistry는 종양의 미세 환경에서 면역 세포 집단의 수, 상대 분포 및 위치를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 이 원고는 구강 인두 암에서 T 세포 subpopulation을 분석하는이 기술의 사용을 설명합니다.

포르말린 - 고정, 파라핀 - 임베디드 인간 구강 성 편평 세포 암종 샘플에서의 T 세포 아군의 4 색 형광 면역 조직 화학

배우세요 파라핀에 포매된 세포 블록을 이용한 면역세포화학 분석법으로 증식 마커를 평가하는 방법을. HeLa 세포 배양에서 세포 형태를 보존하며 단백질 발현 수준을 정확하게 측정할 수 있습니다.

Immunocytochemistry 파라핀 끼워 넣어진 셀 블록에 의해 경작된 한 세포에 단백질 표정 수준 결정

더 많은 동영상 탐색