Gebruikmaken van troebelheid en trombo-lastografie voor complementaire clot karakterisering

Trombo-lastografie en troebelheidstesten zijn twee eenvoudige en onderscheidende methoden voor stolselkarakterisering. Deze technieken bieden samen een uitgebreider inzicht in hoe stollingsvariabelen van invloed zijn op stolselkenmerken. Beide testen, bieden niet alleen endpoint clot analyse, maar ook het aantrekken van fibrin stolsel vorming na verloop van tijd, in tegenstelling tot veel andere stolsel karakterisering tools Deze technieken kunnen helpen bij de ontwikkeling van een fysiologisch relevante synthetische stolsel platform dat betrouwbare diagnose van de fibrinolytische toestand van trombose patiënten kan bieden Om stolsel troebelheid te controleren na verloop van tijd, gebruik maken van een commercieel beschikbare spectrometer die een absorptiebereik van 350 tot 700 nanometer heeft.

Schakel de spectrometer in en open de bijbehorende analysesoftware. Selecteer vervolgens plaat één en open het tabblad plaatinstellingen. Klik op ABS en kinetisch om een dynamische absorptie na verloop van tijd te controleren.

Selecteer 550 nanometer in het tabblad golflengte, schakel vervolgens over naar het tabblad timing en pas de totale runtime aan tot 60 minuten met een interval van 30 seconden, selecteer de putten van belang door ze te markeren. Pipette 140 microliter PBS in een put van een UV transparante 96 putplaat. Voeg vervolgens 10 microliters trombine toe en meng, start onmiddellijk stolling door 50 microliters fibrinogen toe te voegen aan de put en pipet op en neer vijf keer met behulp van alleen de eerste stop van de pipet die ervoor zorgt dat er geen bellen ontstaan.

Plaats de plaat in de plaathouder en klik op lezen in de software om de troebelheid te starten. Wanneer de read klaar is ophalen van de troebelheid gegevens en het verkrijgen van een troebelheid tracing curve door het plotten van de absorbenten veranderen in de tijd, ontlenen maximale troebeliteit door het nemen van de maximale absorptiewaarde van de curve in de tijd, bereken dan 90% maximale troebeliteit door het vermenigvuldigen van maximale troebeliteit met 0,9. Ontlenen de tijd tot maximale troebelheid door het berekenen van de tijd van stolsel initiatie tot 90% maximale troebelheid.

Schakel de trombo-lastografie of TEG-analysemachine in en wacht tot de temperatuur is gestabiliseerd bij 37 graden Celsius, open vervolgens de TEG-software en maak een experimentnaam onder de sectie ID. Klik op het tabblad TEG en volg de aanwijzingen op het scherm om een eTest-test voor alle kanalen uit te voeren. Plaats de hendel vervolgens terug naar de laadpositie zodra alle controles zijn voltooid.

Klik op gereed op de informatiepagina en voer voorbeeldinformatie in voor kanalen die worden gebruikt. Plaats een duidelijke ongecoate TEG-beker in het bijbehorende kanaal. Schuif de drager naar boven en druk de kopje onder vijf keer op een fix de pin aan de torsiestang dan lager de drager en druk de beker naar beneden in de basis totdat het klikt.

Pipette 20 microliters van trombineoplossing in de TEG-beker en start vervolgens stolling door 340 microliters fibrinogen in de beker toe te voegen om een 360 microliter stollingsoplossing te verkrijgen. Meng de inhoud van de beker door het op en neer buigen vijf keer. Schuif de cup geladen drager omhoog zet de hendel naar de leespositie en klik op start in de software om de TEG-lezing te starten.

Zodra de meting is voltooid, u de parameters ophalen en een TEG-traceringscurve verkrijgen door amplitude in de loop van de tijd uit te plotten. Kies MA als maximale amplitude, wat wijst op stolselstam en TMA als tijd tot maximale amplitude van de software. Representatieve troebelheid en een TEG tracing curves van menselijke en runder fibrine stolsels op verschillende fibrinogen niveaus worden hier getoond.

De traceringscurven tonen aan dat na een vertragingsperiode na het initiëren van stolsel, stolsel troebelheid of stolselamplitude in de loop van de tijd toeneemt en niveaus af nemen aan het einde van de stolselvorming. Maximale troebelheid en tijd tot maximale troebelheid zijn de twee parameters afgeleid van troebelheid, terwijl maximale amplitude en tijd tot maximale amplitude zijn afgeleid van TEG. Op een hoger niveau van fibrinogen in de stollingsoplossing nemen alle vier de waarden toe.

Maximale troebelheid is een optische maat voor de stolselstructuur, die indicatief is voor fibrin vezeldikte en fibrin netwerkdichtheid. Terwijl maximale amplitude is een mechanische maatregel die absolute stolsel stam weerspiegelt, samen genomen de twee waarden bieden gratis inzicht over de stolsel micro structuren. Deze procedure toont een vereenvoudigd stollingsmodel aan om variabelen te onderzoeken die voornamelijk fibrinpolymerisatie beïnvloeden.

Dit model kan worden aangepast door toevoeging van extra stollingsfactoren om andere parameters te bestuderen. Het stollingsmodel kan eenvoudig worden gewijzigd met behulp van klinische plasmamonsters om stolselvorming en desillusie in aanwezigheid van antitrombotische geneesmiddelen te controleren. De resultaten kunnen leiden tot therapeutisch beheer bij patiënten.