Sperm Collection of Differential Quality Using Density Gradient Centrifugation

Muslah Uddin Ahammad; Zachery Ryan Jarrell; Andrew Parks Benson

doi:10.3791/58833

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

Sperm Collection of Differential Quality Using Density Gradient Centrifugation

조밀도 기온 변화도 원심 분리를 사용 하 여 차동 품질의 정자 컬렉션

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03:28 min

November 29, 2018

DOI: 10.3791/58833-v

Muslah Uddin Ahammad*¹, Zachery Ryan Jarrell*¹, Andrew Parks Benson¹

¹Department of Poultry Science,University of Georgia

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study explores the application of density gradient centrifugation (DGC) in sperm physiology research, specifically focusing on the technique's ability to separate sperm based on quality. The DGC method provides insights into sperm quality differences and can also be adapted for other biological samples.

Key Study Components

Research Area

Sperm physiology
Fertility biomarker exploration
Density gradient separation techniques

Background

DGC helps answer questions regarding chemical determinants of sperm quality.
The technique effectively separates samples by quality.
It can be applied to various biological samples beyond sperm.

Methods Used

Density gradient centrifugation (DGC)
Preparation of Percoll density gradient solutions
Centrifugation and collection of distinct sample layers

Main Results

Three distinct layers of sperm quality were obtained: high, medium, and low quality.
Differences in viability, mobility, and penetrability of sperm were observed.
The technique demonstrates effective separation for further biological analysis.

Conclusions

The study illustrates the effectiveness of DGC in differentiating sperm quality.
Implications for further research in sperm physiology and fertility.

Frequently Asked Questions

What is density gradient centrifugation?

Density gradient centrifugation is a technique used to separate components based on their density using a centrifugal force.

How can DGC be applied beyond sperm samples?

DGC can also be applied to other types of samples, such as mixed cell types or subcellular components with varying densities.

What are the main advantages of using DGC for sperm quality analysis?

The main advantages include the ability to separate large quantities of samples by quality and its adaptability compared to alternative methods.

What factors influence the success of the DGC technique?

Success relies on careful preparation of the gradient and proper collection of isolated layers after centrifugation.

What are the main outcomes of using DGC in this study?

The study successfully identified distinct layers of sperm with varying qualities, which can aid in fertility research.

What additional applications can this technique have?

Aside from sperm analysis, DGC can be utilized to explore biomarker research in various biological and medical fields.

이 논문에서 우리 밀도 그라데이션 원심 분리 기술 및 정자 생리학 연구에 응용 프로그램의 성능에 설명 하고자 합니다.

이 방법은 정자 질의 화학 적 결단체와 같은 정자 생리학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다른 방법에 비해 적응성뿐만 아니라 품질에 의해 샘플의 대량을 분리 할 수있는 능력입니다. 이 방법은 정자 품질의 차이에 대한 통찰력을 제공 할 수 있지만, 그것은 또한 다른 밀도를 가진 혼합 세포 유형 또는 세포 전 성분과 같은 다른 샘플에 적용 될 수있다.

시작하려면 두 개의 별도 튜브에 2 개의 3 밀리리터 Percoll 희석기를 만듭니다. 깨끗한 테스트 튜브에서 PBS 2 밀리리터로 정액 샘플 1 밀리리터를 희석시 희석시. 부드럽게 파이프하여 용액을 혼합합니다.

멸균 원물 튜브에 낮은 밀도 Percoll 솔루션의 3 밀리리터를 추가합니다. 그런 다음, 조심스럽게 파이펫 3 낮은 밀도 Percoll 솔루션 아래 고밀도 Percoll 용액의 밀리리터. 원문 관을 45도 각도로 기울이는 동안, 페콜 밀도 그라데이션 위에 희석된 정액 샘플의 파이펫 3 밀리리터.

빈 튜브를 준비한 후, 원심분리기는 20분 동안 1500 Gs에서 두 튜브를 원심분리합니다. 원심 분리 후 욕조에서 세 개의 뚜렷한 정액 층이 형성되었는지 확인하십시오. 파이펫을 사용하여 맨 위 층부터 시작하여 중간 층으로 시작하여 튜브 의 하단에 하드 펠릿으로 끝나는 세 층의 정액층을 수집합니다.

각 층을 멸균 마이크로 원심분리기 튜브로 이송합니다. PBS의 1.5 밀리리터로 각 정액 샘플을 희석시키고 1500 Gs에서 샘플을 1500 Gs로 10분 동안 희석시. 마지막으로, 상체를 부어 운동성 버퍼로 펠릿을 재구성합니다.

이 프로토콜에서 Percoll 밀도 그라데이션 원심 분리 기술 또는 PDGC는 정액 샘플을 세 개의 별개의 층으로 분리하는 데 사용되었습니다. 정자는 고밀도 용액, 고밀도 및 저밀도 솔루션 사이의 중간 품질 층, 저밀도 솔루션 위의 낮은 품질 층으로 분리됩니다. 정자 품질에 있는 이 다름은 생존, 이동성 및 침투성에 있는 다름에 의해 입증됩니다.

이 절차를 시도하는 동안 샘플을 실온으로 가져와야한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. PDGC의 성공은 그라데이션의 신중한 준비뿐만 아니라 격리 된 레이어의 신중한 수집에 의존한다. 개발 후, 이 기술은 조류 종에서 다산의 바이오 마커를 탐구하는 정자 perdiomics의 분야에서 우리의 연구를위한 길을 열었습니다.

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