Study of the Functions and Activities of Neuronal K-Cl Co-Transporter KCC2 Using Western Blotting

Sunday Solomon Josiah; Nur Farah Meor Azlan; Asami Oguro-Ando; Jinwei Zhang

doi:10.3791/64179

웨스턴 블로팅을 이용한 뉴런 K-Cl 공동수송체 KCC2의 기능 및 활성 연구

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Biochemistry

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Study of the Functions and Activities of Neuronal K-Cl Co-Transporter KCC2 Using Western Blotting

웨스턴 블로팅을 이용한 뉴런 K-Cl 공동수송체 KCC2의 기능 및 활성 연구

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10:08 min

December 9, 2022

DOI: 10.3791/64179-v

Sunday Solomon Josiah¹, Nur Farah Meor Azlan¹, Asami Oguro-Ando¹, Jinwei Zhang¹

¹Institute of Biomedical and Clinical Sciences, Medical School, Faculty of Health and Life Sciences,University of Exeter, Hatherly Laboratories

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

본 프로토콜은 뉴런 K-Cl 공동 수송체 KCC2의 기능 및 활성을 연구하기 위한 웨스턴 블로팅 기술의 적용을 강조합니다. 상기 프로토콜은 웨스턴 블로팅을 통한 키나아제 조절 부위 Thr906/1007에서의 KCC2 인산화의 조사를 기술한다. 또한 KCC2 활성을 확인하는 추가 방법이이 텍스트에서 간략하게 강조 표시됩니다.

이 프로토콜은 키나아제 분자 크기 인산화를 직접 평가하여 KCC2 조절과 관련된 메커니즘을 이해하는 데 도움이 될 수 있으므로 생리적 기능과 활성을 밝힐 수 있습니다. 단백질 발현이 매우 미세한 경우에도 관련 분자의 복잡한 혼합물에서 관심 단백질과 같은 분자를 식별하고 특성화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술은 복잡한 시스템의 단백질 분석 및 비정상적인 조직 기능 또는 질병의 기저에 있는 잠재적 메커니즘을 식별하는 데 필수적인 도구입니다.

절차를 시연하는 것은 일요일 솔로몬 요시야, 내 실험실의 박사 과정 학생입니다. 섭씨 37도의 비드 배스에서 모든 시약을 미리 무장시키고 안정적으로 형질전환된 래트 KCC2b 인간 배아 신장 293 세포를 비드 배스에서 완전히 해동하는 것으로 시작한다. 그런 다음 세포를 냉동 바이알 튜브에서 5 밀리리터의 신선한 배지가 들어있는 원심 분리 튜브로 옮기고 세포를 1, 200G에서 3-5 분 동안 원심 분리합니다.

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