September 7th, 2018
상호 빛 전자 현미경 검사 법 (클레 멘 타인) 메서드는 이전 가벼운 현미경 검사 법 (LM)에 의해 선택 된 셀에 전자 현미경 (EM)를 통해 바이러스-유도 된 세포내 구조 이미지에 적용 됩니다. LM 및 EM 바이러스-호스트 상호 작용의 통합된 보기를 달성 하기 위해 하이브리드 이미징 접근으로 결합 됩니다.
이 방법은 세포막에 있는 생물 단백질이 어떻게 생물 복제 및 조립을 선호하는 환경을 조성하는지에 대한 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 여기에 결합된 두 가지 기술적 초석은 첫 번째는 라이브 셀 이미징과 전자 현미경 간의 상관 관계이고 두 번째는 고압 동결입니다. 이 방법은 바이러스 소스 상호 작용을 해결하기 위해 설계되고 성공적으로 활용되었지만 세포 생물학의 다양한 응용 분야로 쉽게 일반화할 수 있습니다. 이 방법의 시각적 시연은 성공에 대한 실제 경험이 필요한 많은 단계, 특히 고압 동결에 의한 극저온 고정 및 후속 단계가 필요하기 때문에 매우 중요합니다. 먼저 영숫자 패턴이 새겨진 패턴이 있는 사파이어 디스크를 15ml 원추형 원심분리 튜브에 넣고 디스크를 에탄올로 철저히 세척합니다. 세척된 사파이어 디스크를 건조를 위해 여과지가 깐 페트리 접시에 넣고 길고 얇은 핀셋을 사용하여 건조된 사파이어 디스크를 유리 슬라이드로 옮깁니다. 4배 배율에서 도립 현미경을 사용하여 모든 사파이어 디스크의 좌표 패턴을 읽을 수 있는지 확인합니다. 그런 다음 자외선 가교제로 5분 동안 디스크를 소독합니다. 생물 안전 캐비닛에서 세포 배양 배지의 절반을 세포 배양 접시에 넣고 긴 핀셋을 사용하여 사파이어 디스크를 조심스럽게 접시에 옮깁니다. 그런 다음 1x10 씨를 뿌립니다.
이 기사는 바이러스 유도 세포내 구조를 시각화하기 위한 상관 광학 전자 현미경(CLEM) 방법을 제시합니다. 광학 현미경(LM)과 전자 현미경(EM)을 통합함으로써 연구자들은 바이러스-숙주 상호작용에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.