Name: Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 배우세요 Drosophila를 이용한 경험 의존적 시냅스 리모델링 메커니즘을 탐구하는 방법입니다. 후각 자극으로 유도된 시냅스 가지치기 과정을 분석하여 성인 뇌 가소성 재활성화 가능성을 밝힙니다.

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<meta charset="utf8"></head><body>후각 경험 유도 시냅스 리모델링(Olfactory Experience-Induced Synaptic Remodeling in Drosophila's Juvenile Brain)

<ol><li>English, S., Barreaux, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+sensitive+periods+in+development%3A+insights+from+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opinion+Behav+Sci%22%5BJournal%5D)">The evolution of sensitive periods in development: insights from insects.</a> Curr Opinion Behav Sci. 36, 71-78 (2020).</li>
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<li>Chodankar, A., Sadanandappa, M. K., Raghavan, K. V., Ramaswami, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulus-selective+regulation+of+a+critical+period+for+interneuron+plasticity+in+the+drosophila+antennal+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glomerulus-selective regulation of a critical period for interneuron plasticity in the drosophila antennal lobe.</a> J Neurosci. 40 (29), 5549-5560 (2020).</li>
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<li>Gugel, Z. V., Maurais, E. G., Hong, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+exposure+to+odors+at+naturally+occurring+concentrations+triggers+limited+plasticity+in+early+stages+of+Drosophila+olfactory+processing%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Chronic exposure to odors at naturally occurring concentrations triggers limited plasticity in early stages of Drosophila olfactory processing.</a> eLife. 12, 85443(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>냄새 노출용</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drosophila vials</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-110</td><td></td></tr><tr><td>에틸 부티레이트</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E15701</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽&nbsp;</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>시그마 Aldrich</td><td>M3516</td><td></td></tr><tr><td>냄새 챔버</td><td>Glasslock</td><td></td><td></td></tr><tr><td>페인트 브러쉬</td><td>Winsor & Newton</td><td>Series 233</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Thermofisher</td><td>S37440</td><td></td></tr><tr><td>와이어 메쉬</td><td>Scienceware</td><td>378460000</td><td></td></tr><tr><td>Brain Dissection</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, 190 proof</td><td>Decon Labs</td><td>2801</td><td>70%</td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-30</td><td>Dumont #5</td></tr><tr><td>파라포름알데히드&nbsp;</td><td>전자 현미경 과학</td><td>157-8</td><td>4%</td></tr><tr><td>페트리 접시</td>로 희석 <td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>08-757-100B</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>1x 설탕으로</td> 희석 <td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>BP220-1</td><td></td></tr><tr><td>실가드</td><td>전자 현미경 과학</td><td>24236-10</td><td></td></tr><tr><td>트리톤-X 100</td><td>피셔 사이언티픽;</td><td>BP151-100</td><td></td></tr><tr><td>Brain Immunocytochemistry</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>488 염소 항닭</td><td>Invitrogen</td><td>A11039</td><td></td></tr><tr><td>546 염소 항쥐</td><td>Invitrogen</td><td>A11081</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>치킨 안티-GFP</td><td>Abcam</td><td>13970</td><td></td></tr><tr><td>커버슬립</td><td>Avantor</td><td>48366-067</td><td>25 x 25 mm</td></tr><tr><td>양면 테이프</td><td>Scotch</td><td>34-8724-5228-8</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G&nbsp;</td><td>전자 현미경 과학</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td>75 x 25 mm</td></tr><tr><td>매니큐어</td><td>Sally Hansen</td><td>109</td><td>Xtreme Wear, Invisible</td></tr><tr><td>Normal goat serum</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G9023</td><td></td></tr><tr><td>Rat anti-CadN</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>AB_528121</td><td></td></tr><tr><td> 컨포칼/분석</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>어떤 컴퓨터/노트북</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>Zeiss 510 META&nbsp;</td></tr><tr><td>피지 소프트웨어</td><td>피지</td><td></td><td>버전 2.14.0/1.54f</td></tr></tbody></table>

experience-dependent remodeling of juvenile brain olfactory sensory neuron synaptic connectivity in an early-life critical period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period

그림 1 은 후각 경험에 따른 임계 기간 냄새 노출 및 뇌 영상 방법에 대한 워크플로우를 보여줍니다. 이 프로토콜은 에클로젼 직전에 pharate dark pupae의 연령 일치로 시작합니다(그림 1A). 번데기를 4시간 동안 냄새 챔버에 넣은 다음 새로 닫힌 성체를 차량 제어 또는 투여된 EB 냄새 챔버에서 새 바이알로 뒤집습니다(그림 1B). 우리는 일반적으로 24시간 동안 냄새 물질에 노출되지만 어떤 기간이든 가능합니다. 냄새에 노출된 후 뇌 절개는 흉부에서 머리를 제거한 다음 미세한 집게로 큐티클 외골격을 제거하는 것으로 시작됩니다(그림 1C). 분리된 뇌는 이미징을 방해할 수 있는 관련 조직을 청소한 다음 즉시 PBS에서 4% 파라포름알데히드와 4% 자당으로 고정합니다. 30분의 짧은 고정은 뇌 조직의 좋은 무결성을 위해 충분합니다. 면역세포화학적 프로토콜은 1시간 블록(예: BSA, NGS)으로 시작하여 1차 항체(예: anti-GFP, -CadN)에서 하룻밤 동안 배양한 다음 2차 항체에서 2시간 동안 잠깐 배양합니다(그림 1D). 라벨이 부착된 뇌는 더듬이엽을 가장 잘 촬영할 수 있도록 뇌 등쪽 표면이 위로 향하게 하여 밀봉된 커버슬립 아래의 유리 슬라이드에 장착됩니다(그림 1E). 모든 샘플은 유전자형과 경험 조건 모두에 대해 맹검되어 나중에 해독할 수 있도록 슬라이드에 코딩된 지정을 표시합니다. 63x 오일 이멀젼 대물렌즈가 장착된 레이저 스캐닝 컨포칼 현미경은 중추 뇌 더듬이 엽을 이미지화하는 데 사용됩니다(그림 1F). 사용되는 형광단에 가장 적합한 레이저 라인(예: Argon 488 및 HeNe 543)을 선택하여 주변 사구체의 맥락에서 VM7의 Or42a 후각 감각 뉴런 신경 분포를 이미지화합니다.
VM7 사구체에서 Or42a 뉴런 신경 분포의 전체 Z-stack 투영을 캡처하기 위해 최적의 게인, 오프셋, 이미징 해상도 및 광학 슬라이스 두께를 선택하는 것이 중요합니다. 비교할 모든 유전자형과 경험 조건은 동일한 현미경 설정으로 이미징됩니다. Z-stack은 주로 신경 분포 볼륨 7,14에 의해 평가되는 경험 종속 변화와 함께 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 처리됩니다. 체적 측정을 계산하는 방법에는 두 가지가 있습니다. ImageJ 올가미 함수를 사용하여 신경 분포 영역을 슬라이스 단위로 계산한 다음 각 값에 각 슬라이스의 두께(μm)8,9를 곱합니다. 다른 하나는 합계 슬라이스 Z-투영을 사용하고 Z-스택 슬라이스 수에 슬라이스 두께를 곱하여 평균 볼륨을 결정합니다. 두 방법 모두 일관된 결과를 제공합니다. 부피 측정 외에도 형광 강도는 VM7 glomeruli16의 최대 강도 투영으로 평가할 수도 있습니다. 모든 픽셀의 가중치 합계는 ImageJ 합계 슬라이스 최대 투영을 통해 평가되며, 각 강도 수준의 픽셀 수를 합산하여 전체 강도 8,9를 계산합니다. 배경은 동일한 크기의 사구체 외 영역을 정량화하여 뺄 수 있습니다. 이 빼기 방법은 시간이 더 많이 걸리지만 각 뇌 샘플에서 다양한 수준의 배경 항체 라벨링을 고려하여 신경 분포 형광 강도 값의 보다 대표적인 정량화를 생성하기 때문에 더 정확합니다. 강도 측정은 Z-스택 내에서 18-30개의 광학 슬라이스(0.37 μm/슬라이스)의 일반적인 범위에서 이루어지며, 각 브레인(16)에 대해 평균화된다. 거의 모든 경우에서 신경 분포 형광 강도 및 부피 측정은 일관된 결과를 제공합니다.
모든 측정 방식에서 대표적인 결과는 흔들리지 않습니다. 생애 초기의 EB 냄새 경험은 Or42a 뉴런 신경 분포의 상당한 손실을 초래합니다. VM7 사구체는 정밀하게 매핑된 다른 더듬이엽 후각 사구체(그림 2A) 중에서 크기, 모양 및 위치에 의해 신뢰할 수 있게 식별될 수 있으며, 항신경 cadherin(CadN)을 사용한 사구체 표지와 결합된 Or42a-mCD8::GFP 멤브레인 라벨의 표적 발현에 의해 식별될 수 있습니다. 그림 2B). 냄새를 맡는 차량 제어(미네랄 오일)에 시간 동안 노출되면 Or42a 뉴런 신경 분포가 처리되지 않은 정상 동물과 구별할 수 없게 됩니다. 그럼에도 불구하고, 폐폐 후 처음 몇 일 동안(dpe) EB 냄새 경험은 시냅스 사구체 가지치기를 유발합니다(그림 2C). 이 가지치기 메커니즘은 짧은 초기의 임계 기간(critical period 8,10)에 전적으로 국한되어 있다. 우리는 일반적으로 24시간 냄새 노출을 사용하여 VM7 사구체 시냅스 가지치기와 그에 따른 청소년 초파리 뇌의 신경 분포 부피 감소를 평가합니다. 냄새 나는 차량 제어 장치(미네랄 오일)에 24시간(0-1 dpe) 노출되면 양쪽 뇌 반구 더듬이엽의 VM7 시냅스 사구체(흰색 점선 원)에서 정상적이고 조밀한 Or42a-mCD8::GFP 신경 분포(녹색)가 유지됩니다(그림 2D, 왼쪽). 현저한 대조적으로, 미네랄 오일에 용해 된 25 % EB 냄새 물질에 24 시간 노출 (0-1 dpe)은 Or42a-mCD8 :: GFP 신경 분포 (녹색)의 강한 가지 치기와 시냅스 사구체 부피의 손실을 초래합니다 (그림 2D, 오른쪽). 이러한 결과는 시각적으로 명확하고 일관되게 명확합니다. 이 냄새 경험 프로토콜의 가장 큰 속성 중 하나는 뇌 영상 결과의 선명도이며, 이는 또한 간단한 신경 분포, 형광 강도 및 부피 정량화에 매우 적합합니다.
이 냄새 경험 프로토콜의 주요 장점은 임계 기간 시냅스 가지치기 동안 시간적 제한 및 냄새 용량 의존적 메커니즘 연구에 활용할 수 있다는 것입니다. VM7 사구체에서 EB 구동 Or42a 뉴런 시냅스 제거를 위해 리모델링 메커니즘은 주로 초기 유년기(0-2 dpe)로 제한되며, 가장 높은 EB 노출 수준8에서 경미한 조절을 제외하고는 성숙기(7-9 dpe)에서 감지할 수 있는 경험 의존적 시냅스 가지치기가 없습니다. 이러한 시간적 제한은 임계 기간을 정의하며, 이 타이밍 메커니즘을 이해하는 것이 중요한 목표입니다. 이 프로토콜의 또 다른 특징은 경험 의존적 시냅스 가지치기(experience-dependent synaptic pruning)가 EB 용량 의존적(EB dose-depended)이라는 것입니다(그림 3). EB 냄새 물질이 0% 인 냄새 물질 차량 제어 장치(미네랄 오일)에 시간 동안 노출되면 VM7 시냅스 사구체의 정상적인 Or42a 신경 분포가 발생하며, 이는 처리되지 않은 동물과 구별할 수 없습니다. Or42a 뉴런 신경 분포 3차원 부피를 계산하면 정상적인 청소년 뇌의 전형적인 크기(2260 μm3; 그림 3A, 왼쪽). 대표적인 결과는 EB 냄새 농도가 증가하면 점진적으로 더 큰 시냅스 사구체 가지치기를 유발한다는 것을 보여줍니다. 예를 들어, 15% EB 냄새 물질에 24시간(0-1 dpe)을 노출시키면 명확하고 일관된 신경 손실이 발생합니다(그림 3A, 가운데). 3D 신경 분포 부피의 정량화는 차량 제어 장치에 비해 현저한 감소를 보여줍니다(760 μm3 대 2260 μm3). 25% EB 냄새 물질에 24시간 노출(0-1 dpe)하면 훨씬 더 많은 신경 손실이 발생합니다(281 μm3; 그림 3A, 오른쪽). 이러한 EB 냄새 농도 범위에 대한 대표적인 정량화는 형광 강도(그림 3B) 및 신경 분포 부피(그림 3C)에 대해 일관된 결과를 보여줍니다. 이러한 용량 의존성은 시냅스 가지치기를 예방하는 수단을 연구할 수 있을 뿐만 아니라 더 낮은 냄새 노출로 가지치기를 강화하여 증가된 시냅스 사구체 리모델링을 입증할 수 있습니다. 일부 선행 연구에서는 이 프로토콜과 함께 다른 냄새 물질을 사용하여 사구체 부피를 증가시키는 반대 효과를 보여주었다10. 임계 기간에 EB 냄새 물질에 노출되면 항상 눈에 띄고 쉽게 감지할 수 있는 시냅스 사구체 가지치기가 발생합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66629/66629fig01.jpg"> 그림 1: Drosophila juvenile brain의 냄새 노출 연구 흐름도. (A) Pharate dark pupae (25 ° C에서 번데기 후 90 + 시간)를 수집하여 냄새 챔버에 넣습니다. 냄새가 나는 조건에서는 4 시간 동안 에클로전이 허용되고 어린 파리는 신선한 바이알로 옮겨집니다. (B) 연령에 맞는 파리는 차량 제어(100% 미네랄 오일) 또는 에틸 부티레이트(EB; 미네랄 오일의 경우 % v/v) 경험 조건으로 나뉩니다. 가는 철망(삽입)은 냄새 물질에 접근할 수 있도록 합니다. 파리는 일반적으로 추가로 20시간 동안 노출되어 총 24시간 동안 노출되며, 폐폐 후 0-1일(DPE)이 됩니다. (C) 파리는 먼저 머리를 제거하여 해부한 다음 미세한 집게를 사용하여 큐티클 외골격을 섬세하게 제거하고 어린 뇌를 분리합니다. 고립된 뇌는 주변의 모든 조직과 돌출된 기관을 제거합니다. (D) 고립된 뇌는 고정되고 차단된 다음 1차 및 2차 항체에서 순차적으로 배양됩니다. 일반적으로 사용되는 항체의 범위에는 더듬이엽 시냅스 사구체를 드러내는 일반 막 프로브와 Or42a 후각 감각 뉴런을 위한 특정 막 프로브가 포함됩니다. (E) 라벨이 부착된 뇌는 밀봉된 커버슬립 아래에 테이프 스페이서가 있는 유리 현미경 슬라이드의 장착 매체에 배치됩니다. 올바른 뇌 방향(등쪽 표면이 위로)은 더듬이엽의 최적 이미징을 위해 중요합니다. (F) 레이저 스캐닝 컨포칼 형광 현미경을 사용하여 뇌를 이미지화합니다. 모든 샘플은 이미징 및 후속 정량화 분석 전에 유전자형 및 경험 조건에 대해 블라인드 처리됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66629/66629fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66629/66629fig02.jpg"> 그림 2: 냄새 경험 의존적 임계 기간 시냅스 사구체 가지치기. (A) 더듬이엽(AL) 후각 사구체가 정확하게 매핑되어 있습니다. 몇 가지 대표적인 시냅스 사구체가 표시됩니다. Or42a 수용체 후각 감각 뉴런(OSN) 계열은 VM7 사구체를 특이적으로 자극합니다. (B) Or42a-mCD8::GFP 태그가 붙은 뉴런(녹색)은 모든 AL 시냅스 사구체(자홍색)의 N-Cadherin(CadN) 항체 표지를 통해 뇌의 왼쪽(L)과 오른쪽(R)에 있는 쌍을 이루는 VM7 사구체를 조밀하게 신경 분포시킵니다. 플라이 라인은 w1118입니다. 또는42a-mCD8::GFP/+. (C) 차량 제어 조건(100% 미네랄 오일, 왼쪽) 및 청소년 임계 기간 동안 에틸 부티레이트 노출(미네랄 오일의 % EB v/v, 오른쪽)에서 VM7 시냅스 사구체의 Or42a OSN 신경 분포의 개략적인 그래픽 표현. 경험에 의존하는 신경 분포 가지치기는 시냅스가 제거되고 축삭이 손실되어 신경 분포량이 감소하는 초기 EB 노출에서만 발생합니다. (D) 한 쌍의 VM7 시냅스 사구체의 Or42a OSN 신경 분포의 대표적인 공초점 이미지(점선 흰색 윤곽선 원; Or42a-mCD8::GFP, 녹색) 오일 차량 제어(왼쪽) 및 24시간(0-1 dpe) 동안 25% EB 노출(오른쪽) 후. EB 냄새 경험은 시냅스 가지치기와 신경 분포 부피의 손실을 유발합니다. 이 경험 의존적 메커니즘은 시간적으로 제한되며 폐쇄 후 처음 며칠 동안 잘 정의된 후각 결정적 기간 내에서만 일시적으로 되돌릴 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66629/66629fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66629/66629fig03.jpg"> 그림 3: EB 용량 의존적 시냅스 사구체 신경 분포 형광 강도 및 부피 정량화. (A) 0-1 dpe에서 냄새 차량 미네랄 오일 컨트롤(0% EB, 왼쪽), 15% EB(가운데) 또는 25% EB(오른쪽)에 노출된 VM7 시냅스 사구체(녹색)에서 Or42a-mCD8::GFP 표지된 신경 분포. 아래: 사구체 신경 분포가 윤곽선으로 표시된 동일한 이미지(흰색 원)와 3차원 신경 분포 부피가 계산되었습니다. 차량 제어는 Or42a 뉴런에 의한 VM7 시냅스 사구체 신경 분포를 가지고 있어 처리되지 않은 동물과 구별할 수 없습니다. 15%의 EB 냄새 물질 노출에 대한 임계 기간 경험은 명백한 시냅스 사구체 가지치기를 초래하며, 이 경우 3차원 신경 분포 부피가 66% 감소합니다. 더 높은 수준의 25% EB에 노출되면 가지치기가 더 커지며 이 경우 시냅스 사구체 부피가 거의 90% 손실됩니다. 따라서 냄새 경험이 증가함에 따라 용량 의존적 가지 치기를 이미지 할 수 있습니다. (B) 0-1 dpe에서 냄새 차량 제어 (오일, 녹색), 15 % EB (중간, 주황색) 또는 25 % EB (오른쪽, 검은 색)에 노출 된 VM7 시냅스 사구체 내 Or42a-mCD8 :: GFP 표지 형광 강도의 대표 결과. (C) 동일한 임계 기간 냄새 노출 조건에서 VM7 사구체 3차원 신경 분포 볼륨의 대표 결과. 산점도는 평균이 SEM을 ±하는 모든 개별 데이터 점을 표시합니다. 유의성은 p≤0.05 (*), p ≤ 0.01 (**), p ≤ 0.001 (***) 및 p ≤ 0.0001 (****)로 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66629/66629fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

Early-life olfactory sensory experience induces dramatic synaptic glomeruli remodeling in the Drosophila juvenile brain, which is experientially ...

experience-dependent-remodeling-juvenile-brain-olfactory-sensory

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

후각 망울의 성인에서 태어난 뉴런은 optogenetically Channelrhodopsin2 - 표현 이식 미니어처와 함께 주동이의 철새 스트림과 만성 photostimulation에서 lentiviral 주사를 LED를 사용하여 조절할 수 있습니다.

만성에 대한 성인 태어나 강한 뉴런의 선택 바이러스성 전달 생체내에 Optogenetic의 자극

이 논문은 쥐의 새끼의 촉각 자극과 신경 세포의 형태의 후속 골지 - 콕스 염색에 대한 절차를 설명합니다. 촉각 자극은 가정용 먼지 떨이로 새끼를 쓰다듬어하여 주 산기 투여되는 긍정적 인 경험이다. 골지 - 콕스 염색은 전체 신경 세포의 시각화를 허용하는 신뢰할 수있는 절차입니다.

골지 콕스 염색과 돌기​​ 형태와 시냅스 연결에 대한 긍정적 인 초기 경험, 촉각 자극의 효과를 시각화

이 프로토콜은 급성 단일 나리스 폐색을 사용하여 쥐에서 측면화된 조기 냄새 선호 학습을 소개합니다. 수평적 학습은 동일한 동물 내에서 행동 결과를 조사하고 생물학적 메커니즘을 뒷받침할 수 있도록 하여 동물 간 설계로 인한 분산을 줄입니다. 이 프로토콜은 조기 냄새 학습을 뒷받침하는 분자 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

신경 회로 토대 메모리 형성을 해부에 대한 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델

우리는 뉴런 형태와 시간 경과에 따른 발달을 시각화하기 위해 전기천공법과 후속 컨포칼 레이저 스캐닝 또는 다광자 현미경에 의한 후각 감각 뉴런의 생체 내 라벨링 프로토콜을 설명합니다.

모델로 후각 시스템은 축삭 성장 패턴 및 형태를 연구하는 생체

우리는 신경 발달 기원인지 적자 특징으로 마우스 모델의 공간 학습 작업에 노출 된 다음 해마 신경 세포 활성화의 프로필을 연구하기 위해 면역 조직 화학 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은인지​​ 결핍을 특징으로 두 유전자 또는 약리학 마우스 모델에 적용될 수있다.

신경 발달 장애의 마우스 모델에서 공간 학습 후 해마 신경 세포 활동의 면역 시각화

시냅스 가소성과 기억을 제어하는 분자와 경로를 식별하는 것은 여전히 신경 과학의 주요 과제입니다. 여기에서는 청각 학습 패러다임에서 학습 및 기억 통합 중 시냅스의 분자 재편성에 관여하는 것으로 추정되는 시냅스 단백질의 상대적 정량화를 다루는 워크플로우에 대해 설명합니다.

청각 차별 학습 한 후 마우스 뇌 영역의 높은 해상도 양적 시냅틱 프로테옴 프로파일

여기, 우리는 쥐 냄새 차별 테스트는 연관 학습 작업에 기차. 이 프로토콜은 또한 두뇌에 구조적인 변화를 유도 하는 학습에 대 한 연구에 대 한 수 있습니다.

후 각 학습 및 쥐에 있는 차별의 객관적이 고 재현성 시험

이것은 조직에 저산소 손상을 줄이기 위해 얼음 차가운 NMDG-aCSF와 함께 경내 관류 및 슬라이스 절단을 활용하는 성인 및 노화 마우스 해마의 급성 슬라이스 준비를위한 프로토콜입니다. 결과 슬라이스는 여러 시간 동안 건강하게 유지되며 장기 패치 클램프 및 필드 레코딩에 적합합니다.

성인과 노화 마우스에서 해마 조각에서 저산소증 최소화

여기에 제시된 프로토콜은 동시 뇌파 검사(EEG) 및 행동 평가에 대한 정보를 실시간으로 제공합니다. 우리는 이 프로토콜과 관련된 모든 단계를 신경과학의 많은 분야, 특히 학습 및 기억 분야의 연구자들에게 매력적인 솔루션으로 논의했습니다.

해마 신경 발생을 연구하기 위한 도구로서의 무선 전기생리학 및 기억 행동 테스트의 동시 모니터링

이 프로토콜은 후각 회로 어셈블리의 연구를 위한 안테나-뇌 explant 시스템의 해부 절차, 배양 조건 및 라이브 이미징을 기술한다.

초파리의 후각 회로 어셈블리의 타임랩스 이미징 연구를위한 Explant 시스템

배우세요 Drosophila를 이용한 경험 의존적 시냅스 리모델링 메커니즘을 탐구하는 방법입니다. 후각 자극으로 유도된 시냅스 가지치기 과정을 분석하여 성인 뇌 가소성 재활성화 가능성을 밝힙니다.

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링) (동영상) | JoVE Journal

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

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