Name: 살아있는 초파리 날개 상상 디스크에서 사이톤군에 의해 매개되는 세포-세포 접촉을 평가하기 위한 GFP 상보 기반 이중 발현 시스템 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-22T12:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 학습하세요 GFP 상보 기반 이중 발현 시스템을 사용하여 살아있는 Drosophila 날개 상상 디스크에서 사이톤군에 의해 매개되는 세포-세포 접촉을 평가하는 방법을. 이 기술은 조직 성장 조절 메커니즘 연구에 활용됩니다.

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nubbin-GAL4 드라이버는 DP의 날개 주머니 영역에서 특이적으로 CD4-spGFP1-10을 발현하는 데 사용됩니다(그림 1A). PerM-LexA 드라이버(21)는 PerM에서 특이적으로 CD4-spGFP11을 발현하는 데 사용된다(그림 1A). 이 두 발현 시스템은 서로 독립적이어서 DP 및 PerM에서 서로 다른 이식유전자의 동시 특이적 발현을 허용합니다(그림 1B,C).
기본 유전 체계는 유전자형 nub-GAL4/UAS-CD4-spGFP1-10의 유충을 생성하기 위해 파리를 교배하는 것을 포함합니다. PerM-LexA/LexAop-CD4-spGFP11. 음성 대조군으로서 LexAop-CD4-spGFP11 이식유전자를 생략합니다. 다른 이식유전자(예: 단백질 코딩, 이중 가닥 RNA)는 DP 층( UAS 서열의 제어 하에) 또는 PerM( LexA 운영자의 제어 하에)에서 원하는 대로 발현될 수 있습니다.
이것은 중단할 수 없는 라이브 이미징 프로토콜입니다. 재료 준비는 ~10분으로 추정됩니다. 영상 촬영 전에 한 번에 20분 이상 해부를 수행해서는 안 됩니다. 이미징은 ~30분이 소요되며 ~1시간 이상 지속되어서는 안 됩니다. 여러 조건 또는 많은 수의 샘플의 경우 최상의 결과를 보장하기 위해 절차를 여러 라운드로 수행해야 합니다.
1. 재료 준비
<ol>
	<li>해부에 앞서 청소한 핀셋, 9웰 유리 함몰 스팟 플레이트(또는 유충 수집 및 세척에 적합한 기타 용기) 및 70% 에탄올로 해부에 사용되는 재사용 가능한 Sylgard(실리콘) 코팅 페트리 접시.</li>
	<li>70% 에탄올 세척을 수행한 다음 이미징 스페이서 를 건조된 슬라이드에 붙여 현미경 슬라이드를 준비합니다. 가위로 8웰 스트립에서 개별 웰을 잘라내고 반으로 자릅니다(그림 2A). 각 절반의 한쪽에서 보호 지지대를 제거하고 디스크가 놓일 중앙에 보호된 공간을 만들기 위해 약간 간격을 두고 슬라이드에 스페이서를 붙입니다(그림 2B). 알림: 우리의 경험에 따르면 슬라이드로 전달되는 매체의 정확한 양이 덜 중요하기 때문에 샘플 장착이 단순화됩니다. 작은 초과 부피는 커버슬립 시 틈을 통해 흘러나옵니다. 비교적 짧은 시간(일반적으로 ~1시간) 동안만 이미징했기 때문에 중간 건조에 문제가 발생하지 않았습니다.</li>
	<li>라이브 이미징 배지(보충되지 않은 슈나이더의 초파리 배지를 냉동 10mL 분취량에 보관함)를 해동하고 얼음통에 쉽게 접근할 수 있도록 보관합니다.</li>
	<li>2mL 미세 원심분리기 튜브에서 1.5mL의 배지와 200μg/mL Hoechst 33342 20μL(최종 농도 2.7μg/mL)을 혼합합니다. 튜브를 얼음 위에 보관하십시오. 참고: 이 특정 형태의 Hoechst 염료는 막 투과성이 높기 때문에 사용됩니다. 주의 : Hoechst 33342를 다룰 때는 장갑을 사용해야 합니다. 도구는 사용 후 세척해야 합니다.</li>
</ol>
2. 날개 디스크 해부 및 슬라이드 준비
<ol>
	<li>유전적 교배 및 25°C에서 사육 후, 튜브에서 방황하는 3령 유충을 골라 9웰 유리 함몰 스팟 플레이트의 차가운 라이브 이미징 배지로 세척합니다. 참고: 사이톤메는 매우 취약합니다. 다음 단계에서는 디스크와 해부 도구 사이의 직접적인 접촉을 피하면서 디스크 주변의 조직을 조작하는 데 주의를 기울여야 합니다. 우리는 한 번에 서너 마리의 유충을 준비하는데, 이는 몇 개의 디스크를 손상시키는 것이 불가피하고 이는 이미징 단계에서만 눈에 띄게 나타날 수 있기 때문입니다.</li>
	<li>해부 현미경 아래에서 유충을 실리콘 코팅 페트리 접시의 라이브 이미징 배지 한 방울로 옮기고 두 개의 해부 겸자를 사용하여 해부를 시작합니다. 그렇게 하려면 먼저 몸 길이의 약 1/3(앞쪽에서)에서 한 쌍의 집게로 유충을 꼬집어 머리와 몸 앞쪽 부분을 안정적으로 유지합니다. 두 번째 집게를 사용하여 첫 번째 집게의 바로 뒤쪽에 몸을 꼬집습니다. 그런 다음 유충의 뒤쪽 부분을 당겨 앞쪽 "절반"을 분리합니다.</li>
	<li>절단된 끝의 양쪽에 핀셋 한 쌍으로 고정하고 다른 한 쌍으로 머리를 밀어 넣어 앞쪽 절반을 뒤집어 (양말을 뒤집는 것처럼) 상상 디스크, 기관, 침샘, 뚱뚱한 몸체 및 장을 포함한 내부 구조를 노출시킵니다.</li>
	<li>침샘, 지방체, 장을 조심스럽게 제거하고 날개 디스크 위에 놓여 보호해야 하는 기관의 측면 줄기를 방해하지 않도록 주의하십시오.</li>
	<li>겸자를 사용하여 날개 디스크가 부착된 세척된 앞쪽 절반을 준비된 슬라이드의 스페이서 사이에 놓인 Hoechst가 있는 깨끗한 라이브 이미징 매체 한 방울로 조심스럽게 옮깁니다(그림 2C). 해부 겸자의 한 날 또는 해부 바늘 홀더에 부착된 가는 텅스텐 와이어를 사용하여 디스크에 연결된 기관의 미세한 가지에서 부드럽게 무딘 해부하여 날개 디스크를 나머지 조직에서 분리합니다. 나머지 시체는 버리십시오.</li>
	<li>해부 겸자 또는 텅스텐 와이어 해부 바늘의 한 날을 사용하여 디스크의 방향을 잡습니다. 납작한 눈물방울 모양으로 인해 날개 디스크는 DP 또는 PerM이 위를 향하도록 떨어집니다. 이 프로토콜의 경우 PerM 면이 위로 향하도록 모든 디스크의 방향을 지정합니다.</li>
	<li>필요에 따라 배지를 추가하거나 제거하여 웰을 완전히 채우도록 매체 부피를 조정하고, 이미징 스페이서의 수준보다 약간 높게 합니다. 각 이미징 스페이서 절반의 상단에서 보호 백킹을 제거한 다음 샘플 위로 커버슬립을 조심스럽게 내립니다. 커버슬립이 이미징 스페이서와 접촉하는 곳(예: 해부 겸자의 둥근 끝 부분)을 부드럽게 눌러 커버슬립이 스페이서에 부착되도록 합니다. 알림: 중간 수준은 기포가 갇히는 것을 방지하기 위해 스페이서 높이보다 약간 높아야 하지만 커버슬립을 낮출 때 상당한 흐름을 생성할 정도로 높지는 않아야 합니다.</li>
</ol>
3. 이미징
<ol>
	<li>40x/1.30 NA 오일 이침 렌즈 및 현미경 소프트웨어가 장착된 공초점 현미경(GFP의 경우 파장 488nm의 아르곤 이온 레이저, Hoechst의 경우 파장 350nm의 UV 레이저)을 사용하여 실온에서 샘플을 이미지화합니다. PerM의 최고 수준(Hoechst 형광이 감소하는 곳) 바로 위에서 DP의 기저측에 이르는 1μm 스텝 크기의 이미지 스택을 획득하며, 이는 일반적으로 스택당 100개 이상의 이미지로 작동합니다. 반복되는 이미지 스택을 획득하여 타임랩스 동영상을 생성합니다. 참고: 슬라이드를 ~1-2시간 이상 이미지화하지 않습니다.</li>
	<li>현미경 소프트웨어 설정의 경우 8비트 코딩, 라인 평균화 2, 검출기 게인이 일반적으로 650에서 750 사이, 신호 블리드스루를 줄이기 위해 분리된 채널 트랙을 사용하여 이미지를 수집합니다. 모든 조건에 대해 동일한 레이저 및 검출기 설정을 사용하며, 각 조건에 대한 테스트를 미리 수행하여 미리 결정됩니다. 참고: 40배 배율에서 이미지의 해상도는 μm당 5.0386픽셀(픽셀 크기: 0.1985 x 0.1985μm2)입니다. 우리의 설정에서 최적의 공초점 현미경 설정에는 가능한 한 많은 신호를 캡처하는 동시에 포화가 거의 또는 전혀 발생하지 않도록 가능한 가장 높은 레이저 강도(조직 손상 없이)가 포함되었습니다. 검출기 오프셋 및 획득 속도(필요한 경우)를 줄여 달성한 음성 대조군에서 평가된 가능한 가장 낮은 노이즈. 일반적으로 5% 미만의 레이저 출력과 최대 스캔 헤드 속도(Zen 소프트웨어 설정에서 '9')를 사용합니다. 단일 이미지 스택은 일반적으로 획득하는 데 ~1분 45초가 소요되며 타임랩스 분석을 위해 2-3분마다 이미지를 촬영합니다.</li>
</ol>
4. 이미지 분석
<ol>
	<li>ImageJ 소프트웨어 패키지의 최대 강도 투영 기능을 사용하는 프로젝트 스택( 이미지 | 스택 | Z 프로젝트에서 메뉴에서 최대 강도를 선택합니다).</li>
	<li>MIP 이미지에서 다각형 선택을 사용하여 날개 디스크 접힘 패턴(Hoechst 채널 사용)을 기반으로 날개 파우치 영역을 결정합니다. 외부 지우기 기능과 함께 GFP 채널에서 동일한 선택 항목을 사용합니다( 편집 | 외부 지우기)를 사용하여 모든 외부 픽셀 값을 0으로 설정합니다.</li>
	<li>MIP 이미지에서 Hoechst 채널을 사용하여 GFP 이미지를 정리하고, 특히 관련 픽셀 값을 0으로 설정하여 두 채널에 나타나는 인공 스팟을 제거합니다( 다각형 선택을 클릭한 다음 편집 | 지우기를 클릭).</li>
	<li>정리된 MIP 이미지에서 히스토그램 함수를 사용합니다( 분석 | 히스토그램 | List)를 사용하여 모든 픽셀 값의 목록을 가져와 스프레드시트의 테이블에 복사합니다.</li>
	<li>음성 대조군의 배경 신호 분석을 기반으로 임계값을 설정합니다(그런 다음 다른 샘플에서 확인됨, 토론 참조).</li>
	<li>다음 공식을 사용하여 GFP 양성 표면의 백분율을 계산합니다. %GFP 양성 표면 = <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68411/68411eq01.jpg" style="margin: auto;"> × 100</li>
	<li>각 값을 참조 조건(1로 설정됨)의 평균으로 나누어 마지막에 데이터를 정규화합니다. 참고: 유효한 픽셀 = 값이 1≥ 픽셀, 값이 0으로 설정된 삭제된 픽셀은 사실상 무시됩니다. 픽셀 값 0은 자연스럽게 발생하지 않습니다.</li>
	<li>디스크에서 재구성된 GFP 신호가 국소화되는 위치를 결정하려면 이미지 스택의 XZ 재슬라이스를 사용하여 디스크 상피의 정점기저축을 살펴봅니다. 보간 없이 피지에서 재슬라이스를 수행하고 쌍선형 보간과 함께 Scale 함수를 사용하여 Z축의 이미지 높이를 높여 가시성을 개선합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Ng, J. K., Tamura, K., Buscher, D., Izpisua-Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+basis+of+pattern+formation+during+vertebrate+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular basis of pattern formation during vertebrate limb development.</a> Curr Top Dev Biol. 41, 37-66 (1999).</li>
<li>Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes+and+the+dispersion+of+morphogens%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytonemes and the dispersion of morphogens.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 3 (6), 445-463 (2014).</li>
<li>Daly, C. A., Hall, E. T., Ogden, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+mechanisms+of+cytoneme-based+morphogen+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Regulatory mechanisms of cytoneme-based morphogen transport.</a> Cell Mol Life Sci. 79 (2), 119(2022).</li>
<li>Ramirez-Weber, F. A., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes%3A+cellular+processes+that+project+to+the+principal+signaling+center+in+Drosophila+imaginal+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cytonemes: cellular processes that project to the principal signaling center in Drosophila imaginal discs.</a> Cell. 97 (5), 599-607 (1999).</li>
<li>Hall, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme+delivery+of+Sonic+Hedgehog+from+ligand-producing+cells+requires+Myosin+10+and+a+Dispatched-BOC%2FCDON+co-receptor+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Cytoneme delivery of Sonic Hedgehog from ligand-producing cells requires Myosin 10 and a Dispatched-BOC/CDON co-receptor complex.</a> Elife. 10, e61432(2021).</li>
<li>Sanders, T. A., Llagostera, E., Barna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+filopodia+direct+long-range+transport+of+SHH+during+vertebrate+tissue+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Specialized filopodia direct long-range transport of SHH during vertebrate tissue patterning.</a> Nature. 497 (7451), 628-632 (2013).</li>
<li>Stanganello, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filopodia-based+Wnt+transport+during+vertebrate+tissue+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Filopodia-based Wnt transport during vertebrate tissue patterning.</a> Nat Commun. 6, 5846(2015).</li>
<li>Hall, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme+signaling+provides+essential+contributions+to+mammalian+tissue+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cytoneme signaling provides essential contributions to mammalian tissue patterning.</a> Cell. 187 (2), 276-293.e23 (2024).</li>
<li>Zhang, C., Brunt, L., Ono, Y., Rogers, S., Scholpp, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme-mediated+transport+of+active+Wnt5b-Ror2+complexes+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cytoneme-mediated transport of active Wnt5b-Ror2 complexes in zebrafish.</a> Nature. 625 (7993), 126-133 (2024).</li>
<li>Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+signaling+at+cytoneme+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glutamate signaling at cytoneme synapses.</a> Science. 363 (6430), 948-955 (2019).</li>
<li>Wood, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes+with+complex+geometries+and+composition+extend+into+invaginations+of+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytonemes with complex geometries and composition extend into invaginations of target cells.</a> J Cell Biol. 220 (5), e202101116(2021).</li>
<li>Gonzalez-Mendez, L., Seijo-Barandiaran, I., Guerrero, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme-mediated+cell-cell+contacts+for+Hedgehog+reception%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Cytoneme-mediated cell-cell contacts for Hedgehog reception.</a> Elife. 6, e24045(2017).</li>
<li>Du, L., Sohr, A., Li, Y., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPI-anchored+FGF+directs+cytoneme-mediated+bidirectional+contacts+to+regulate+its+tissue-specific+dispersion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">GPI-anchored FGF directs cytoneme-mediated bidirectional contacts to regulate its tissue-specific dispersion.</a> Nat Commun. 13 (1), 3482(2022).</li>
<li>Roy, S., Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoneme-mediated+contact-dependent+transport+of+the+Drosophila+decapentaplegic+signaling+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cytoneme-mediated contact-dependent transport of the Drosophila decapentaplegic signaling protein.</a> Science. 343 (6173), 1244624(2014).</li>
<li>Feinberg, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+Reconstitution+Across+Synaptic+Partners+%28GRASP%29+defines+cell+contacts+and+synapses+in+living+nervous+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">GFP Reconstitution Across Synaptic Partners (GRASP) defines cell contacts and synapses in living nervous systems.</a> Neuron. 57 (3), 353-363 (2008).</li>
<li>Yang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competitive+coordination+of+the+dual+roles+of+the+Hedgehog+co-receptor+in+homophilic+adhesion+and+signal+reception%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Competitive coordination of the dual roles of the Hedgehog co-receptor in homophilic adhesion and signal reception.</a> Elife. 10, e65770(2021).</li>
<li>Patel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytonemes+coordinate+asymmetric+signaling+and+organization+in+the+Drosophila+muscle+progenitor+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cytonemes coordinate asymmetric signaling and organization in the Drosophila muscle progenitor niche.</a> Nat Commun. 13 (1), 1185(2022).</li>
<li>Chen, W., Huang, H., Hatori, R., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+basal+cytonemes+take+up+Hedgehog+in+the+Drosophila+wing+imaginal+disc%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Essential basal cytonemes take up Hedgehog in the Drosophila wing imaginal disc.</a> Development. 144 (17), 3134-3144 (2017).</li>
<li>Huang, H., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myoblast+cytonemes+mediate+Wg+signaling+from+the+wing+imaginal+disc+and+Delta-Notch+signaling+to+the+air+sac+primordium%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Myoblast cytonemes mediate Wg signaling from the wing imaginal disc and Delta-Notch signaling to the air sac primordium.</a> Elife. 4, e06114(2015).</li>
<li>Hatori, R., Kornberg, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+produced+by+the+Drosophila+wing+imaginal+disc+induces+distinct+responses+in+three+target+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Hedgehog produced by the Drosophila wing imaginal disc induces distinct responses in three target tissues.</a> Development. 147 (22), dev195974(2020).</li>
<li>Rambaud, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slik+sculpts+the+plasma+membrane+into+cytonemes+to+control+cell-cell+communication%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Slik sculpts the plasma membrane into cytonemes to control cell-cell communication.</a> EMBO J. 44 (8), 2186-2210 (2025).</li>
<li>Gibson, M. C., Schubiger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripodial+cells+regulate+proliferation+and+patterning+of+Drosophila+imaginal+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Peripodial cells regulate proliferation and patterning of Drosophila imaginal discs.</a> Cell. 103 (2), 343-350 (2000).</li>
<li>Gibson, M. C., Lehman, D. A., Schubiger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumenal+transmission+of+decapentaplegic+in+Drosophila+imaginal+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Lumenal transmission of decapentaplegic in Drosophila imaginal discs.</a> Dev Cell. 3 (3), 451-460 (2002).</li>
<li>Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egfr%2FRas+pathway+mediates+interactions+between+peripodial+and+disc+proper+cells+in+Drosophila+wing+discs%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Egfr/Ras pathway mediates interactions between peripodial and disc proper cells in Drosophila wing discs.</a> Development. 130 (20), 4931-4941 (2003).</li>
<li>Pallavi, S. K., Shashidhara, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+interactions+between+squamous+and+columnar+epithelia+of+the+Drosophila+wing+disc%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Signaling interactions between squamous and columnar epithelia of the Drosophila wing disc.</a> J Cell Sci. 118 (Pt 15), 3363-3370 (2005).</li>
<li>Pedelacq, J. D., Cabantous, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+applications+of+superfolder+and+split+fluorescent+protein+detection+systems+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Development and applications of superfolder and split fluorescent protein detection systems in biology.</a> Int J Mol Sci. 20 (14), 3479(2019).</li>
<li>Panneton, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+catalytic+and+non-catalytic+functions+of+the+Drosophila+Ste20+kinase+Slik+by+activation+segment+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Regulation of catalytic and non-catalytic functions of the Drosophila Ste20 kinase Slik by activation segment phosphorylation.</a> J Biol Chem. 290 (34), 20960-20971 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Discovery V12 해부 현미경</td><td>자이스</td><td></td><td>해부 현미경</td></tr><tr><td>Dumont #55 집게, 생물학 팁</td><td>정밀 과학 도구</td><td>11255-20</td><td>집게를 해부하는</td></tr><tr><td>EP-Slik (slik20358)</td><td>BDSC의</td><td>Panneton et al. 2015&nbsp;</td><td>Slik을 표현하기 위한 플라이 균주</td></tr><tr><td>피지</td><td></td><td>Schindelin, J. et al. (2012)&nbsp;</td><td>이미지 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>회크스트 33342&nbsp;</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>H3570&nbsp;</td><td>라이브 이미징 핵 염색&NBSP;</td></tr><tr><td>LexAop-CD4-spGFP11&nbsp; </td><td>BDSC의</td><td>93018</td><td>플라이 스트레인</td></tr><tr><td>LSM 700 컨포칼 현미경&nbsp;</td><td>자이스</td><td></td><td>공초점 현미경</td></tr><tr><td>nub-GAL4</td><td>블루밍턴 초파리 스톡 센터(BDSC)</td><td>86108</td><td>플라이 스트레인</td></tr><tr><td>PerM-LexA</td><td></td><td>Rambaud, Joseph 외, 2025</td><td>플라이 스트레인</td></tr><tr><td>PYREX 9 함몰 유리 스폿 플레이트 판매</td><td>코닝 생명과학</td><td>7220-85</td><td>유충 채취 및 세척용</td></tr><tr><td>슈나이더의 초파리 배지</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>21720024</td><td>라이브 이미징 매체</td></tr><tr><td>SecureSeal 이미징 스페이서, 8웰, 두께 0.12mm&nbsp;</td><td>그레이스 바이오 랩스</td><td>654008</td><td>스페이서</td></tr><tr><td>SYLGARD 184 실리콘 엘라스토머 키트</td><td>실가르드</td><td>3097358-1004</td><td>해부판 제작용</td></tr><tr><td>UAS-CD4-spGFP1-10&nbsp; </td><td>BDSC의</td><td>93017</td><td>플라이 스트레인</td></tr><tr><td>젠 블랙</td><td>자이스</td><td></td><td>획득 소프트웨어</td></tr></tbody></table>

살아있는 초파리 날개 상상 디스크에서 사이톤군에 의해 매개되는 세포-세포 접촉을 평가하기 위한 gfp 상보 기반 이중 발현 시스템

A GFP Complementation-based Dual-expression System for Assessing Cell-Cell Contact Mediated by Cytonemes in Live Drosophila Wing Imaginal Discs

DP와 PerM 세포 사이의 접촉을 측정하기 위한 GRASP 절차의 유용성을 테스트하기 위해 우리는 네 가지 다른 유전자형의 날개 디스크를 조사했습니다: GFP 채널에서 자가형광의 배경 수준만 표시하는 야생형 음성 대조군 디스크(유전자형: w1118); DP 층에서 CD4-spGFP1-10을 발현하지만 CD4-spGFP11 전이유전자가 없는 디스크는 GFP1-10 단독으로 생성된 형광 수준을 보여줍니다(GFP1-10은 형광을 발하지 않아야 하므로 무시할 수 있을 것으로 예상됨26); CD4-spGFP1-10 및 CD4-spGFP11이 각각 DP 및 PerM에서 발현되는 디스크(그림 3A), 이는 DP-PerM 접촉의 "정상" 수준을 나타냅니다. CD4-spGFP1-10 및 CD4-spGFP11 외에도 UAS 제어 하에 DP 세포에서 Ser/Thr 단백질 키나아제 Slik을 발현하는 ...

살아있는 초파리 날개 상상 디스크에서 사이톤군에 의해 매개되는 세포-세포 접촉을 평가하기 위한 GFP 상보 기반 이중 발현 시스템

Embryonic tissue growth and patterning are largely controlled by signals exchanged locally between cell populations within the tissues themselves. ...

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

여기 GFP 태그 glial 세포와 결합하여 라이브 미세 분석을 사용하여 개발 Drosophila의 눈을 glial 세포의 마이 그 레이션을 검사하기 위해 프로토콜을 설명합니다.

Drosophila 아이 Imaginal 디스크에 Glial 세포 이미징 마이 그 레이션 라이브

Drosophila의 hemocytes은 개발 배아의 전체를 통해 분산. 이 프로토콜은 찬란 표시된 hemocytes와 배아를 사용하여 이러한 마이 그 레이션을 마운트 및 이미지하는 방법을 보여줍니다.

라이브 영상 Drosophila melanogaster 배아 Hemocyte 마이 그 레이션

SAC는 자매 chromatids의 mitotic의 분리를 모니터링의 신호를 시작하는 곳이 kinetochore입니다. 방법으로 염색체 운동과 함께 kinetochore 단백질과 그 조정 중 하나의 모집 및 매출을 시각화하기 위해 설명되어...

생활에서 보여주는 동적 Kinetochore 단백질 행동과 염색체 모션으로 Mitotic 검사 점 유학<em&gt; Drosophila</em&gt; Syncytial 태아

이 비디오는 신경교세포의 단세포 이미징을 위한 형질전환 초파리 뇌의 면역형광 염색을 보여줍니다. 뇌는 신경교세포 특이적 재조합효소 시스템의 제어 하에 항원 항원결정기의 다양한 조합과 융합된 막 표적 단백질을 발현합니다. 분리되고 고정된 뇌는 항원 항원결정기에 특이적인 1차 항체로 염색된 후 형광단 접합 2차 항체로 염색됩니다. 이 라벨링을 통해 다양한 뇌 영역에 걸쳐 서로 다른 신경교세포 하위 집단을 동시에 이미징할 수 있습니다.

신경교세포의 단세포 이미징을 위한 초파리 뇌의 면역형광 염색

이 프로토콜은 그대로 애벌레 뇌의 맥락에서 라이브 세포 이미징을 수행하는 데 사용하는 효율적인 방법을 자세히 설명합니다. 라이브 세포 이미징 방식은 지속적으로 이전에 간과 된 메커니즘을 밝혀, 비대칭 신경 줄기 세포 분열의 연구뿐만 아니라 다른 신경 인성과 발달 과정에 대한 귀중한 있습니다.

의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레 Neuroblasts

초파리의 성체 구조는 상상 원반이라고 하는 주머니와 같은 구조에서 파생됩니다. 이러한 디스크의 분석은 조직 결정, 구획 경계 설정, 세포 증식, 세포 운명 사양 및 평면 세포 극성을 포함한 많은 발달 과정에 대한 통찰력을 제공합니다. 이 프로토콜은 광/형광 현미경 검사를 위해 가상 디스크를 준비하는 데 사용됩니다.

해부하고, 상상 디스크의 면역 염색에서 초파리

이 프로토콜은 살아있는 초파리 번데기 눈 신경 상피를 이미징하는 효율적인 방법을 제시합니다. 이 방법은 조직의 움직임과 불균일한 토폴로지를 보상하고, 여러 GFP 태그가 지정된 접합 단백질을 사용하여 세포 경계의 시각화를 향상시키며, 쉽게 조립할 수 있는 이미징 장비를 사용합니다.

의 라이브 영상 초파리 번데기 눈

셀 다른 형태학을 표시 하 고 그들의 이웃과 상호 작용의 다양 한 설정. 이 프로토콜에는 단일 세포의 형태를 공개 하 고 확고 Gal4/UAS 식 시스템을 사용 하 여 세포 세포 상호 작용을 조사 하는 방법을 설명 합니다.

높은 해상도 단일 셀 형태학 초파리 에서 명과의 세포 상호 작용을 공부 하 고 다 색 FlpOut 기술의 응용

여기에서는 초파리 난소 틈새 시장에서 생식세포 줄기세포(GSC)의 비대칭 분열에 대한 실시간 이미징을 수행하기 위한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 우리는 분광 단백질 Par-1의 녹색 형광 단백질(GFP) 융합을 유비쿼터스하게 발현하는 형질전환 라인을 사용합니다.

여성 Drosophila melanogaster 생식세포 줄기세포 틈새의 확장된 라이브 이미징

Expansion-Assisted Iterescence In Situ Hybridization(EASI-FISH)은 확장 현미경 검사와 FISH(Fluorescence in situ hybridization)를 결합하여 두꺼운 조직에서 여러 유전자의 발현을 검출하는 강력한 기술입니다. 이 프로토콜은 이 방법의 최근 발전과 온전한 초파리 중추 신경계를 라벨링하기 위한 적응을 간략하게 설명합니다.

Expansion-Assisted Iterescence In Situ Hybridization을 사용한 온전한 초파리 뇌의 유전자 발현의 다중 검출

이 글에서는 시약을 경제적으로 사용하고 소수의 상상 디스크를 쉽게 다룰 수 있는 효율적인 상상 디스크 해부 및 항체 염색 프로토콜을 설명합니다.

Drosophila melanogaster의 눈-더듬이 및 날개 상상 디스크의 소규모 해부 및 항체 염색

학습하세요 GFP 상보 기반 이중 발현 시스템을 사용하여 살아있는 Drosophila 날개 상상 디스크에서 사이톤군에 의해 매개되는 세포-세포 접촉을 평가하는 방법을. 이 기술은 조직 성장 조절 메커니즘 연구에 활용됩니다.

살아있는 초파리 날개 상상 디스크에서 사이톤군에 의해 매개되는 세포-세포 접촉을 평가하기 위한 GFP 상보 기반 이중 발현 시스템

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