Name: 인간 섬유아세포의 세포 노화 정량 평가를 위한 LysoTracker를 이용한 리소좀 프로파일링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: 학습하세요 LysoTracker Deep Red를 이용한 라이브 세포 이미징 프로토콜로 IMR-90 인간 폐 섬유아세포의 세포 노화 시 리소좀 리모델링을 정량 평가하는 방법을 배우세요. 이 기법은 산성 세포소기관 확장을 간접 측정하여 노화 부담을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.

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<table><tbody><tr><td>24웰 조직 배양 플레이트(평면 바닥, TC 처리)</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229124</td><td>라이브 셀 형광 이미징과 호환되는 모든 투명 바닥 다중 웰 배양 플레이트(예: 6-, 12-, 또는 24웰 TC 처리 폴리스티렌 플레이트; 고해상도 이미징을 위해서는 유리 바닥 이미징 플레이트가 선호될 수 있음).</td></tr><tr><td>베타-갈락토시다제 염색 키트(노화 분석)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>9860</td><td>pH 6.0의 검증된 염색 버퍼가 있는 모든 상업용 SA-β-갈락토시다제 키트. 참고로, 고정 용액은 PBS에 포름알데히드 2%와 글루타르알데히드 0.2%를 포함하고, 염색 용액은 DMF에 X-gal 1 mg/mL, 시트르산/인산 칼륨 40 mM pH 6.0, 칼륨 페로시아나이드 5 mM, 칼륨 페리시아나이드 5 mM, NaCl 150 mM, MgCl2 2 mM을 포함합니다.</td></tr><tr><td>BioRender(과학 일러스트레이션 소프트웨어)</td><td>BioRender</td><td>N/A &mdash; 웹 애플리케이션</td><td>도식적 그림(그림 1&ndash;3) 제작에 사용됨. https://www.biorender.com</td></tr><tr><td>이산화탄소 가스(CO2), 압축 실린더</td><td>Airgas(또는 유사 공급업체)</td><td>N/A</td><td>세포 배양 인큐베이터 및 온스테이지 이미징 챔버에서 5%의 대기를 유지하는 데 사용되는 의료 등급 CO2.</td></tr><tr><td>열활성화 소화된 우태 태아 혈청(FBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>10082147</td><td>완전 배양 배지에서 10% v/v로 사용되는 56 &deg;C에서 열활성화된 모든 세포 배양 등급 FBS.</td></tr><tr><td>라이브 셀 기능이 있는 형광 현미경</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMF7000</td><td>라이브 셀 온도 및 CO2 제어, 원적외선(발광 ~647 nm / 발광 ~670 nm) 및 DAPI/Hoechst(발광 ~405 nm / 발광 ~460 nm) 채널에 대한 필터 세트, 리소좀 특징을 분해하기에 충분한 NA를 갖춘 20&times;-40&times; 목적으로 구성된 모든 와이드필드 또는 공초점 형광 현미경. 이 연구에서는 EVOS M7000 이미징 시스템이 사용되었습니다.</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 핵 염색</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>라이브 셀 핵 염색(파란색 형광, 발광 ~405 nm)을 위한 세포 투과성 DNA 염료. DAPI와는 상호 교환할 수 없으며, DAPI는 생리학적 조건 하에서 세포 투과성이 없습니다.</td></tr><tr><td>이미지 분석 소프트웨어</td><td>Python Software Foundation</td><td>N/A</td><td>핵 분할, 핵-세포 영역 확장, 강도 임계값 설정 및 기본 이미지 통계(예: scikit-image를 사용한 Python, MATLAB, ImageJ/Fiji, CellProfiler)를 지원하는 모든 과학적 컴퓨팅 환경. 이 연구를 위해 SenTrack 파이프라인(보충 파일 S1 참조)이 개발되었습니다.</td></tr><tr><td>IMR-90 인간 폐 섬유아세포(세포주)</td><td>ATCC</td><td>CCL-186</td><td>복제 노화를 모델링하는 데 사용되는 정상 인간 태아 폐 이배체 섬유아세포 주; 유사하게 특성화된 인간 섬유아세포 주를 대체할 수 있음.</td></tr><tr><td>LysoTracker Deep Red</td><td>Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td><td>L12492</td><td>라이브 셀 산성 소기관 염색을 위한 산성 형광 염료; DMSO에 1 mM 스톡으로 제공됨. 준비된 세포 배양 배지에서의 작동 농도는 75nM입니다.&nbsp; 원적외선 발광(발광 647 nm / 발광 668 nm)은 지질 형광 자체 형광과의 겹침을 최소화하지만 제거하지는 않습니다.</td></tr><tr><td>최소 필수 배지(MEM)</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>11-095-080</td><td>IMR-90 섬유아세포의 기본 배양 배지; 10% FBS 및 1% 페니실린-스트렙토마이신으로 보충됨. 글루타민을 포함하는 Earle's 최소 필수 배지의 표준 공식을 대체할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신 용액(100&times;)</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>15140122</td><td>완전 배양 배지용 항생제 보충제; 1% v/v(최종 ��

인간 섬유아세포의 세포 노화 정량 평가를 위한 lysotracker를 이용한 리소좀 프로파일링

Lysosomal Profiling With LysoTracker For Quantitative Assessment of Cellular Senescence In Human Fibroblasts

인간 섬유아세포의 세포 노화 정량 평가를 위한 LysoTracker를 이용한 리소좀 프로파일링

Cellular senescence is a stable cell-cycle arrest state associated with characteristic phenotypes, including enlarged cell morphology, altered secretory ...

lysosomal-profiling-with-lysotracker-for-quantitative-assessment

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 이중 노화 마커로 치료 유도 노화 암세포를 정량화하기 위한 유세포 분석 기반 분석을 보여줍니다. 노화 세포의 검출 및 정량화에는 β-갈락토시다아제 기질을 사용하는 것이 포함됩니다. 기질은 노화 세포 내에서 활성 리소좀 β-갈락토시다아제에 의해 절단되어 자가형광 리포푸신 과립과 함께 노화 암세포를 표시하는 형광 생성물을 생성합니다.

therapy-induced senescent cancer cells의 유세포 분석 기반 정량화

노화가 방지하거나 종양 논란이 계속 추진할지 여부를 지정합니다. chemotherapeutical 마약 senesce하는 암 세포를 유도 할 수 있기 때문에, 노화를 연구하는 새로운 치료법을 제안 필수적이다. 그러나, 표준 및 널리 사용되는 β-갈 락토시다 분석은 주요 단점을 제공합니다. 우리는 여기에서 노화를 정량화 할 수있는 신속하고 민감한 유동 세포 계측법 기반 분석을 제안한다.

노화 암 세포를 정량화하는 민감한 방법

세포 노화, 세포주기 정지의 비가역적인 상태는 다양한 세포 스트레스에 의해 유도 될 수있다. 여기, 우리는 노화의 마커를 평가하기 위해 세포 노화 및 방법을 유도 프로토콜을 설명합니다.

기술은 유도 및 정량화 세포 노화하기

여기, 우리 유도 대 한 프로토콜의 시리즈 및 경작된 한 세포에 세포 노화의 유효성 검사를 설명합니다. 우리는 다른 노화 유도 자극에 집중 하 고 일반적인 노화 관련 마커의 정량화를 설명. 우리 모델, 섬유 아 세포를 사용 하 여 기술 정보를 제공 하지만 프로토콜은 다양 한 휴대 전화 모델에 적용할 수 있습니다.

유도 및 기본 인간 세포에서 세포 노화의 유효성 검사

세포내 선생님 세포 노화의 유도에 중요 한 역할을 보여줘 왔다. 여기, 우리는 세포 노화 중 선생님 수준 측정을 위한 중요 한 분석 결과 설명 합니다. 우리는 또한 노화 관련 분 비 표현 형, 다양 한 연령과 관련 된 장애에 기여 하는 보도 평가 하기 위한 프로토콜을 제공 합니다.

Oncogene 유도 노화 중 반응성 산소 종 및 정상적인 인간 섬유 아 세포에서 분 비 형 노화 관련의 정량적 측정

세포 노화는 만성 연령 과 관련된 병리 발달의 핵심 요소입니다. 노화 세포를 표적으로 하는 치료제의 식별은 건강한 노화를 연장하기 위한 약속을 보여줍니다. 여기서, 우리는 단일 세포에서 의 노화 관련 β-갈락토시다아제 활성의 측정에 기초하여 senotherapeutics의 식별을 위해 스크리블하는 새로운 분석방법을 제시한다.

SA-β-갈락토시다아제 계 선별 분석법

이 프로토콜은 펄스 SILAC를 사용한 노화 및 비분열 세포의 대사 표지, 비표적 질량 분석법 분석 및 단백질 반감기의 간소화된 계산을 위한 워크플로우를 설명합니다.

대사 표지 및 질량 분광법으로 노화 및 비분할 배양된 세포에서의 단백질 회전율 측정

여기서 우리는 단일 세포에서 다중 노화 관련 마커의 시각화 및 정량화를 위한 유세포 측정 기반 방법을 제시한다.

치료 유도 노인성 암 세포에서 다중 형광 노화 마커의 동시 이미징 및 유동 세포 측정 기반 검출

세포 배양 또는 쥐 종양 모델에서 화학 요법 약물에 의해 유도 된 노화 암 세포의 형광, 유세포 측정 정량화를위한 프로토콜이 제시된다. 선택적 절차에는 공동 면역염색, 대규모 배치 또는 시점 분석을 용이하게 하기 위한 샘플 고정, 유세포 분석 분류에 의한 생존 가능한 노화 세포의 농축이 포함됩니다.

유세포분석을 통한 노화 종양 세포의 식별 및 농축을 위한 원적색 형광 노화 관련 β-갈락토시다아제 프로브

다중화 면역형광은 단일 조직 절편 내에서 여러 항체 표지자를 순차적으로 표지하여 조직 구조와 세포 집단의 공간 분석을 지원합니다. 여기서는 노화 관련 마커, 구조적, 면역 마커의 다중성 검출 워크플로우를 제시하는데, 여기에는 수동 및 자동 슬라이드 준비, 반복 영상, 디지털 병리 소프트웨어를 이용한 단일 세포 분석이 포함됩니다.

생체 내 노화 마커의 공간 평가를 위한 다중화 면역형광 분석법

이 프로토콜은 인간 지방 조직에서 분리된 기질 혈관 분획에서 노화 관련 베타-갈락토시다제(SA-β-gal) 활성을 객관적이고 단일 세포로 검출하기 위한 반사광 공초점 현미경을 제시합니다. 이 방법은 면역세포화학과 호환되며, 정량 평가를 위한 pH 조절을 포함하고, 기존의 SA-β-갤 염색보다 더 민감하고 주관적인 대안을 제공합니다.

지방 기질 혈관 분율에서 반사광을 이용한 노화 검출

학습하세요 LysoTracker Deep Red를 이용한 라이브 세포 이미징 프로토콜로 IMR-90 인간 폐 섬유아세포의 세포 노화 시 리소좀 리모델링을 정량 평가하는 방법을 배우세요. 이 기법은 산성 세포소기관 확장을 간접 측정하여 노화 부담을 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.

인간 섬유아세포의 세포 노화 정량 평가를 위한 LysoTracker를 이용한 리소좀 프로파일링

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