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DOI: 10.3791/63655-v
Mohammad N. Qasim*1,2, Ashley Valle Arevalo*1,2, Akshay D. Paropkari*1,2, Craig L. Ennis1,2,4, Suzanne S. Sindi3, Clarissa J. Nobile1,4, Aaron D. Hernday1,4
1Department of Molecular and Cell Biology,University of California, Merced, 2Quantitative and Systems Biology Graduate Program,University of California, Merced, 3Department of Applied Mathematics,University of California, Merced, 4Health Sciences Research Institute,University of California, Merced
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines a method for conducting cleavage under targets and release using nuclease (CUT&RUN) in the human fungal pathogen Candida albicans. The protocol includes detailed experimental procedures and computational data analysis for profiling transcription factor-DNA binding interactions.
이 프로토콜은 인간 곰팡이 병원균 칸 디다 알비칸스에서 뉴클레아제(CUT&RUN)를 사용하여 표적 하에서의 절단 및 방출을 위한 실험 방법 및 데이터 분석 워크플로우를 기술한다.
이 프로토콜은 전사 인자 코딩 유전자의 에피토프 태깅부터 전산 데이터 분석을 통한 전사 인자-DNA 결합 상호작용의 게놈 전체 프로파일링을 수행하는 것에서부터 CUT&RUN을 통해 칸디다 알비칸스에서 전사 인자-DNA 결합 상호작용의 게놈 전체 프로파일링을 수행하는 모든 실험 절차를 상세히 기술한다. 이것은 더 접근하기 쉽고, 빠르고, 민감하고, 덜 비싼 기술이며, 기존의 ChIP-chip 및 ChIP-seq 접근법보다 더 높은 품질의 데이터를 제공합니다. 우리의 프로토콜은 생물막 또는 플랑크톤 배양물에서 분리 된 칸디다 알비 칸스 세포를 위해 개발되었지만 거의 모든 좋은 형태의 칸디다 알비 칸스 세포에 적응시키는 것이 실용적이어야합니다.
세포 현탁액을 인큐베이션한 후, 다섯 마이크로리터 분취량을 새로운 PCR 튜브 내로 옮긴다. 다섯 마이크로 리터의 분리 된 핵과 이전에 섭씨 네 도에 저장된 손상되지 않은 세포의 5 마이크로 리터 분취량에 calcofluor-white 및 SYTO 13의 각각 하나의 마이크로 리터를 추가하십시오. 어둠 속에서 섭씨 30도에서 30 분 동안 배양하십시오.
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