Name: Real-Time Void Spot Assay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Leer de real-time void spot assay om muisplasgedrag te bestuderen met videobewaking. Deze methode verzamelt tijdelijke, ruimtelijke en volumetrische gegevens over plasevents tijdens licht- en donkere fasen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door een NIH-subsidie R01DK119183 (aan G.A. en M.D.C.), een proefprojectprijs via P30DK079307 (aan M.G.D.), een American Urology Association Career Development award en een Winters Foundation-beurs (aan N.M.), en door de Cell Physiology and Model Organisms Kidney Imaging Cores van het Pittsburgh Center for Kidney Research (P30DK079307).

<ol><li>Dalghi, M. G., Montalbetti, N., Carattino, M. D., Apodaca, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+urothelium%3A+life+in+a+liquid+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The urothelium: life in a liquid environment.</a> Physiological Reviews. 100 (4), 1621(2020).</li>
<li>de Groat, W. C., Griffiths, D., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+the+lower+urinary+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Neural control of the lower urinary tract.</a> Comprehensive Physiology. 5 (1), 327(2015).</li>
<li>Dalghi, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+roles+for+PIEZO1+and+PIEZO2+in+urothelial+mechanotransduction+and+lower+urinary+tract+interoception%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Functional roles for PIEZO1 and PIEZO2 in urothelial mechanotransduction and lower urinary tract interoception.</a> JCI Insight. 6 (19), (2021).</li>
<li>Montalbetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+infection+with+uropathogenic+Escherichia+coli+increases+the+excitability+of+afferent+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Bladder infection with uropathogenic Escherichia coli increases the excitability of afferent neurons.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 322 (1), 1(2022).</li>
<li>Montalbetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+urothelial+paracellular+transport+promotes+cystitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Increased urothelial paracellular transport promotes cystitis.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 309 (12), 1070(2015).</li>
<li>Montalbetti, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urothelial+tight+junction+barrier+dysfunction+sensitizes+bladder+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Urothelial tight junction barrier dysfunction sensitizes bladder afferents.</a> eNeuro. 4 (3), (2017).</li>
<li>Montalbetti, N., Stocker, S. D., Apodaca, G., Bastacky, S. I., Carattino, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+K%2B+promotes+irritative+voiding+symptoms+and+pain+in+the+face+of+urothelial+barrier+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Urinary K+ promotes irritative voiding symptoms and pain in the face of urothelial barrier dysfunction.</a> Scientific Reports. 9 (1), 5509(2019).</li>
<li>Kim, A. K., Hamadani, C., Zeidel, M. L., Hill, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urological+complications+of+obesity+and+diabetes+in+males+and+females+of+three+mouse+models%3A+temporal+manifestations%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Urological complications of obesity and diabetes in males and females of three mouse models: temporal manifestations.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 318 (1), 160(2020).</li>
<li>Bartolone, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micturition+defects+and+altered+bladder+function+in+the+klotho+mutant+mouse+model+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Urology%22%5BJournal%5D)">Micturition defects and altered bladder function in the klotho mutant mouse model of aging.</a> American Journal of Clinical and Experimental Urology. 8 (3), (2020).</li>
<li>de Rijk, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-associated+changes+in+oxidative+stress+negatively+impacts+the+urinary+bladder+urothelium%5BTitle%5D)+AND+%22International+Neurourology+Journal%22%5BJournal%5D)">Aging-associated changes in oxidative stress negatively impacts the urinary bladder urothelium.</a> International Neurourology Journal. 26 (2), 111(2022).</li>
<li>Coyne, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+lower+urinary+tract+symptoms+%28LUTS%29+and+overactive+bladder+%28OAB%29+by+racial%2Fethnic+group+and+age%3A+results+from+OAB-POLL%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">The prevalence of lower urinary tract symptoms (LUTS) and overactive bladder (OAB) by racial/ethnic group and age: results from OAB-POLL.</a> Neurourology and Urodynamics. 32 (3), 230(2013).</li>
<li>Wittig, L., Carlson, K. V., Andrews, J. M., Crump, R. T., Baverstock, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+bladder+dysfunction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Diabetic bladder dysfunction: a review.</a> Urology. 123, (2019).</li>
<li>Irwin, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-based+survey+of+urinary+incontinence%2C+overactive+bladder%2C+and+other+lower+urinary+tract+symptoms+in+five+countries%3A+results+of+the+EPIC+study%5BTitle%5D)+AND+%22European+Urology%22%5BJournal%5D)">Population-based survey of urinary incontinence, overactive bladder, and other lower urinary tract symptoms in five countries: results of the EPIC study.</a> European Urology. 50 (6), 1314(2006).</li>
<li>Bogart, L. M., Berry, S. H., Clemens, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symptoms+of+interstitial+cystitis%2C+painful+bladder+syndrome+and+similar+diseases+in+women%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Symptoms of interstitial cystitis, painful bladder syndrome and similar diseases in women: a systematic review.</a> The Journal of Urology. 177 (2), 450(2007).</li>
<li>Foxman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+tract+infection+syndromes%3A+occurrence%2C+recurrence%2C+bacteriology%2C+risk+factors%2C+and+disease+burden%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Urinary tract infection syndromes: occurrence, recurrence, bacteriology, risk factors, and disease burden.</a> Infectious Disease Clinics of North America. 28 (1), 1(2014).</li>
<li>Fall, M., Logadottir, Y., Peeker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+cystitis+is+bladder+pain+syndrome+with+Hunner%27s+lesion%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Interstitial cystitis is bladder pain syndrome with Hunner's lesion.</a> International Journal of Urology. 21, 79(2014).</li>
<li>Birder, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+bladder%2C+cystitis+and+nerve%2Furothelial+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Autonomic+Neuroscience%3A+Basic+%26+Clinical%22%5BJournal%5D)">Urinary bladder, cystitis and nerve/urothelial interactions.</a> Autonomic Neuroscience: Basic & Clinical. 182, 89(2014).</li>
<li>Rosen, J. M., Klumpp, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+pain+from+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Urology.+21+Suppl%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of pain from urinary tract infection.</a> International Journal of Urology. 21 Suppl. 1, 26(2014).</li>
<li>Birder, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+control+of+the+lower+urinary+tract%3A+peripheral+and+spinal+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">Neural control of the lower urinary tract: peripheral and spinal mechanisms.</a> Neurourology and Urodynamics. 29 (1), 128(2010).</li>
<li>Desjardins, C., Maruniak, J. A., Bronson, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+rank+in+house+mice%3A+differentiation+revealed+by+ultraviolet+visualization+of+urinary+marking+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Social rank in house mice: differentiation revealed by ultraviolet visualization of urinary marking patterns.</a> Science. 182 (4115), 939(1973).</li>
<li>Sugino, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voided+stain+on+paper+method+for+analysis+of+mouse+urination%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">Voided stain on paper method for analysis of mouse urination.</a> Neurourology and Urodynamics. 27 (6), 548(2008).</li>
<li>Hill, W. G., Zeidel, M. L., Bjorling, D. E., Vezina, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Void+spot+assay%3A+recommendations+on+the+use+of+a+simple+micturition+assay+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Void spot assay: recommendations on the use of a simple micturition assay for mice.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 315 (5), (2018).</li>
<li>Rajandram, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intact+urothelial+barrier+function+in+a+mouse+model+of+ketamine-induced+voiding+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Intact urothelial barrier function in a mouse model of ketamine-induced voiding dysfunction.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 310 (9), (2016).</li>
<li>Ruetten, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+uropathogenic+E.+coli+UTI89+model+of+prostatic+inflammation+and+collagen+accumulation+for+use+in+studying+aberrant+collagen+production+in+the+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">A uropathogenic E. coli UTI89 model of prostatic inflammation and collagen accumulation for use in studying aberrant collagen production in the prostate.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 320 (1), 31(2021).</li>
<li>Wegner, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Void+spot+assay+procedural+optimization+and+software+for+rapid+and+objective+quantification+of+rodent+voiding+function%2C+including+overlapping+urine+spots%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Void spot assay procedural optimization and software for rapid and objective quantification of rodent voiding function, including overlapping urine spots.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 315 (4), (2018).</li>
<li>Wood, R., Eichel, L., Messing, E. M., Schwarz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+noninvasive+measurement+of+cyclophosphamide-induced+changes+in+murine+voiding+frequency+and+volume%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Automated noninvasive measurement of cyclophosphamide-induced changes in murine voiding frequency and volume.</a> The Journal of Urology. 165 (2), 653(2001).</li>
<li>Dmochowski, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+outlet+obstruction%3A+etiology+and+evaluation.+Reviews+in+Urology%5BTitle%5D)+AND+%227+%28Suppl+6%29%2C+S3%E2%80%93S13%22%5BJournal%5D)">Bladder outlet obstruction: etiology and evaluation. Reviews in Urology.</a> 7 (Suppl 6), S3–S13. , (2005).</li>
<li>Aizawa, N., Homma, Y., Igawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+high+fat+diet+feeding+for+20+weeks+on+lower+urinary+tract+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lower+Urinary+Tract+Symptoms%22%5BJournal%5D)">Influence of high fat diet feeding for 20 weeks on lower urinary tract function in mice.</a> Lower Urinary Tract Symptoms. 5 (2), 101(2013).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Void+sorcerer%3A+an+open+source%2C+open+access+framework+for+mouse+uroflowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Urology%22%5BJournal%5D)">Void sorcerer: an open source, open access framework for mouse uroflowmetry.</a> American Journal of Clinical and Experimental Urology. 7 (3), 170(2019).</li>
<li>Verstegen, A. M., Tish, M. M., Szczepanik, L. P., Zeidel, M. L., Geerling, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micturition+video+thermography+in+awake%2C+behaving+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Micturition video thermography in awake, behaving mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 331, 108449(2020).</li>
<li>Keller, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+urination+control+by+brainstem+neurons+that+relax+the+urethral+sphincter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Voluntary urination control by brainstem neurons that relax the urethral sphincter.</a> Nature Neuroscience. 21 (9), (2018).</li>
<li>Hou, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+control+circuit+for+context-dependent+micturition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Central control circuit for context-dependent micturition.</a> Cell. 167 (1), 73(2016).</li>
<li>Negoro, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+urinary+bladder+Connexin43+and+the+circadian+clock+in+coordination+of+diurnal+micturition+rhythm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communication%22%5BJournal%5D)">Involvement of urinary bladder Connexin43 and the circadian clock in coordination of diurnal micturition rhythm.</a> Nature Communication. 3, (2012).</li>
<li>Montalbetti, N., Carattino, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-sensing+ion+channels+modulate+bladder+nociception%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Acid-sensing ion channels modulate bladder nociception.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 321 (5), (2021).</li>
<li>Chen, H., Zhang, L., Hill, W. G., Yu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+voiding+spot+assay+in+mice%3A+a+simple+method+with+complex+environmental+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Evaluating the voiding spot assay in mice: a simple method with complex environmental interactions.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 313 (6), (2017).</li>
<li>Dalghi, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+distribution+of+PIEZO1+in+the+mouse+urinary+tract%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">Expression and distribution of PIEZO1 in the mouse urinary tract.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 317 (2), 303(2019).</li>
<li>Birder, L., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+modelling+of+interstitial+cystitis%2Fbladder+pain+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22International+Neurourology+Journal%22%5BJournal%5D)">Animal modelling of interstitial cystitis/bladder pain syndrome.</a> International Neurourology Journal. 22, (2018).</li>
<li>Okinami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+detrusor+gap+junction+communications+induce+storage+symptoms+in+bladder+inflammation%3A+a+mouse+cyclophosphamide-induced+model+of+cystitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Altered detrusor gap junction communications induce storage symptoms in bladder inflammation: a mouse cyclophosphamide-induced model of cystitis.</a> PLoS One. 9 (8), (2014).</li>
<li>Tungtur, S. K., Nishimune, N., Radel, J., Nishimune, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Behavior+Tracker%3A+An+economical+method+for+tracking+behavior+in+home+cages%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Mouse Behavior Tracker: An economical method for tracking behavior in home cages.</a> Biotechniques. 63 (5), (2017).</li>
<li>Negoro, H., Kanematsu, A., Yoshimura, K., Ogawa, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronobiology+of+micturition%3A+putative+role+of+the+circadian+clock%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Chronobiology of micturition: putative role of the circadian clock.</a> The Journal of Urology. 190 (3), (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De integratie van videobewaking is een kosteneffectieve wijziging die verschillende voordelen biedt ten opzichte van de klassieke VSA. In de klassieke VSA, die meestal wordt gebruikt als eindpunttest, is het moeilijk om overlappende leegteplekken te onderscheiden. Dit is geen triviale zorg, omdat muizen de neiging hebben om meerdere keren in hetzelfde gebied te plassen wanneer de test enkele uren wordt verlengd, meestal in de hoeken van hun kooi. Het eerste voordeel van RT-VSA is dus dat de onderzoeker gemakkelijk indivi...

Urineopslag en mictie worden gecoördineerd door een centraal circuit (centraal zenuwstelsel) dat informatie ontvangt over de blaasvulstatus via de bekken- en hypogastrische zenuwen. Het urothelium, het epitheel dat de urinewegen van het nierbekken naar de proximale urethra bekleedt, vormt een strakke barrière voor de metabole afvalproducten en pathogenen die in de urine aanwezig zijn. Het is een integraal onderdeel van een sensorisch web, dat de vultoestand van de blaas detecteert en communiceert naar onderliggende weefsels en afferente zenuwen 1,2. Verstoring van de urotheliale barrière, of veranderingen in urotheliale mechanotransductieroutes, kan leiden tot ledigingsstoornissen samen met lagere urinewegsymptomen zoals frequentie, urgentie, nocturie en incontinentie 3,4,5,6,7. Evenzo is bekend dat veroudering, diabetes, lagere urineweginfecties, interstitiële cystitis en andere ziekteprocessen die de urineblaas beïnvloeden, of het bijbehorende circuit dat de functie ervan regelt, blaasdisfunctie veroorzaken 8,9,10,11,12,13,14,15,16,17, 18,19. Een beter begrip van normaal en abnormaal ledigingsgedrag hangt af van de ontwikkeling van methoden die op betrouwbare wijze onderscheid kunnen maken tussen verschillende plaspatronen.
Traditioneel is het vrijwillige ledigingsgedrag van muizen bestudeerd met behulp van de void spot assay (VSA), ontwikkeld door Desjardins en collega's20, en breed aangenomen vanwege de eenvoud, lage kosten en niet-invasieve aanpak 8,21,22,23,24. Deze test wordt meestal uitgevoerd als een eindpunttest, waarbij een muis een bepaalde hoeveelheid tijd doorbrengt in een kooi bekleed met een filterpapier, dat vervolgens wordt geanalyseerd door het aantal te tellen en de grootte van urinevlekken te beoordelen wanneer het filterpapier onder ultraviolet (UV) licht wordt geplaatst (de urinevlekken fluoresceren onder deze omstandigheden)20. Ondanks deze vele voordelen heeft de traditionele VSA enkele grote beperkingen. Omdat muizen vaak in dezelfde gebieden plassen, moeten onderzoekers de duur van de test beperken tot een relatief korte periode (≤4 uur)25. Zelfs wanneer de VSA over kortere tijdsperioden wordt uitgevoerd, is het bijna onmogelijk om kleine lege plekken (SVS'en) op te lossen die over grote lege plekken vallen of om SVS'en te onderscheiden van de overdracht van urine die aan staarten of poten is gehecht. Het is ook erg moeilijk om te onderscheiden of SVS'en een gevolg zijn van frequente maar individuele ledigingsgebeurtenissen (een fenotype dat vaak wordt waargenomen als reactie op cystitis 4,26), of als gevolg van post-mictie dribbelen (een fenotype geassocieerd met obstructie van de blaasuitlaat 27). Bovendien beperkt de wens om de test tijdens werkuren te voltooien, in combinatie met moeilijkheden om toegang te krijgen tot huisvestingsfaciliteiten wanneer de lichten worden uitgeschakeld, deze tests vaak tot de lichtperiode van de circadiane cyclus van 24 uur. Deze tijdsbeperkingen voorkomen dus de evaluatie van het ledigingsgedrag van muizen tijdens hun actieve nachtfase, waardoor het vermogen om specifieke genen of behandelingen te analyseren die worden bepaald door circadiane ritmes, wordt verminderd.
Om een aantal van deze beperkingen te overwinnen, hebben onderzoekers alternatieve methoden ontwikkeld om het ledigingsgedrag in realtime te beoordelen 26,28,29,30,31,32. Sommige van deze benaderingen omvatten het gebruik van dure apparatuur zoals metabole kooien26,28,29, of het gebruik van thermische camera's 30; Ook deze hebben echter beperkingen. In metabole kooien heeft urine bijvoorbeeld de neiging zich te hechten aan de draden van de gaasvloer en aan de wanden van de trechter, waardoor de hoeveelheid urine die wordt verzameld en gemeten, wordt verminderd. Het kan dus moeilijk zijn om nauwkeurig gegevens over kleine holtes te verzamelen. Bovendien geven metabole kooien geen informatie over de ruimtelijke verdeling van de ledigingsgebeurtenissen (d.w.z. urineren in de hoeken versus het midden van de kamer). Aangezien infraroodstraling met een lange golflengte die door de thermografische camera's wordt gebruikt, niet doordringt in vaste stoffen, moet de ledigingsactiviteit die wordt beoordeeld door videothermografie worden uitgevoerd in een open systeem, wat een uitdaging kan zijn met actieve muizen, omdat ze enkele centimeters in de lucht kunnen springen. Een ander systeem is de geautomatiseerde voided beits on paper (aVSOP) approach33, die bestaat uit gewalst filterpapier dat met een constante snelheid onder de gaasvloer van een muizenkooi terechtkomt. Deze aanpak voorkomt papierschade en de overlap van urinevlekken die voorkomen in de klassieke VSA, en de implementatie ervan stelt de onderzoeker in staat om experimenten gedurende meerdere dagen uit te voeren. Het biedt de onderzoeker echter geen precieze timing van de voiding-gebeurtenissen en er is geen mogelijkheid om gedrag te onderzoeken en hoe het correleert met spotting. Om deze informatie te verkrijgen, hebben onderzoekers videomonitoring opgenomen in voiding-assays, een aanpak die de gelijktijdige beoordeling van muisactiviteit en urinegebeurtenissen mogelijk maakt31,32. Eén benadering bestaat uit het plaatsen van een blauw licht emitterende diode (LED) en een videocamera met een groen fluorescentie-eiwitfilter onder de experimentele kooi om de ledigingsgebeurtenissen te visualiseren, en een infrarood-LED en een videocamera boven de kooi om muispositie32 vast te leggen. Deze opstelling is gebruikt om het ledigingsgedrag te controleren tijdens het uitvoeren van vezelfotometrie; De fel verlichte omgeving van dit systeem vereiste echter dat de onderzoekers hun muizen behandelden met een diureticum om lediging te stimuleren. In een ander experimenteel ontwerp werden groothoekcamera's boven en onder de experimentele kooi geplaatst om respectievelijk de motorische activiteit van de muis en de plasgebeurtenissen te visualiseren. In dit geval werden urinevlekken afgezet op een filterpapier dat de vloer van de kooi bekleedde, onthuld door het filterpapier te verlichten met UV-lampen die onder de kooiwaren geplaatst 31. Deze opstelling werd gebruikt in korte assays, 4 minuten lang, tijdens de lichte fase van de dag om de hersenstamneuronen te bestuderen die betrokken zijn bij vrijwillig ledigingsgedrag31. De geschiktheid van dit systeem voor gebruik tijdens de donkere fase of voor perioden >4 minuten werd niet gemeld.
In dit artikel wordt een methode beschreven die de traditionele VSA verbetert door langdurige videomonitoring van muisledigingsgedrag mogelijk te maken. Deze kosteneffectieve aanpak biedt tijdelijke, ruimtelijke en volumetrische informatie over ledigingsgebeurtenissen gedurende langere tijd tijdens de lichte en donkere fasen van de dag, samen met details met betrekking tot muisgedrag 3,4,34. Gedetailleerde informatie voor de bouw van de ledigingskamers, de implementatie van een real-time VSA (RT-VSA) en de analyse van de gegevens wordt verstrekt. De RT-VSA is waardevol voor onderzoekers die de fysiologische mechanismen willen begrijpen die de functie van het urinewegstelsel regelen, farmacologische benaderingen willen ontwikkelen om mictie te beheersen en de moleculaire basis van ziekteprocessen willen definiëren die de lagere urinewegen beïnvloeden.

<table><tbody><tr><td>1.00&rdquo; X 1.00&rdquo; T-Slotted Profile - Four Open T-Slots &ndash;&nbsp; cut to 10 inches</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>Aantal: 20</td></tr><tr><td>1.00&rdquo; X 1.00&rdquo; T-Slotted Profile - Four Open T-Slots &ndash;&nbsp; cut to 12 inches</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>Aantal: 6</td></tr><tr><td>1.00&rdquo; X 1.00&rdquo; T-Slotted Profile - Four Open T-Slots &ndash;&nbsp; cut to 40 inches</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>Aantal: 4</td></tr><tr><td>1.00&rdquo; X 1.00&rdquo; T-Slotted Profile - Four Open T-Slots &ndash; cut to 14.75 inches</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>Aantal: 12</td></tr><tr><td>1.00&rdquo; X 1.00&rdquo; T-Slotted Profile - Four Open T-Slots &ndash; cut to 32 inches</td><td>80/20</td><td>1010</td><td>Aantal: 5</td></tr><tr><td>1/4-20 Double Slide-in Economy T-Nut</td><td>80/20</td><td>3280</td><td>Aantal: 16</td></tr><tr><td>1/4-20 Triple Slide-in Economy T-Nut</td><td>80/20</td><td>3287</td><td>Aantal: 18</td></tr><tr><td>10 &amp; 25 Series 2 Hole - 18mm Slotted Inside Corner Bracket with Dual Support</td><td>80/20</td><td>14061</td><td>Aantal: 6</td></tr><tr><td>10 Series 3 Hole - Straight Flat Plate</td><td>80/20</td><td>4118</td><td>Aantal: 8</td></tr><tr><td>10 Series 5 Hole - "L" Flat Plate</td><td>80/20</td><td>4081</td><td>Aantal: 8</td></tr><tr><td>10 Series 5 Hole - "T" Flat Plate</td><td>80/20</td><td>4080</td><td>Aantal: 8</td></tr><tr><td>10 Series 5 Hole - Tee Flat Plate</td><td>80/20</td><td>4140</td><td>Aantal: 2</td></tr><tr><td>10 Series Standard Lift-Off Hinge - Right Hand Assembly</td><td>80/20</td><td>2064</td><td>Aantal: 2</td></tr><tr><td>10 to 15 Series 2 Hole - Lite Transition Inside Corner Bracket</td><td>80/20</td><td>4509</td><td>Aantal: 6</td></tr><tr><td>24&rdquo;-long UV tube lights</td><td>ADJ Products LLC</td><td>T8-F20BLB24</td><td>Aantal: 2 20W bulb &ndash; 24&rdquo; Wavelength: 365nm</td></tr><tr><td>Acrylic Mirror Sheet</td><td>Profesional Plastics</td><td></td><td>Aantal: 1 82.5 cm x 26.5 cm</td></tr><tr><td>Acrylic Mirror Sheet</td><td>Profesional Plastics</td><td></td><td>Aantal: 2 26.5 cm X 30.5 cm</td></tr><tr><td>Acrylic Mirror Sheet</td><td>Profesional Plastics</td><td></td><td>Aantal: 2 82.5 cm x 30.5 cm</td></tr><tr><td>AR polycarbonate (UV resistance)</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>Aantal: 2 4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 26.5 cm</td></tr><tr><td>AR polycarbonate (UV resistance)</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 21.5 cm</td></tr><tr><td>AR polycarbonate (UV resistance)</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear, 26.5 cm x 21.5 cm</td></tr><tr><td>AR polycarbonate (UV resistance)</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear 37.5 cm x 23.9 cm</td></tr><tr><td>AR polycarbonate (UV resistance)</td><td>80/20</td><td>65-2641</td><td>Aantal: 4 4.5mm Thick, Clear, 24.4 cm x 23.9 cm</td></tr><tr><td>Chromatography paper (thin paper)</td><td>&nbsp;Thermo Fisher Scientific</td><td>57144</td><td></td></tr><tr><td>Cosmos blotting paper (thick paper)</td><td>Blick Art Materials</td><td>10422-1005</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software</td><td>Version 9.4.0</td><td>graphing and statistics software</td></tr><tr><td>ImageJ FIJI</td><td>NIH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Merck</td><td></td><td>transparent film</td></tr><tr><td>Quick Time Player 10.5 software&nbsp;</td><td>Apple</td><td></td><td>multimedia player</td></tr><tr><td>Security spy</td><td>Ben software</td><td></td><td>video surveillance software system</td></tr><tr><td>Standard End Fastener, 1/4-20</td><td>80/20</td><td>3381</td><td>Aantal: 80</td></tr><tr><td>UV transmitting acrylic</td><td>Spartech</td><td>Polycast Solacryl SUVT</td><td>Aantal: 2 38.5 cm x 26.5 cm&nbsp;</td></tr><tr><td>Water gel: HydroGel</td><td>ClearH2O&nbsp;</td><td>&nbsp;70-01-5022</td><td>(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)</td></tr><tr><td>Webcam</td><td>Logitech</td><td>C930e</td><td>Aantal: 4</td></tr></tbody></table>

real-time void spot assay

Real-Time Void Spot Assay

Normaal ledigingsgedrag is het resultaat van de gecoördineerde functie van de blaas, de urethra en de urethrale sluitspieren onder de juiste controle van het zenuwstelsel. Om vrijwillig ledigingsgedrag in muismodellen te bestuderen, hebben onderzoekers de void spot assay (VSA) ontwikkeld, een methode die het aantal en de oppervlakte van urinevlekken meet die zijn afgezet op een filterpapier dat de vloer van de kooi van een dier bekleedt. Hoewel technisch eenvoudig en goedkoop, heeft deze test beperkingen wanneer deze wordt gebruikt als een eindpunttest, waaronder een gebrek aan tijdelijke oplossing van ledigingsgebeurtenissen en problemen met het kwantificeren van overlappende urinevlekken. Om deze beperkingen te overwinnen, hebben we een video-bewaakte VSA ontwikkeld, die we real-time VSA (RT-VSA) noemen, en waarmee we de ledigingsfrequentie kunnen bepalen, het lege volume en de ledigingspatronen kunnen beoordelen en metingen kunnen doen over 6 uur tijdvensters tijdens zowel de donkere als de lichte fase van de dag. De methode die in dit rapport wordt beschreven, kan worden toegepast op een breed scala aan op muizen gebaseerde studies die de fysiologische en neurobehaviorale aspecten van vrijwillige mictie in gezondheids- en ziektetoestanden onderzoeken.

Ledigingsgedrag van urotheliale piëzo1/2 knock-out muizen
Tijdens de opslagfase van de mictiecyclus wordt verondersteld dat het urotheel de spanning waarneemt die wordt uitgeoefend door de urine die zich in de blaas heeft opgehoopt en om deze mechanische stimulus om te zetten in cellulaire reacties zoals serosale ATP-afgifte 1,3. We hebben eerder aangetoond dat mechanisch geactiveerde PIEZO1- en PIEZO2-kanalen...

Dit artikel beschrijft een nieuwe methode om het ledigingsgedrag van muizen te bestuderen door videobewaking op te nemen in de conventionele void spot-assay. Deze benadering biedt tijdelijke, ruimtelijke en volumetrische informatie over de ledigingsgebeurtenissen en details van muisgedrag tijdens de lichte en donkere fasen van de dag.

Normal voiding behavior is the result of the coordinated function of the bladder, the urethra, and the urethral sphincters under the proper control of the ...

De methode die in dit rapport wordt beschreven, kan worden gebruikt om fysiologische en neuro-gedragsaspecten van vrijwillige mictie in gezondheids- en ziektetoestanden te begrijpen. Deze techniek stelt ons in staat om het gedrag van het muisvolume in de lichte en donkere fasen van de dag te volgen en biedt tijdelijke, ruimtelijke en volumetrische informatie over voiding-gebeurtenissen. Om een real-time void spot assay of RT-VSA-opnamekamer voor te bereiden, plaatst u een dun of dik filterpapier, afhankelijk van het tijdstip van de dag, op de bodem van de RT-VSA-opnamekooi.Plaats bovenop het filtreerpapier een plastic iglo voor de slaapruimte;een steriele microcentrifugebuis van 1,5 ml voor verrijkingsdoeleinden;en een plastic schaal van 60 mm x 15 mm met twee of drie stukjes muisdroge chow;en 14 tot 16 gram water in de vorm van een gelverpakking. Zodra de opnamekamer klaar is, plaatst u de muis voorzichtig op het filterpapier. Zorg ervoor dat de overdracht van de muis van de behuizingskooi naar de opnamekooi met minimale stress plaatsvindt.Zodra de muis zich in de opnamekooi bevindt, plaatst u het deksel en bedek u de bovenkant van het deksel met een absorberende blauwe pad om directe reflecties van omgevingslicht op het oppervlak van het plexiglas deksel te minimaliseren. Schakel de ultraviolette lichten in de onderste kamer in. Als u RT-VSA-video van de bovenste en onderste camera's wilt opnemen, gebruikt u videobewakingsopnamesoftware die is geconfigureerd om tegelijkertijd op te nemen van meerdere webcams of netwerkcamera's.Start de opname door op Cmd R in het programmavenster te drukken. Voer video-opnamen uit met één frame per seconde. Onmiddellijk na het initiëren van de opnames, verlaat u de kamer en sluit u de deur voorzichtig.Zorg ervoor dat de ruimte stil blijft gedurende het hele experiment. Stop de opnames door op Cmd T te drukken.Schakel de ultraviolette lichten uit. Na het stoppen van de opname genereert de software automatisch een filmbestand in m4v-indeling voor elke camera en slaat het op onder de naam van de camera in een eerder geselecteerde doelmap.Controleer of de experimenten in de map van elke camera zijn geordend in mappen op datum. Controleer in elke datum- of experimentmap of er één m4v-bestand is en alle afzonderlijke JPEG-bestanden die overeenkomen met elk filmframe. Maak een map op het bureaublad met de naam en datum van het experiment en breng de m4v-bestanden over naar deze map.Kopieer de filmmap naar een flashstation voor analyse op een externe computer. Open een filmbestand dat is verzameld door de onderste camera tijdens de lichte fase of de bovenste camera tijdens de donkere fase voor analyse. Nadat u de kwaliteit van de film hebt beoordeeld, analyseert u experimenten door naar het juiste tijdvenster te gaan met de opdracht vooruitspoelen of de schuifregelaar voor de tijdbalk.Leegmakende activiteit tijdens de lichtfase wordt geregistreerd tussen 11:00 en 17:00 uur en tijdens de donkere fase, tussen middernacht en 06:00 uur. Speel de film af in de fast forward-modus door op het fast forward-pictogram te klikken of blader handmatig door de film, op zoek naar bewijs dat de muis leegloopt. Let op het plotseling verschijnen van heldere urinevlekken op het filterpapier of de gedragsveranderingen, waaronder beweging naar de hoeken van de kooi en een korte periode van inactiviteit wanneer de muis leegloopt. Registreer het tijdstip waarop elke leegte optreedt.Als conventie wordt de tijd van de leegte geregistreerd bij het eerste teken dat de urine wordt gedetecteerd. Om de leegte te meten, gebruikt u eerst de schuifbalk om vooruit of achteruit in de tijd te gaan, op zoek naar het punt waarop maximale diffusie van de urinevlek heeft plaatsgevonden. Pauzeer de film op dit punt en plaats de pijl van de computermuis op de plek die wordt geanalyseerd om de interessante plek in de schermafbeelding te markeren.Geef het screenshotbestand een naam met behulp van correlatieve getallen om rekening te houden met de volgorde van verschijning in de film. Zodra alle lege plekken zijn geanalyseerd, meet u de totale oppervlakte van het filterpapier door een screenshot te maken en de rand van het filterpapier af te bakenen. Bereken het percentage oppervlakte van elk van de urinevlekken.Transformeer de waarden van het procentuele gebied in het volume urine voor elke lege plek met behulp van de kalibratiecurven en de interpolatiefunctie in de grafische software. Het ledigingsgedrag van vrouwelijke en mannelijke Piezo1, 2, knock-out en controlemuizen werd geregistreerd tijdens de donkere en lichte fase van de dag. Tijdens hun inactieve lichtfase werden geen significante verschillen waargenomen in parameters die werden geanalyseerd voor vrouwelijke of mannelijke knock-outmuizen in vergelijking met de controle.In de actieve donkere fase vertoonden vrouwelijke en mannelijke knock-outmuizen echter een veranderd voiding-fenotype, gekenmerkt door een significante toename van het aantal en het totale volume van kleine lege plekken. Er waren geen significante verschillen in primaire holteplekken of PVS-aantal, gemiddeld volume per PVS of totaal PVS-volume bij vrouwelijke of mannelijke knock-outmuizen in vergelijking met de controlemuizen. Het ledigingsgedrag van vrouwelijke muizen werd getest onder basale omstandigheden en na behandeling met cyclofosfamide.In vergelijking met de basale omstandigheden is de hoeveelheid urineafgifte per leegte kleiner na behandeling met cyclofosfamide en komen de mictiegebeurtenissen veel vaker voor. Een belangrijk aspect voor de reproduceerbaarheid van de test is om de dieren zo voorzichtig mogelijk te manipuleren en ze gedurende de hele testperiode onder minimale stress te houden. Omdat dit een niet-invasieve test is, kunnen daarna aanvullende procedures worden uitgevoerd, waaronder cytometrie en elektromyografie om respectievelijk blaas- en externe urethrasfincterfuncties te beoordelen.Door deze techniek te implementeren, kunnen onderzoekers de bijdrage van specifieke paden aan het ledigingsgedrag in gezondheids- en ziektetoestanden definiëren.

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

Identificatie van microbiële doelstellingen van adaptieve immuniteit in idiopathische ziekte kan worden bewerkstelligd door het gebruik van het enzym-linked immunospot assay.

Enzyme-linked immunospot Assay (ELISPOT): Kwantificering van de Th-1 cellulaire immuunreacties tegen microbiële antigenen

We beschrijven een methode voor de kwantitatieve, real-time meting van DNA glycosylase en AP endonuclease activiteiten in cel nucleaire lysaten. De test levert de tarieven van de DNA-reparatie-activiteit vatbaar zijn voor kinetische analyse en is aanpasbaar voor de kwantificering van DNA Repair activiteit in weefsel en tumor lysaten of met gezuiverde eiwitten.

Kwantitatieve, real-time analyse van Base excisie reparatie Activiteit in Cellysaten gebruik te maken van laesie-specifieke moleculaire Beacons

This video demonstrates the differential radial capillary action of ligand assay — a technique for systematic high-throughput screening of intracellular nucleotide second messenger-binding proteins. This technique allows for direct binding of the messengers to the overexpressed target protein in the cell lysate — bypassing the need for protein purification.

Differential Radial Capillary Action of Ligand Assay: A High-Throughput Technique to Identify Bacterial Nucleotide Second Messenger-Binding Intracellular Proteins

We tonen een module chiptechnologie voor het uitvoeren van cross-country-reactivity-vrije multiplexed sandwich-immunoassay door simpelweg twee dia's uitlijnen. Een apparaat module wordt gebruikt voor het op betrouwbare wijze overbrengen van reagentia van microarray-naar-microarray. De module-chip kan worden gebruikt voor alle biochemische reacties vereisen colocalization van verschillende reagentia zonder kruisbesmetting.

Snap Chip voor cross-country-reactivity-gratis en Spotter-gratis Multiplexed Sandwich-immunoassay

Een niet-label niet-radio-isotopische methode voor DNA-polymerase proeflezen en een DNA repair assay werd ontwikkeld met behulp van hoge-resolutie MALDI-TOF massa spectrometrie en een strategie voor de uitbreiding van één nucleotide. De test bleek te zijn van de zeer specifieke, eenvoudig, snel en gemakkelijk uit te voeren voor het proeflezen en reparatie patches korter dan 9-nucleotiden.

Proeflezen en DNA Repair Assay met behulp van één Nucleotide uitbreiding en MALDI-TOF massa spectrometrie analyse

Hier beschrijven we een methode voor de zuivering van histidine-gelabelde pyrophosphokinase enzymen en met behulp van Dunnelaagchromatografie van radioactief gelabelde substraten en producten voor de enzymatische activiteit in vitroassay. De enzym activiteit bepaling geldt in grote lijnen aan kinase, nucleotide cyclase, of fosfor-overdracht reactie waarvan mechanisme nucleotide trifosfaat hydrolyse omvat.

Een zuivering en In Vitro activiteit Assay voor een (p) ppGpp Synthetase van Clostridium difficile

Hier vertegenwoordigen we een protocol voor de volautomatische radioactieve labeling van [11C] SNAP-7941 en de analyse van de real-time kinetiek van deze pet-Tracer op P-GP die cellen uitdrukt en niet uitdrukt.

Technisch aspect van de geautomatiseerde synthese en real-time kinetische evaluatie van [11C] SNAP-7941

We introduceren een protocol voor het meten van real-time reactie van geneesmiddelen in organotypic tumorweefsel plakjes. De hier geschetste experimentele strategie biedt een platform voor het uitvoeren van medium-high throughput drug schermen op weefselsegmenten afgeleid van klinische of muistumoren in ex vivo omstandigheden.

Het meten van real-time drug respons in organotypic Tumor Tissue Slices

Dit protocol presenteert een snelle antimicrobiële gevoeligheidstest (ASAT) binnen 2,5 uur door eencellige gestimuleerde Raman-verstrooiingsbeeldvorming van het D2O-metabolisme. Deze methode is van toepassing op bacteriën in de urine of volbloedomgeving, die transformerend is voor snelle eencellige fenotypische ASAT in de kliniek.

Snelle antimicrobiële gevoeligheidstests door gestimuleerde Raman-verstrooiing Beeldvorming van deuteriumincorporatie in een enkele bacterie

Een niet-gelabelde, niet-radio-isotopische methode om uracil-DNA glycosylase activiteit te testen werd ontwikkeld met behulp van MALDI-TOF massaspectrometrie voor directe apurine / apyrimidinische site-bevattende productanalyse. De test bleek vrij eenvoudig, specifiek, snel en gemakkelijk te gebruiken voor DNA-glycosylasemeting.

Uracil-DNA Glycosylase Assay door Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry Analysis

We beschrijven een recent ontwikkeld immunoassayplatform gebaseerd op de principes van celvrije synthetische biologie en de dot-blot-techniek voor aanpasbare detectie van antilichaamrespons in menselijke en dierlijke sera.

Celvrije dot blot als een praktisch en aanpasbaar immunoassayplatform voor de detectie van antilichaamrespons in menselijke en dierlijke sera

Leer de real-time void spot assay om muisplasgedrag te bestuderen met videobewaking. Deze methode verzamelt tijdelijke, ruimtelijke en volumetrische gegevens over plasevents tijdens licht- en donkere fasen.

Real-Time Void Spot Assay

Meer video's verkennen