Neonatale beenmergisolatie bij muizen en bereiding van van beenmerg afgeleide macrofagen
May 24th, 2024
Dit protocol beschrijft een niet-enzymatische en eenvoudige methode voor het isoleren van 7-9 dagen oude neonatale beenmergcellen van muizen en het genereren van gedifferentieerde macrofagen met behulp van een supernatans van L929-cellen als bron van granulocytkoloniestimulerende factor (M-CSF). De van beenmerg afgeleide macrofagen werden verder geanalyseerd op oppervlakteantigenen F4/80, CD206, CD11b en functionele competentie.
Het doel van deze studie is om enkele van de beperkingen in de immuunrespons van het vroege leven op bacteriële infectie te begrijpen. Om dit te bereiken, moeten we onderzoeksmodellen ontwikkelen en gebruiken die specifiek zijn voor pasgeborenen. Isolatie van beenmerg van een pup van een dag zeven oud is uitdagend en niet goed ingeburgerd.
Neonatale van beenmerg afgeleide macrofagen zijn gevoelig en vatbaar voor stress in vergelijking met andere BMDM's. De techniek die in dit protocol wordt gebruikt, is eenvoudig en reproduceerbaar. Deze methode begeleidt de gebruikers bij het isoleren van beenmerg van zeven tot negen dagen oude neonatale muizen zonder het gebruik van enzymen.
Deze studie biedt een gestandaardiseerde strategie om van beenmerg afgeleide macrofagen van neonatale muizen te genereren die kunnen worden gebruikt om vragen over neonatale immunologie te beantwoorden. Deze reproduceerbare methode biedt een leeftijdsspecifiek model voor het bevorderen van neonataal immuunonderzoek op vele expertisegebieden.
Overzicht
Dit protocol beschrijft een niet-enzymatische methode voor het isoleren van neonatale muizen beenmergcellen en het genereren van gedifferentieerde macrofagen. De studie richt zich op de uitdagingen van het werken met 7-9 dagen oude neonatale muizen en de gevoeligheid van hun beenmerg-afgeleide macrofagen.
Belangrijke Studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschap
- Immunologie
- Celbiologie
Achtergrond
- Begrip van vroege levens immuunresponsen op bacteriële infecties.
- Uitdagingen bij het isoleren van beenmerg van neonatale muizen.
- Neonatale beenmerg-afgeleide macrofagen zijn gevoelig en vatbaar voor stress.
- Bevallige voor herhaalbare technieken in neonatale onderzoek.
Doel van het onderzoek
- Om een betrouwbare methode te ontwikkelen voor het isoleren van beenmerg van neonatale muizen.
- Om functionele macrofagen te genereren voor onderzoek naar immuunresponsen.
- Om het begrip van neonatale immuunresponsen te verbeteren.
Gebruikte Methoden
- Isolatie van beenmerg van 7-9 dagen oude neonatale muizen.
- Niet-enzymatische techniek voor celisolatie.
- Gebruik van L929 celsupernatant als bron van M-CSF.
- Analyse van oppervlakteantigenen en functionele competentie van macrofagen.
Belangrijkste Resultaten
- Succesvolle isolatie van neonatale beenmerg-afgeleide macrofagen.
- Karakterisering van macrofagen met behulp van oppervlakteantigenen F4/80, CD206 en CD11b.
- Demonstratie van functionele competentie in gegenereerde macrofagen.
- Validatie van de methode als eenvoudig en reproduceerbaar.
Conclusies
- Het protocol biedt een betrouwbare methode voor het bestuderen van neonatale immuunresponsen.
- Geïsoleerde macrofagen kunnen worden gebruikt voor verder immunologisch onderzoek.
- Deze techniek kan bijdragen aan vooruitgang in neonatale gezondheidsstudies.
Veelgestelde Vragen
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:10
Non‐Enzymatic Method for Isolating Neonatal Mouse Bone Marrow Cells
2:42
Differentiation of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Supernatant of L929 Cells
4:37
Assessing Phagocytic Function of Neonatal Bone Marrow‐Derived Macrophages Using a Fluorescent Bacterial Uptake Assay
