Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Yuxuan Xiao; John M. Lamar

doi:10.3791/60582

배열된 라이브러리의 중간 처리량 스크리닝및 이중 루시퍼라제 기반 리포터를 이용한 전사 계수 조절기 ...

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Cancer Research

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JoVE Journal Cancer Research

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

배열된 라이브러리의 중간 처리량 스크리닝및 이중 루시퍼라제 기반 리포터를 이용한 전사 계수 조절기 식별

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11:32 min

March 27, 2020

DOI: 10.3791/60582-v

Yuxuan Xiao¹, John M. Lamar¹

¹Department of Molecular & Cellular Physiology,Albany Medical College

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

전사 인자의 새로운 조절자를 확인하기 위해, 우리는 이중 luciferase 기반 의 전사 기자 분석을 사용하여 배열 된 렌티 바이러스 또는 레트로 바이러스 RNAi 라이브러리를 선별하는 접근 법을 개발했습니다. 이 방법은 단일 실험에서 수백 개의 후보를 선별하는 빠르고 비교적 저렴한 방법을 제공합니다.

이 프로토콜은 암세포에 있는 전사 요인의 새로운 레귤레이터를 확인하기 위하여 배열된 렌즈피바이러스 또는 레트로바이러스 분석 라이브러리를 스크린하는 데 이용될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 신속하고 중간 처리량이며 저렴하며 대부분의 조사관이 일반적으로 접근 할 수있는 장비와 시약을 사용한다는 것입니다. 라이브러리의 각 렌즈피바이러스 벡터를 확장하고 정화하려면 먼저 96웰 의 깊은 웰 플레이트에 암피실린 밀리리터 당 100 마이크로그램으로 보충된 Luria 국물의 1.3 밀리리터를 추가합니다.

글리세롤 재고 2마이크로리터로 각각 37도, 분당 225회전에서 하룻밤 동안 배양할 수 있습니다. 다음 날, 원심 분리를 위한 개별 1.5 밀리리터 미세원심분리기 튜브로 각 박테리아 배양을 전송합니다. 제조업체의 지침에 따라 적절한 세균 미니프렙 키트로 각 벡터를 정화합니다.

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